INTRODUCTIONThere are intense needs

INTRODUCTION
There are intense needs for novel antifungal and
antibacterial compounds applicable to food and feed
preservatives. These compounds must have high activity
against fungi and bacteria and low biotoxicity to human
beings and animals. From this viewpoint, medicinal
plants are promising resources. In scanning the litera-
ture, however, we found only a few reports describing
the screening methodology of detection of antifungal
activity in medicinal plants (Chand et al., 1994).
Previously, we reinvestigated medicinal plants by a
sensitive single-cell assay method (Oh et al., 1996) and
found that many plants contained active components.
This unique assay system, a Bio-Cell Tracer (BCT), is
now commercially available (Hidan Co., Ltd, Kashiwa,
Japan). BCT can detect the growth rate change of a
single hypha at every 30 s to a precision of 0.1
Ì
m min
-
1
(Oh et al., 1993). Therefore, a transient decrease in the
growth rate of a test hypha can be detected. The
sensitivity of antifungal activity detection of this system
was 100-fold higher than that of conventional methods
(Oh et al., 1996).
Anemarrhena asphodeloides
is a typical herbal medi-
cine that antifungal activity was detected for the first
time by this BCT method. Steroidal saponins (Kawasaki
et al., 1963), xanthone C-glycosides (Takahashi et al.,
1985), and polysaccharides were reported as chemical
constituents of the rhizome of this title plant. And this
rhizome is known to have anti-diabetic activity (Taka-
hashi et al., 1985), diuretic activity (Saito et al., 1994),
and molluscicidal activity (Takeda et al., 1989). And the boiled extract with several herbal medicines was widely
used in Chinese and Japanese folk medicines. These
suggest a low biotoxicity to humans when used at the
proper concentration. Thus, we have tried to isolate the
most active lead compound from this plant material.
This paper describes the isolation procedure for the
compound and its molecular characteristics.
EXPERIMENTAL PROCEDURES
Materials and General Procedure.
Rhizomes of
A.
asphodeloides
of medicinal grade were purchased from Tochim-
oto-Tenkaido Co., Osaka, Japan. Other chemicals and solvents
were of analytical grade. Wakogel C-300 silica gel (Wako Pure
Chemical Industries, Osaka) was used for the column chro-
matography. The F
254
silica gel-coated glass plate (Merck,
Darmstadt, Germany) was used for thin-layer chromatography
(TLC). The coloring condition of the TLC plate was treated
with a vanillin
-
sulfuric acid (VS) reagent at 100 °C for 3 min.
1
H NMR (500 MHz),
13
C NMR (125 MHz), and 2D NMR
spectra were measured with A500 FT
-
NMR (JEOL Ltd.,
Tokyo) in a CDCl
3
solution. Chemical shifts were given in
‰
(ppm) values relative to tetramethylsilane (TMS) as an
internal standard. Gas chromatography
-
mass spectrometry
(GC
-
MS) spectra were measured with a Hewlett-Packard
5890 II gas chromatography linked to a JMS-SX102A mass
spectrometer (JEOL Ltd.) (column: DB-1 column
,J&W
Scientific, 15 m

0.25 mm; line: He flow at 1 mL min
-
1
;
column temperature profile: 50 °C for 1 min, increasing from
50 to 250 °C at 10 °C min
-
1
and hold at 250 °C for 10 min;
electron potential: 70 eV). Reverse-phase high-performance
liquid chromatography (HPLC) was performed on a
Ì
-Bonda-
sphere column (5
Ì
C
18
-100 Å, 15 cm

3.9 mm, Nihon Waters
Ltd., Tokyo) in a Tosoh SC-8020 system (Tosoh Co., Tokyo).
Detection was carried out with an UV detector at 254 nm (UV-
8020, Tosoh Co., Tokyo). Optical rotation was taken on a DIP-
1000 digital polarimeter (Jasco Co., Tokyo).
Isolation Procedure.
The antifungal activity of each
fraction obtained in the course of isolation was measured by
the BCT method as described in Oh et al. (1996). To measure
the antifungal activity of each fraction by BCT, the solvent of each fraction that was obtained in this procedure was removed
by evaporation under reduced pressure. The residues were
dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) (20
-
40 mg mL
-
1
)as
stock solutions. These stock solutions were diluted with potato
dextrose broth (PDB) medium (Difco) to prepare the prescribed
concentrations before use

