2. Materials and methods2.1. Bacter

2. Materials and methods
2.1. Bacterial strains
Thirty two strains of E. coli (19 different serotypes) that were
positive for one or more verotoxin genes as determined by the PCR
protocol of Paton and Paton (2003), and six strains of Salmonella
were used in these tests. Strains were obtained from the Public
Health Agency of Canada (Winnipeg, MB, Canada) and the Bureau
of Microbial Hazards, Health Canada (Ottawa, ON, Canada) (Table 1).
Cultures were maintained at −75 °C in glycerol-supplemented media
and were streaked for growth on Brain Heart Infusion Agar (BHIA,
Difco, Becton Dickinson and Co., Sparks, MD, USA), and then incubated
at 37 °C for 24 to 48 h.
2.2. Inoculated meat studies with e-beam irradiation
To model the response of E. coli and Salmonella on the surface of carcasses
to e-beamtreatment, experimentswere conducted on inoculated
cuts of outside flat beef muscle. Choice of beef cuts was based on the
work of Geornaras et al. (2011). Themeatwas purchased the day before
each trial from a retail butcher and frozen at−20 °C for 2 to 3 h to facilitate
slicing. The meat pieces were cut with a meat slicer (Model 410,
Hobart Manufacturing Co., Troy, OH, USA) into 1.2 cm thick strips
which were cut into 5 × 5 cm squares (20 to 30 g/piece) and stored
at 4 °C in plastic autoclave bags.
2.2.1. Preparation of strains and meat inoculation
A number of different agar media were screened for their ability to
uniformly recover all serotypes and serovars of each respective genus.
Brilliant Green Agar with Sulfapyridine (BGS) (Neogen, Lansing,
Michigan, USA), Xylose Lactose Dextrose Agar (XLD) (BectonDickinson),
Bismuth Sulfite Agar (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) and
Hectoen Enteric agar (Oxoid) were used for Salmonella; MacConkey
Agar (Neogen) (MC), Sorbitol MacConkey Agar (Oxoid) with Cefixime-
Tellurite (Dynal, Lake Success, NY, USA) (CTSMAC), Violet Red Bile
Agar (VRB) (Oxoid), VRB with 1% Glucose (VRBG), Lactose Monensin
Glucuronate Agar (LMG) (Neogen), Eosin Methylene Blue agar (EMB)
(Oxoid) and VTEC agar (Gill, Martinez-Perez, McIlwham, & Blais, 2012)
were used for E. coli. Plates were incubated 24 to 48 h at 35–37 °C. Of
these, LMG and BGS were used in trials because they permitted the
best growth of all test strains of E. coli and Salmonella, respectively.
From a 10 ml overnight culture in BHI Broth, 0.2 ml was added to
200 ml BHI Broth and incubated at 35 to 37 °C for 24 h. Cultures were
centrifuged for 10 min at 3752 ×g (Avanti centrifuge J-26 XP, Beckman
Coulter, Palo Alto, CA, USA). The supernatant was discarded and cell
pellets were re-suspended in 200 ml 0.1% peptone water. Cultures
were dilutedwith 0.1% peptone to deliver 3 or 7 log CFU bacteria/gmeat.
During preliminary work, strains were grouped based on species,
serotype and initial results from irradiation treatment in phosphate
buffered saline (PBS), andwere assigned to each of 8 groups (designated
1 to 8, Table 1). The bacteria from each group were mixed equally
together to form 1 l of cell suspension for each individual group.
Each cocktail of bacterial strains was added to a plastic autoclave
bag containing 18 pieces of meat, and bags were manually massaged
to facilitate even distribution of the bacteria. Preliminary tests revealed
that Salmonella required a longer time for attachment to the
meat tissue compared to E. coli, and so the E. coli groups were held
for 20 to 30 s and the Salmonella groups for 5 min to enable attachment.
The inoculated meat samples were then allowed to drip on a
perforated metal tray for 5 to 7 min and each piece was individually
heat-sealed in a Winpak Deli *1 oxygen barrier bag measuring
7 × 9 cm (Winpak, Winnipeg, MB, Canada). For each experiment

Kết quả (Việt) 1:

