To isolate a specific gene, one oft

To isolate a specific gene, one often begins by constructing a DNA library— a comprehensive collection of cloned DNA fragments from a cell, tissue, or organism. This library includes (one hopes) at least one fragment that contains the gene of interest. Libraries can be constructed with either a virus or a plasmid vector and are generally housed in a population of bacterial cells. The principles underlying the methods used for cloning genes are the same for either type of cloning vector, although the details may differ. Today, most cloning is performed with plasmid vectors.
The plasmid vectors most widely used for gene cloning are small circular molecules of double-stranded DNA derived from larger plasmids that occur nat-urally in bacterial cells. They generally account for only a minor fraction of the total host bacterial cell DNA, but they can easily be separated owing to their small size from chromosomal DNA molecules, which are large and precipitate as a pellet upon centrifugation. For use as cloning vectors, the purified plasmid DNA circles are first cut with a restriction nuclease to create linear DNA molecules. The genomic DNA to be used in constructing the library is cut with the same restriction nuclease, and the resulting restriction fragments (including those containing the gene to be cloned) are then added to the cut plasmids and annealed via their cohesive ends to form recombinant DNA circles. These recombinant molecules containing foreign DNA inserts are then covalently sealed with the enzyme DNA ligase (Figure 8-39).

Kết quả (Việt) 1:

Cô lập một gen cụ thể, một thường bắt đầu bằng cách xây dựng một thư viện DNA — một bộ sưu tập toàn diện của nhân bản DNA mảnh tế bào, mô hoặc sinh vật. Thư viện này bao gồm (hy vọng một) ít nhất một mảnh vỡ chứa các gen quan tâm. Thư viện có thể được xây dựng với một loại virus hoặc một plasmid vector và thường nằm trong dân số tế bào vi khuẩn. Các nguyên tắc cơ bản phương pháp được sử dụng cho nhân bản gen là giống nhau cho cả hai loại nhân bản vector, mặc dù các chi tiết có thể khác nhau. Hôm nay, hầu hết nhân bản được thực hiện với các plasmid vectơ.Các vectơ plasmid được sử dụng rộng rãi nhất cho gen nhân bản là phân tử nhỏ tròn đôi-stranded DNA có nguồn gốc từ một plasmid lớn hơn xảy ra nat urally trong tế bào vi khuẩn. Họ thường tài khoản cho chỉ là một phần nhỏ của tế bào vi khuẩn tổng chủ DNA, nhưng họ có thể dễ dàng được tách ra do kích thước nhỏ của họ từ phân tử ADN nhiễm sắc thể, lớn và precipitate như là một viên theo số. Để sử dụng như nhân bản vectơ, vòng tròn DNA plasmid tinh khiết đầu tiên được cắt với một nuclease hạn chế để tạo ra các phân tử ADN tuyến tính. DNA gen sẽ được sử dụng trong việc xây dựng các thư viện được cắt với cùng một hạn chế nuclease, và các mảnh vỡ hạn chế kết quả (bao gồm cả những người có chứa gen để được nhân bản) sau đó được thêm vào các plasmid cắt và annealed thông qua kết thúc họ cố kết đến dưới hình thức tái tổ hợp DNA vòng tròn. Những phân tử tái tổ hợp chứa nước ngoài DNA chèn một sau đó được niêm phong với enzyme DNA ligase (con số 8-39).

Kết quả (Việt) 2:

Để phân lập một gen cụ thể, người ta thường bắt đầu bằng việc xây dựng một DNA library- một bộ sưu tập toàn diện của các đoạn ADN được nhân bản từ một tế bào, mô, hoặc sinh vật. Thư viện này bao gồm (một hy vọng) ít nhất một đoạn có chứa các gen quan tâm. Thư viện có thể được xây dựng với một trong hai một virus hoặc một vector plasmid và thường được đặt trong một quần thể tế bào vi khuẩn. Các nguyên tắc cơ bản của phương pháp được sử dụng để nhân bản gen là như nhau cho cả hai loại vector nhân bản, mặc dù các chi tiết có thể khác nhau. Ngày nay, hầu hết các nhân bản được thực hiện với vectơ plasmid.
Các vectơ plasmid sử dụng rộng rãi nhất cho nhân bản gen là các phân tử nhỏ tròn của DNA sợi đôi có nguồn gốc từ plasmid lớn xảy ra nat-urally trong các tế bào vi khuẩn. Họ thường chỉ chiếm một phần nhỏ nhỏ trong tổng số máy chủ DNA tế bào vi khuẩn, nhưng họ có thể dễ dàng tách ra do kích thước nhỏ của họ từ các phân tử DNA nhiễm sắc thể, phát sinh lớn, kết tủa như một viên sau khi ly tâm. Để sử dụng như vectơ tách dòng, vòng tròn DNA plasmid tinh khiết đầu tiên được cắt bằng một nuclease hạn chế để tạo ra các phân tử DNA tuyến tính. Các DNA sẽ được sử dụng trong việc xây dựng thư viện được cắt với nuclease hạn chế tương tự, và các mảnh vỡ hạn chế kết quả (bao gồm cả những người có chứa các gen được nhân bản) sau đó được thêm vào plasmid cắt và ủ qua đầu gắn kết của họ để tạo thành ADN tái tổ hợp vòng tròn. Những phân tử tái tổ hợp chứa chèn DNA nước ngoài sau đó được đồng hóa trị niêm phong với ligase DNA enzyme (Hình 8-39).