Kết quả (Việt) 1:

GIỚI THIỆUCó những nhu cầu mạnh mẽ cho cuốn tiểu thuyết chống nấm vàTất cả các hợp chất kháng khuẩn áp dụng đối với thực phẩm và thức ănchất bảo quản. Các hợp chất này phải hoạt động caochống nấm và vi khuẩn và thấp biotoxicity con ngườingười và động vật. Từ quan điểm này, dược liệucây có nguồn lực đầy hứa hẹn. Trong chức năng quét litera-Ture, Tuy nhiên, chúng tôi thấy chỉ có một vài báo cáo mô tảCác phương pháp kiểm tra phát hiện kháng nấmhoạt động trong các cây thuốc (trang và ctv., 1994).Trước đây, chúng tôi reinvestigated cây dược liệu bởi mộtnhạy cảm đơn bào khảo nghiệm phương pháp (Oh và ctv., 1996) vàtìm thấy rằng nhiều loài thực vật có thành phần hoạt động.Hệ thống này khảo nghiệm duy nhất, một tế bào sinh học-Tracer (BCT), làbây giờ thương mại có sẵn (Hidan Co., Ltd, Kashiwa,Nhật bản). BCT có thể phát hiện sự thay đổi tỷ lệ tăng trưởng của mộthypha duy nhất tại mỗi 30 s với độ chính xác 0.1Ìm min-1(Oh et al., 1993). Vì vậy, một thoáng qua giảm cáctốc độ tăng trưởng của hypha thử nghiệm có thể được phát hiện. Cácđộ nhạy phát hiện kháng nấm hoạt động của hệ thống này100-fold cao hơn so với phương pháp thông thường(Oh ctv., 1996).Anemarrhena asphodeloideslà một điển hình thảo dược medi-phim kháng nấm hoạt động đã được phát hiện lần đầu tiênthời gian bằng các phương pháp này của BCT. Khác-phụ tùng saponin và phụ kiện (Kawasakiet al., 1963), xanthone C-glycosides (Takahashi et al.,năm 1985), và polysaccharides đã được báo cáo là hóa chấtthành phần của thân rễ của cây tiêu đề này. Và điều nàythân rễ được biết là có hoạt động chống bệnh tiểu đường (Taka-Hashi et al., 1985), thuốc lợi tiểu hoạt động (Saito et al., 1994),và molluscicidal hoạt động (Takeda và ctv., 1989). Và các chiết xuất luộc với một số loại thuốc dược thảo rộng rãisử dụng trong các loại thuốc dân gian Trung Quốc và Nhật bản. Nhữngđề nghị một biotoxicity thấp với con người khi được sử dụng tại cácnồng độ thích hợp. Vì vậy, chúng tôi đã cố gắng để tách biệt cáctích cực nhất dẫn hợp chất từ vật liệu thực vật này.Bài báo này mô tả các thủ tục tách biệt cáchợp chất và đặc điểm phân tử của nó.THỦ TỤC THỬ NGHIỆMVật liệu và thủ tục chung.Thân rễ củaA.asphodeloidesloại dược liệu đã được mua từ Tochim-Oto-Tenkaido Co., Osaka, Nhật bản. Hóa chất và các dung môi kháclà lớp phân tích. Wakogel C-300 silica gel (Wako PureHóa học công nghiệp, Osaka) được sử dụng cho cột chromatography. F254Tấm phủ silica gel kính (Merck,Darmstadt, Đức) được sử dụng trong sắc ký lớp mỏng(TLC). Tình trạng màu của tấm TLC đã được điều trịvới một vanillin-axít sulfuric (VS) các thuốc thử ở 100 ° C trong 3 phút.1H NMR (500 MHz),13C NMR (125 MHz), và 2D NMRquang phổ được đo với A500 FT-NMR (JEOL Ltd,Tokyo) trong một CDCl3giải pháp. Hóa học thay đổi đã được đưa ra‰(ppm) các giá trị tương đối so với tetramethylsilane (TMS) như là mộttiêu chuẩn nội bộ. Sắc ký khí-MASS spectrometry(GC-MS) spectra được đo với một Hewlett-Packard5890 II khí sắc ký được liên kết đến một khối tấn thành-SX102Aspectrometer (JEOL Ltd) (cột: DB-1 cột, J & WKhoa học, 15 m0.25 mm; Line: ông chảy tại 1 mL min-1;cột nhiệt độ hồ sơ: 50 ° C trong 1 phút, tăng từ50 đến 250 ° C ở phút 10 ° C-1và giữ ở 250 ° C cho 10 phút;tiềm năng điện tử: 70 eV). Hiệu suất cao của đảo ngược phachất lỏng sắc ký (HPLC) được thực hiện trên mộtÌ-Bonda-lĩnh vực cột (5ÌC18-100 Å, 15 cm3,9 mm, Nihon WatersCông ty TNHH, Tokyo) trong một hệ thống Tosoh SC-8020 (Tosoh Co., Tokyo).Phát hiện được thực hiện với một máy dò UV tại 254 nm (UV-8020, Tosoh Co., Tokyo). Quang quay được chụp một DIP-1000 digital polarimeter (Jasco Co., Tokyo).Thủ tục tách biệt.Các hoạt động chống nấm của mỗiphần thu được trong quá trình cô lập được đo bằngCác phương pháp BCT như được mô tả trong Oh et al. (1996). Để đo lườngCác hoạt động chống nấm của mỗi phần nhỏ của BCT, dung môi mỗi phần được thu được trong thủ tục này đã được gỡ bỏbởi hơi nước dưới áp lực giảm. Các dư lượng đãgiải tán dimethyl sulfôxít (DMSO) (20-40 mg mL-1) làCác giải pháp cổ. Các giải pháp cổ đã được pha loãng với khoai tâydextrose canh (PDB) trung bình (Difco) để chuẩn bị các quy địnhnồng độ trước khi sử dụng

