Neutrophils (1310 cells / ml) were

Neutrophils (1
3
10 cells / ml) were incubated in 1 ml of KRP containing 1
mmol / l CaCl , 10 mmol / l glucose and 0–100 mmol / l of timosaponins E1 and
2
E2 for 3 min at 37
8
C, and then 0.5 ml of ice-cold 45% trichloroacetic acid (final
concentration, 15%) containing 1 mmol / l sodium vanadate and 2 mmol / l
phenylmethylsulfonylfluoride was added to stop the reaction. After incubation
for 30 min at 4
8
C, the mixture was centrifuged at 10,000
g
for 15 min at 4
8
C.
The precipitate was washed twice with ice-cold diethyl ether–ethanol (1:1, v / v),
dissolved in 50 ml of 62.5 mmol / l Tris–HCl (pH 6.8) containing 2% sodium
dodecyl sulfate (SDS), 0.7 mol / l
b
-mercaptoethanol and 10% glycerol and was
subjected to SDS–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE) using a
7.5% gel [24]. The electrophoresed proteins were transferred onto Immobilon-P
membranes (Nippon Millipore) using a semidry blotting apparatus (Sartorius)
2
for 60 min at 2 mA / cm , and the tyrosyl phosphorylated proteins were detected
using phosphotyrosine-specific monoclonal antibody (PY-20; ICN Biochemi

Kết quả (Việt) 1:

Bạch cầu trung tính (1310 các tế bào / ml) đã được ủ trong 1 ml chứa 1 KRPmmol / l CaCl, 10 mmol / l glucose và 0-100 mmol / l timosaponins E1 và2E2 trong 3 phút ở 378C, và sau đó cách 0.5 ml lạnh 45% Axit tricloaxetic (trận chung kếtnồng độ, 15%) có chứa 1 mmol / l natri vanadat và 2 mmol / lphenylmethylsulfonylfluoride đã được bổ sung để ngăn chặn các phản ứng. Sau khi ủtrong 30 phút tại 48C, hỗn hợp được ly tại 10.000gcho 15 phút ở 48C.Precipitate đã được rửa sạch hai lần với lạnh dietyl ete-ethanol (1:1, v / v),hòa tan trong 50 ml 62.5 mmol / l Tris-HCl (pH 6.8) chứa 2% natridodecyl sulfat (SDS), cách 0.7 mol / lbNhóm glycerol - mercaptoethanol và 10% vàđối tượng dùng mũi SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-trang) bằng cách sử dụng một7,5% gel [24]. Các protein electrophoresed được chuyển vào Immobilon-Pmàng tế bào (Nippon Millipore) bằng cách sử dụng một bộ máy nên thấm (Sartorius)2trong 60 phút tại 2 mA / cm và protein tyrosyl phosphorylated đã được phát hiệnbằng cách sử dụng cụ thể phosphotyrosine monoclonal kháng (PY-20; ICN Biochemi

Kết quả (Việt) 2:

Bạch cầu trung tính (1
3
10 tế bào / ml) được ủ trong 1 ml KRP chứa 1
mmol / l CaCl, 10 mmol / l glucose và 0-100 mmol / l của timosaponins E1 và
2
E2 trong 3 phút ở 37
8
C, và sau đó 0,5 ml 45% axit băng lạnh tricloaxetic (thức
tập trung, 15%) có chứa 1 mmol / l natri vanadate và 2 mmol / l
phenylmethylsulfonylfluoride đã được bổ sung để ngăn chặn các phản ứng. Sau khi ủ
trong 30 phút ở 4
8
C, hỗn hợp được ly tâm ở 10.000
g
trong 15 phút ở 4
8
C.
Kết tủa được rửa sạch hai lần với nước đá lạnh diethyl ether-ethanol (1: 1, v / v),
hòa tan trong 50 ml 62,5 mmol / l Tris-HCl (pH 6.8) có chứa 2% sodium
dodecyl sulfate (SDS), 0,7 mol / l
b
-mercaptoethanol và glycerol 10% và đã được
chịu SDS-polyacrylamide gel điện (SDS-PAGE) sử dụng một
7,5% gel [24]. Các protein electrophoresed đã được chuyển lên Immobilon-P
màng (Nippon Millipore) sử dụng một thiết bị thấm semidry (Sartorius)
2
cho 60 phút ở 2 mA / cm, và các protein phosphoryl tyrosyl đã được phát hiện
sử dụng pyruvate cụ thể kháng thể đơn dòng (PY-20; ICN Biochemi