Protoplasts were isolated from two

Protoplasts were isolated from two types of organs, leaves with petioles from 3 to 4 week-old carrot plantlets and hypocotyls from 2 week-old seedlings using the protocol of Baranski et al. (2007), but with some modifications. In details, about 1 g of tissue was placed in a glass Petri dish with 8 ml of preplasmolysis solution (0.5 M mannitol), cut into fine pieces and then incubated for 1 h in the dark at 26 ± 2°C. Tissue digestion was performed overnight at 26 ± 2°C with gently shaking (30 rpm) in enzyme mixture consisting of 1% (w/v) cellulase Onozuka R-10 (Duchefa), 0.1% (w/v) pectolyase Y-23 (Duchefa), 20 mM 2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid (MES, Sigma), 5 mM CaCl2, and 0.6 M mannitol (Sigma), pH 5.6, filter-sterilized (0.22 μm, Millipore). The released protoplasts were separated from undigested tissue by filtration through a 80 μm nylon sieve (Millipore) and centrifuged at 100 g for 5 min. The pellet was resuspended in 8 ml of 0.5 M sucrose with 1 mM MES and overlaid with 2 ml of W5 medium (Menczel et al. 1981).

Kết quả (Việt) 1:

Protoplasts bị cô lập từ hai loại cơ quan, lá có cuống lá từ 3 đến 4 tuần tuổi cà rốt plantlets và hypocotyls từ 2 tuần tuổi cây con, bằng cách sử dụng các giao thức của Baranski et al. (2007), nhưng với một số sửa đổi. Trong chi tiết, khoảng 1 g moâ đã được đặt trong một ly Petri dish với 8 ml preplasmolysis giải pháp (0,5 M mannitol), cắt thành miếng tốt và sau đó ủ cho 1 h trong bóng tối lúc 26 ± 2° C. Mô tiêu hóa được thực hiện qua đêm tại 26 ± 2° C với nhẹ nhàng lắc (30 vòng/phút) vào hỗn hợp men tiêu hóa bao gồm 1% (w/v) cellulase Onozuka R-10 (Duchefa), 0,1% (w/v) pectolyase Y-23 (Duchefa), 20 mM 2 - axit ethanesulfonic (N-Morpholino) (MES, Sigma), 5 mM CaCl2, và 0,6 M mannitol (Sigma), pH 5,6, lọc khử trùng (0,22 μm, Millipore). Protoplasts phát hành đã được tách ra từ mô không tiêu hóa bằng cách lọc qua một 80 μm nylon sàng (Millipore) và ly 100 g cho 5 phút. Miếng đã được resuspended trong 8 ml 0.5 M Sucroza với 1 mM MES và che với 2 ml W5 vừa (Menczel et al. 1981).

Kết quả (Việt) 2:

Bào trần được phân lập từ hai loại cơ quan, lá có cuống lá từ 3 đến cây giống cà rốt và thân mầm 4 tuần tuổi từ cây giống 2 tuần tuổi bằng cách sử dụng giao thức của Baranski et al. (2007), nhưng với một số sửa đổi. Cụ thể, khoảng 1 g mô đã được đặt trong một ly Petri món ăn với 8 ml dung dịch preplasmolysis (0,5 M mannitol), cắt thành miếng tốt và sau đó ủ trong 1 giờ trong bóng tối ở 26 ± 2 ° C. tiêu hóa mô được thực hiện qua đêm ở 26 ± 2 ° C với lắc nhẹ (30 rpm) trong hỗn hợp enzyme gồm 1% (w / v) cellulase Onozuka R-10 (Duchefa), 0,1% (w / v) pectolyase Y-23 (Duchefa), 20 mM 2- (N-Morpholino) axit ethanesulfonic (MES, Sigma), 5 mM CaCl2, và 0,6 M mannitol (Sigma), pH 5.6, bộ lọc tiệt trùng (0,22 mm, Millipore). Các tế bào trần phát hành đã được tách ra từ các mô không tiêu hóa bằng cách lọc qua một 80 mm nylon rây (Millipore) và ly tâm ở 100 g trong 5 phút. Các viên đã lơ lửng trong 8 ml 0,5 M sucrose với 1 mM MES và phủ lên bằng 2 ml W5 vừa (Menczel et al. 1981).