Kết quả (Việt) 2:

GIỚI THIỆU
Có nhu cầu mãnh liệt cho kháng nấm mới và
các hợp chất kháng khuẩn đối với thực phẩm và thức ăn chăn nuôi
chất bảo quản. Các hợp chất này phải có hoạt động cao
so với các loại nấm và vi khuẩn và biotoxicity thấp để người
con và động vật. Từ quan điểm này, dược liệu
thực vật hứa hẹn nguồn lực. Trong quét văn học
ture, tuy nhiên, chúng tôi thấy chỉ có một vài báo cáo mô tả
các phương pháp sàng lọc phát hiện các kháng nấm
hoạt động trong các nhà máy dược (Chand et al., 1994).
Trước đây, chúng tôi reinvestigated cây thuốc của một
phương pháp xét nghiệm đơn bào nhạy cảm (Oh et al., 1996) và
phát hiện ra rằng nhiều loại cây chứa các thành phần hoạt động.
hệ thống này khảo nghiệm độc đáo, một Tracer Bio-Cell (BCT), là
hiện nay thương mại có sẵn (Hidan Co., Ltd, Kashiwa,
Nhật Bản). BCT có thể phát hiện sự thay đổi tỷ lệ tăng trưởng của
sợi nấm duy nhất tại mỗi 30 s đến độ chính xác 0,1
Ì
m phút
-
1
(Oh et al., 1993). Do đó, giảm thoáng qua trong
tốc độ tăng trưởng của sợi nấm thử nghiệm có thể được phát hiện. Các
nhạy phát hiện hoạt tính kháng nấm của hệ thống này
là 100 lần cao hơn so với các phương pháp thông thường
(Oh et al., 1996).
Anemarrhena asphodeloides
là một Medi thảo dược đặc trưng
cine rằng hoạt tính kháng nấm được phát hiện cho người đầu tiên
thời gian bằng phương pháp này BCT . Saponin steroid (Kawasaki
et al., 1963), xanthone C-glycosid (Takahashi et al.,
1985), và polysaccharides đã được báo cáo như hóa
thành phần của thân rễ của cây tiêu đề này. Và đây
thân rễ được biết là có hoạt động chống đái tháo đường (Taka-
Hashi et al., 1985), lợi tiểu (Saito et al., 1994),
và hoạt động molluscicidal (Takeda et al., 1989). Và chiết luộc với một số loại thuốc thảo dược đã được rộng rãi
sử dụng trong các loại thuốc dân gian Trung Quốc và Nhật Bản. Những
đề nghị một biotoxicity thấp đến con người khi sử dụng ở
nồng độ thích hợp. Do đó, chúng tôi đã cố gắng để cô lập các
hợp chất của chì tích cực nhất từ nguyên liệu thực vật này.
Bài viết này mô tả các thủ tục cách ly cho các
hợp chất và đặc điểm phân tử của nó.
THỦ TỤC THÍ