2. tài liệu và phương pháp2.1. vi khuẩn chủngBa mươi hai chủng E. coli (19 khác nhau serotypes) đượctích cực cho một hoặc nhiều verotoxin gen được xác định bởi Đảng Cộng sản Romaniagiao thức của Paton và Paton (2003), và sáu chủng Salmonellađược sử dụng trong những thử nghiệm này. Chủng đã thu được từ công chúngCơ quan y tế Canada (Winnipeg, MB, Canada) và Cụccủa vi sinh vật nguy hiểm, y tế Canada (Ottawa, ON, Canada) (bảng 1).Nền văn hóa đã được duy trì ở −75 ° C trong phương tiện truyền thông nhóm glycerol bổ sungvà được streaked cho sự tăng trưởng trên não trái tim truyền Agar (BHIA,Difco, Becton Dickinson và Co., Sparks, MD, Hoa Kỳ), và sau đó ủở 37 ° C cho 24 đến 48 h.2.2. tiêm chủng thịt nghiên cứu với e-tia bức xạMô hình các phản ứng của Salmonella và E. coli trên bề mặt của khungđể e-beamtreatment, experimentswere tiến hành ngày tiêm chủngvết cắt của thịt bò bằng phẳng bên ngoài cơ bắp. Sự lựa chọn của thịt bò cắt giảm được dựa trên cáccông việc của Geornaras et al. (2011). Themeatwas mua ngày trướcmỗi thử nghiệm từ một bán lẻ thịt và đông lạnh at−20 ° C trong 2-3 h để tạo điều kiệnslicing. Miếng thịt được cắt bằng một slicer thịt (mô hình 410,Hobart sản xuất công, Troy, OH, Hoa Kỳ) vào 1.2 cm dày dảimà đã được cắt thành hình vuông cm 5 × 5 (20 đến 30 g/mảnh) và lưu trữở 4 ° C trong túi nhựa nén.2.2.1. chuẩn bị của chủng và thịt tiêm phòngMột số phương tiện truyền thông khác nhau agar đã được kiểm tra cho khả năng của mình đểthống nhất phục hồi tất cả các serotypes và serovars của mỗi chi tương ứng.Agar rực rỡ màu xanh lá cây với Sulfapyridine (BGS) (Neogen, Lansing,Michigan, Mỹ), Xylose Lactose Dextrose Agar (XLD) (BectonDickinson),Bitmut sunfit Agar (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, Anh) vàHectoen ruột agar (Oxoid) đã được sử dụng cho Salmonella; MacConkeyAgar (Neogen) (MC), Sorbitol MacConkey Agar (Oxoid) với Cefixime-Telurit (Dynal, thành công Lake, NY, Hoa Kỳ) (CTSMAC), tím đỏ mậtAgar (VRB) (Oxoid), VRB với 1% Glucose (VRBG), Lactose MonensinGlucuronate Agar (LMG) (Neogen), Eosin Methylene Blue agar (EMB)(Oxoid) và VTEC agar (Gill, Martinez Perez, McIlwham, và Blais, năm 2012)đã được sử dụng cho E. coli. Tấm đã được ủ 24 đến 48 h 35-37 ° C. Củanày, LMG và BGS đã được sử dụng trong các thử nghiệm bởi vì họ cho phép cáctốc độ tăng trưởng tốt nhất của tất cả các kiểm tra chủng E. coli và Salmonella, tương ứng.Từ một văn hóa qua đêm 10 ml ở BHI canh, cách 0.2 ml đã được thêm vào200 ml BHI canh và ủ tại 35 đến 37 ° C cho 24 h. nền văn hóa đãly cho 10 phút tại 3752 × g (Avanti máy ly tâm J-26 XP, BeckmanCoulter, Palo Alto, California, Hoa Kỳ). Supernatant đã bị loại bỏ và di độngbột viên lại bị đình chỉ trong 200 ml 0,1% chế phẩm peptone nước. Nền văn hóalà chế phẩm peptone 0,1% dilutedwith để cung cấp 3 hoặc 7 đăng CFU vi khuẩn/gmeat.Trong công việc sơ bộ, chủng được gộp nhóm dựa trên loài,serotype và các kết quả ban đầu từ chiếu xạ trị ở phốt phátbuffered saline (PBS), andwere được chỉ định cho mỗi nhóm 8 (định1 đến 8, bảng 1). Các vi khuẩn từ mỗi nhóm được trộn đềuvới nhau để tạo thành 1 l di động tạm dừng cho mỗi nhóm cá nhân.Mỗi loại cocktail của chủng vi khuẩn đã được thêm vào một nồi hấp nhựatúi có 18 miếng thịt, và túi được mát xa theo cách thủ côngđể tạo thuận lợi cho ngay cả phân phối của các vi khuẩn. Xét nghiệm sơ bộ tiết lộSalmonella đòi hỏi một thời gian dài cho tập tin đính kèm để cácthịt mô so với E. coli, và vì vậy các nhóm E. coli được tổ chứccho 20-30 s và nhóm Salmonella cho 5 phút để cho phép tập tin đính kèm.Các mẫu tiêm chủng thịt sau đó đã được phép nhỏ giọt vào mộtkhay kim loại đục lỗ cho 5-7 phút và mỗi phần là cá nhânHeat-Sealed trong một Winpak Deli * 1 oxy rào cản túi đo7 × 9 cm (Winpak, Winnipeg, MB, Canada). Cho mỗi thử nghiệm

Kết quả (Việt) 2:

