Nucleic acid recognition methods PC

Nucleic acid recognition methods
PCR is more sensitive than conventional and immunological assays for detecting oocysts in faeces, although the sensitivity of published methods can range between 1 and 106 oocysts. These techniques are often restricted to specialist laboratories. Care is necessary when choosing primers, as some primers amplify genus-specific DNA whereas others amplify species-specific DNA. Prior to routine adoption in clinical laboratories, both the variability between methods and the recognised difficulties in amplifying nucleic acids from faecal specimens by PCR must be overcome.
Faecal samples can contain many PCR inhibitors. In addition to bilirubin and bile salts, complex polysaccharides are also significant inhibitors. For Cryptosporidium, boiling faecal samples in 10% polyvinylpolypyrrilidone (PVPP) before extraction can reduce inhibition.
The most robust information regarding species/genotype/subtype information has been derived from the study of three genetic loci (two 18S rRNA [18, 24, 45, 46] and the Cryptosporidium Oocyst Wall Protein [COWP] [15, 38]) gene fragments by PCR-RFLP and/or sequencing amplicons

Kết quả (Việt) 1:

Các phương pháp nhận dạng axit nucleic PCR là nhạy cảm hơn so với thông thường và miễn dịch thử nghiệm để phát hiện oocysts trong phân, mặc dù độ nhạy của phương pháp này được công bố có thể dao động giữa 1 và 106 oocysts. Các kỹ thuật này thường được giới hạn trong phòng thí nghiệm của chuyên gia. Chăm sóc là cần thiết khi lựa chọn các chất nền, mồi, như một số chất nền, mồi khuyếch đại cụ thể chi DNA trong khi những người khác khuếch đại species-specific DNA. Trước khi nhận con nuôi thường xuyên trong phòng thí nghiệm lâm sàng, cả sự biến đổi giữa các phương pháp và những khó khăn được công nhận ở khuyếch đại axit nucleic từ các mẫu vật faecal bởi PCR phải được khắc phục. Faecal mẫu có thể chứa nhiều PCR ức chế. Ngoài bilirubin và các muối mật, polysaccharides phức tạp cũng là ức chế đáng kể. Cho Cryptosporidium, sôi faecal mẫu trong 10% polyvinylpolypyrrilidone (PVPP) trước khi khai thác có thể làm giảm sự ức chế. Thông tin mạnh mẽ nhất về kiểu gen/loài Phiên bản thông tin đã được xuất phát từ nghiên cứu của 3 mảnh vỡ gen di truyền loci (hai 18S rRNA [18, 24, 45, 46] và Cryptosporidium Oocyst tường Protein [COWP] [15, 38]) bằng PCR-RFLP và/hoặc trình tự amplicons

Kết quả (Việt) 2:

Phương pháp nhận dạng axit nucleic
PCR nhạy hơn xét ​​nghiệm thông thường và miễn dịch để phát hiện kén hợp tử trong phân, mặc dù độ nhạy của phương pháp được công bố có thể dao động giữa 1 và 106 oocyst. Những kỹ thuật này thường giới hạn trong các phòng thí nghiệm chuyên khoa. Chăm sóc là cần thiết khi lựa chọn mồi, như một số mồi khuếch đại DNA chi cụ thể trong khi những người khác khuếch đại DNA loài cụ thể. Trước khi áp dụng thường xuyên trong các phòng thí nghiệm lâm sàng, cả hai sự thay đổi giữa các phương pháp và những khó khăn trong công nhận khuếch đại acid nucleic từ các mẫu phân bằng phương pháp PCR phải được khắc phục.
Mẫu cặn bẩn có thể chứa nhiều chất ức chế PCR. Ngoài bilirubin và mật muối, polysaccharides phức tạp cũng là chất ức chế đáng kể. Đối với Cryptosporidium, sôi mẫu phân ở 10% polyvinylpolypyrrilidone (PVPP) trước khi khai thác có thể làm giảm sự ức chế.
Các thông tin mạnh mẽ nhất về loài / kiểu gen / thông tin kiểu phụ đã được bắt nguồn từ nghiên cứu của ba locus gen (hai 18S rRNA [18, 24, 45 , 46] và Cryptosporidium kén hợp tử tường Protein [COWP] [15, 38]) mảnh gene bằng PCR-RFLP và / hoặc trình tự amplicon