downloada) Schematic representation

download
a) Schematic representation of miRNA sensor constructs used to asses specific EBV miRNA activity in EBV-positive cells. The human EF1a promoter drives expression of the fluorescent mCherry gene which holds a single perfect target site for a given EBV miRNA in its 3’UTR. b) EBV-positive SNU719 cells were transduced with the indicated EBV miRNA sensor constructs or vector control lacking miRNA targetsites. The mCherry-reporter expression was assessed by flow cytometry and showed a clear downregulation caused by silencing activity of the indicated EBV BART miRNA c) Schematic representation of the studies presented Fig 1A. Briefly, EBV-positive SNU719 cells are transduced with a given miRNA sensor construct (lower panels) or control vector (top panels). The control vector induces high level of mCherry expression, whereas the miRNA reporter vector display reduced mCherry levels as the given EBV miRNA is expressed in the EBV+ cells thereby repressing reporter expression (see b)). Subsequently, anti-miRNA gRNAs are introduced that induce site-specific mutations at the miRNA target genes. Therefore, miRNA-induced silencing of the miRNA reporter is abrogated resulting in enhanced expression of mCherry.

Kết quả (Việt) 1:

tải vềa) sơ đồ đại diện của tam cảm biến cấu trúc được sử dụng để lừa EBV Tam hoạt động cụ thể trong tế bào EBV tích cực. Promoter EF1a con người biểu hiện của gen mCherry huỳnh quang nắm giữ một trang web mục tiêu hoàn hảo cho một tam EBV nhất định trong ổ đĩa của mình 3' Maldegem. b) các tế bào EBV-tích cực SNU719 đã được transduced với chỉ định EBV Tam cảm biến xây dựng hoặc điều khiển vector thiếu Tam targetsites. Biểu thức mCherry-phóng viên đã được đánh giá bởi dòng chảy cytometry và cho thấy một downregulation rõ ràng gây ra bởi hoạt động của khách sạn EBV BART Tam c chỉ im lặng) trình bày sơ đại diện của các nghiên cứu hình 1A. Một thời gian ngắn, tích cực EBV SNU719 tế bào được transduced với một xây dựng cảm biến tam nhất định (thấp hơn bảng) hoặc điều khiển vector (trên bảng). Điều khiển vector gây ra mức độ cao của biểu thức mCherry, trong khi các phóng viên Tam vector Hiển thị giảm mCherry cấp như Tam EBV nhất định được thể hiện trong EBV + các tế bào do đó repressing phóng viên biểu thức (xem b)). Sau đó, anti-Tam gRNAs được giới thiệu mà gây ra các đột biến trang tại Tam tiêu gen. Vì vậy, gây ra Tam im lặng của các phóng viên Tam bãi bỏ kết quả là nâng cao các biểu hiện của mCherry.

Kết quả (Việt) 2:

tải
a) Sơ đồ biểu diễn của miRNA cấu trúc cảm biến sử dụng để lừa cụ thể hoạt động EBV miRNA trong tế bào EBV dương. Các EF1a promoter người lái biểu hiện của gen mCherry huỳnh quang mà giữ một trang web mục tiêu hoàn hảo duy nhất cho một EBV miRNA được đưa ra trong 3'UTR của nó. b) các tế bào SNU719 EBV-tích cực đã được tải nạp với các chỉ EBV miRNA cấu trúc cảm biến hoặc điều khiển vector thiếu targetsites miRNA. Các biểu hiện mCherry-phóng viên đã được đánh giá bằng cách đếm tế bào dòng chảy và cho thấy một ức chế tuyến yên rõ ràng gây ra bởi hoạt động của các chỉ EBV BART miRNA c im lặng) Sơ đồ biểu diễn của các nghiên cứu được trình bày Hình 1A. Tóm lại, các tế bào SNU719 EBV dương được tải nạp với một cấu trúc cho cảm biến miRNA (bảng dưới) hoặc điều khiển vector (bảng trên). Các vector kiểm soát gây ra mức độ cao của biểu mCherry, trong khi các miRNA hiển thị vector phóng giảm mức mCherry như EBV miRNA được được thể hiện trong các tế bào EBV + do đó đàn áp biểu phóng viên (xem b)). Sau đó, anti-miRNA gRNAs được giới thiệu mà gây đột biến trang web cụ thể ở các gen mục tiêu miRNA. Do đó, miRNA-induced silencing của phóng viên miRNA được bãi bỏ kết quả là tăng cường biểu hiện của mCherry.