2. Vật liệu và phương pháp
2.1. Chủng vi khuẩn
Ba mươi hai chủng E. coli (19 týp huyết thanh khác nhau) mà là
tích cực đối với một hoặc nhiều verotoxin gen được xác định bởi PCR
giao thức của Paton và Paton (2003), và sáu chủng Salmonella
đã được sử dụng trong các thử nghiệm. Chủng này được lấy từ Công
Cơ quan Y tế Canada (Winnipeg, MB, Canada) và Văn phòng
của vi sinh vật nguy hiểm, Y tế Canada (Ottawa, ON, Canada) (Bảng 1).
Văn hóa được duy trì ở mức -75 ° C trong glycerol-sung phương tiện truyền thông
và được sọc cho sự phát triển về não Tim Infusion Agar (BHIA,
Difco, Becton Dickinson và Công ty Sparks, MD, USA), và sau đó ủ
ở 37 ° C trong 24-48 h.
2.2. Nghiên cứu thịt tiêm e-beam chiếu xạ
Để mô hình phản ứng của E. coli và Salmonella trên bề mặt của xác
e-beamtreatment, experimentswere tiến hành tiêm
cắt giảm của cơ bắp bò phẳng bên ngoài. Sự lựa chọn của vết cắt thịt bò đã được dựa trên
công việc của Geornaras et al. (2011). Themeatwas mua ngày trước
mỗi lần thử nghiệm từ một người bán thịt bán lẻ và đông lạnh ở-20 ° C trong 2-3 h để tạo điều kiện
cắt. Những miếng thịt được cắt bằng một slicer thịt (Model 410,
Hobart Manufacturing Co., Troy, OH, USA) thành 1.2 cm dải dày
đó được cắt thành 5 × 5 cm vuông (20-30 g / con) và được lưu trữ
tại 4 ° C trong nồi hấp túi nhựa.
2.2.1. Chuẩn bị các loại giống và thịt cấy
Một số phương tiện truyền thông môi trường thạch khác nhau đã được sàng lọc đối với khả năng của họ để
khôi phục thống nhất tất cả các type huyết thanh và serovar của mỗi chi tương ứng.
Brilliant thạch xanh với Sulfapyridine (BGS) (Neogen, Lansing,
Michigan, Mỹ), Xylose Lactose Dextrose Agar (XLD) (BectonDickinson),
Bismuth sulfit Agar (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, Anh) và
agar Hectoen ruột (Oxoid) đã được sử dụng cho Salmonella; MacConkey
Agar (Neogen) (MC), Sorbitol MacConkey Agar (Oxoid) với Cefixime-
Tellurite (Dynal, Lake Success, NY, USA) (CTSMAC), Violet Red Bile
Agar (VRB) (Oxoid), VRB với 1% Glucose ( VRBG), Lactose Monensin
Glucuronate Agar (LMG) (Neogen), thạch Eosin Methylene Blue (EMB)
(Oxoid) và agar VTEC (Gill, Martinez-Perez, McIlwham, & Blais, 2012)
đã được sử dụng cho E. coli. Các đĩa được ủ 24-48 giờ ở 35-37 ° C. Trong số
này, LMG và BGS đã được sử dụng trong các thử nghiệm, vì họ đã cho phép
tăng trưởng tốt nhất của tất cả các chủng thử nghiệm của E. coli và Salmonella, tương ứng.
Từ 10 ml cấy qua đêm trong BHI Broth, 0,2 ml đã được thêm vào
200 ml BHI Broth và ủ khoảng từ 35 đến 37 ° C trong 24 h. Nuôi cấy được
ly tâm trong 10 phút ở 3752 × g (Avanti ly tâm J-26 XP, Beckman
Coulter, Palo Alto, CA, USA). Các dịch nổi đã được bỏ đi và tế bào
dạng viên đã được tái lơ lửng trong 200 ml 0,1% peptone. Các nền văn hóa
là dilutedwith peptone 0,1% để cung cấp 3 hoặc 7 vi khuẩn log CFU / gmeat.
Trong công việc sơ bộ, chủng này được phân nhóm dựa trên loài,
serotype và kết quả ban đầu từ xử lý chiếu xạ trong phosphate
buffered mặn (PBS), andwere gán cho mỗi 8 nhóm (được chỉ định
1-8, Bảng 1). Các vi khuẩn từ mỗi nhóm được trộn đều
với nhau để tạo thành 1 l của dịch treo tế bào cho từng nhóm riêng lẻ.
Mỗi cocktail của các chủng vi khuẩn đã được thêm vào một nồi hấp nhựa
túi có chứa 18 miếng thịt, và túi được tay xoa nhẹ
để tạo điều kiện phân bố đều vi khuẩn. Kiểm tra ban đầu cho thấy
rằng Salmonella cần một thời gian dài hơn để gắn vào các
mô thịt so với E. coli, và do vậy các nhóm E. coli đã được tổ chức
từ 20 đến 30 giây và các nhóm vi khuẩn Salmonella trong 5 phút để kích hoạt tập tin đính kèm.
Các mẫu thịt tiêm sau đó được phép nhỏ giọt vào một
khay kim loại đục lỗ cho 5-7 phút và mỗi mảnh bán riêng lẻ
nhiệt niêm phong trong một * 1 oxy túi rào Winpak Deli đo
7 × 9 cm (Winpak, Winnipeg, MB, Canada). Đối với mỗi thí nghiệm