DNA Extraction, PCR assay, Gel elec

DNA Extraction, PCR assay, Gel electrophoresis, and DNA sequencing
One liter of samples was filtered through 0.22 μm mixed cellulose ester membrane filters (Schleicher & Schuell) in a stainless-steel filter holder with a water aspirator. Each membrane was aseptically scraped, cut into smaller pieces and placed into sterile, screw-capped containers with 10 ml of the original sample. The samples were then sonicated for 5 min (Bandelin Sonorex) at 35 KHz and shaken for 15 min to dislodge bacterial cells from the membranes. The elute was transferred into a 15 mL conical centrifuge tube and centrifuged (2000 g, 20 min) to remove cell debris. Total DNA was extracted from concentrated water samples using two classic manual methods: freeze & thaw and phenol-chloroform as well as two commercial DNA extraction kits: Flexi Gen DNA Kit Qiagen (Hilden, Germany) and Bioneer Accuprep Genomic DNA Kit according to the manufacture's instruction. Table 1 shows the characteristics of these DNA extraction kits.

Kết quả (Việt) 1:

Khai thác DNA, Đảng Cộng sản Romania khảo nghiệm, Gel điện và trình tự DNAMột lít mẫu được lọc qua 0,22 μm trộn bộ lọc màng ester cellulose (Schleicher & Schuell) trong một chủ bộ lọc thép không gỉ với một lọ nước. Mỗi màng aseptically được cạo, cắt thành từng miếng nhỏ và đặt vào thùng chứa vô trùng, mũ vít với 10 ml của mẫu ban đầu. Các mẫu sau đó đã được sonicated cho 5 phút (Bandelin Sonorex) tại 35 KHz và rung động cho 15 phút để đuổi ra các tế bào vi khuẩn từ các màng. Elute đã được chuyển thành một 15 mL máy ly tâm hình nón ống và ly (2000 g, 20 phút) để loại bỏ mảnh vỡ tế bào. Tất cả DNA được chiết xuất từ nước tập trung mẫu bằng cách sử dụng hai phương pháp cổ điển thủ công: đóng băng và tan băng và cloroform phenol cũng như hai bộ dụng cụ khai thác thương mại DNA: Flexi Gen DNA Kit Qiagen (Hilden, Đức) và Bioneer Accuprep gen DNA Kit theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Bảng 1 cho thấy các đặc tính của các bộ dụng cụ khai thác DNA.

Kết quả (Việt) 2:

DNA chiết, xét nghiệm PCR, Gel điện di, và giải trình tự DNA
Một lít mẫu được lọc qua màng lọc 0,22 mm cellulose ester hỗn hợp (Schleicher & Schuell) trong một ngăn lọc bằng thép không gỉ với một máy hút bụi nước. Mỗi màng đã được vô trùng cạo, cắt thành miếng nhỏ và đặt vào, container vít trắng vô trùng với 10 ml của mẫu ban đầu. Các mẫu sau đó âm trong 5 phút (Bandelin Sonorex) ở 35 KHz và lắc trong 15 phút để đánh bật các tế bào vi khuẩn từ màng. Việc rửa giải được chuyển vào một ống ly tâm 15 mL hình nón và ly tâm (2000 g, 20 phút) để loại bỏ các mảnh vỡ tế bào. Tổng số DNA được chiết xuất từ các mẫu nước tập trung sử dụng hai phương pháp cổ điển sử dụng: đóng băng và tan băng và phenol-chloroform cũng như hai bộ dụng cụ tách chiết DNA thương mại: Flexi Gen DNA Kit Qiagen (Hilden, Đức) và Bioneer Accuprep ADN hệ gen Kit theo của nhà sản xuất hướng dẫn. Bảng 1 cho thấy các đặc điểm của các bộ dụng cụ tách chiết DNA.