liệu và Tổng Procedure.
Thân rễ của
A.
asphodeloides
loại thuốc được mua từ Tochim -
oto-Tenkaido Co., Osaka, Nhật Bản. Hóa chất và dung môi khác
là các lớp phân tích. Wakogel C-300 silica gel (Wako Tinh Khiết
Chemical Industries, Osaka) đã được sử dụng cho các cột chro-
matography. F
254
silica gel bọc tấm kính (Merck,
Darmstadt, Đức) đã được sử dụng cho sắc ký lớp mỏng
(TLC). Điều kiện màu của tấm TLC đã được điều trị
với một vanilin
-
axit sulfuric (VS) thuốc thử ở 100 ° C trong 3 phút.
1
H NMR (500 MHz),
13
C NMR (125 MHz), và 2D NMR
quang phổ được đo bằng A500 FT
-
NMR (JEOL Ltd.,
Tokyo) trong một CDCl
3
giải pháp. Dịch chuyển hóa học đã được đưa ra trong
‰
(ppm) giá trị so với tetramethylsilane (TMS) như là một
tiêu chuẩn nội bộ. Sắc ký khí
-
khối phổ
(GC
-
MS) phổ được đo với một Hewlett-Packard
5890 sắc ký khí II liên kết với một JMS-SX102A khối
phổ kế (JEOL Ltd) (cột: DB-1 cột
, J & W
khoa học, 15 m
?
0.25 mm; line: Ông chảy vào 1 ml phút
-
1
;
thông số nhiệt độ cột: 50 ° C trong 1 phút, tăng từ
50 đến 250 ° C ở 10 ° C min
-
1
và giữ ở 250 ° C trong 10 phút;
điện tử tiềm năng : 70 eV). Ngược pha hiệu suất cao
sắc ký lỏng (HPLC) đã được thực hiện trên một
Ì
-Bonda-
cột cầu (5
Ì
C
18
-100 Å, 15 cm
?
3,9 mm, Nihon Waters
Ltd., Tokyo) trong một SC-8020 hệ thống TOSOH (TOSOH Co., Tokyo).
Phát hiện được thực hiện với một máy dò UV ở bước sóng 254 nm (UV-
8020, TOSOH Co., Tokyo). Quay quang học đã được đưa vào một DIP-
1000 phân cực kế kỹ thuật số (Jasco Co., Tokyo).
Isolation Procedure.
Các hoạt tính kháng nấm của mỗi
phần thu được trong quá trình phân lập được đo bằng
phương pháp BCT như mô tả trong Oh et al. (1996). Để đo lường
các hoạt tính kháng nấm của mỗi phần nhỏ của BCT, dung môi của mỗi phần đó được thu thập trong thủ tục này đã được gỡ bỏ
bằng cách bay hơi dưới áp suất thấp. Các dư lượng đã được
hòa tan trong dimethyl sulfoxide (DMSO) (20
-
40 mg ml
-
1
) là
giải pháp chứng khoán. Những giải pháp chứng khoán đã được pha loãng với khoai tây
dextrose nước dùng (PDB) trung bình (Difco) để chuẩn bị các quy định
nồng độ trước khi sử dụng