Construction of expression vector a

Construction of expression vector and derivation of
recombinant strains
The cDNA sequence encoding HPK5 was amplified from ThioA/L15-7 vector
by PCR with two primers: Primer 1: 5′-GCCATGGTGCTGCTCCCGGATGTAG-3′;
and Primer 2: 5′-GGAATTCTTACGGGGCCGCACACTGAGG-3′, which respectively
contained the Nco I and Ecor I restriction enzyme sites. Then the
PCR-amplified fragments were separated on 2% agarose gel containing
ethidium bromide and visualized by UV-light illumination. Afterwards, the
cDNA fragment was cloned into the pET32a prokaryotic expression vector
containing a C-terminal histidine tag to facilitate affinity purification and
then transferred into E. coli BL21(DE3) competent bacteria strain. Then the
recombinant prokaryotic strains E. coli BL21(DE3)/pET32a-hK5, which
express fusion HPK5 with a histidine tag, can be obtained.

Kết quả (Việt) 1:

Xây dựng các biểu hiện vector và lấy đạo hàm của
tái tổ hợp chủng
dãy cDNA mã hóa HPK5 được khuyếch đại từ ThioA/L15-7 vector
bởi Đảng Cộng sản Romania với hai lớp lót: mồi 1: 5 '-GCCATGGTGCTGCTCCCGGATGTAG-3 ';
và mồi 2: 5 '-GGAATTCTTACGGGGCCGCACACTGAGG-3 ', mà tương ứng
chứa Nco tôi và Ecor tôi hạn chế enzyme trang web. Sau đó, các
Đảng Cộng sản Romania khuếch đại mảnh vỡ đã được tách ra trên 2% agarose gel có chứa
ethidium bromua và hình dung bởi ánh sáng UV chiếu sáng. Sau đó, các
cDNA mảnh được nhân bản vào véc tơ so biểu hiện pET32a
có một thẻ histidine C thiết bị đầu cuối để tạo điều kiện ái lực làm sạch và
sau đó chuyển vào căng thẳng có thẩm quyền vi khuẩn E. coli BL21(DE3). Sau đó, các
tái tổ hợp định giống E. coli BL21 (DE3) / pET32a-hK5, mà
phản ứng tổng hợp nhận HPK5 với một thẻ histidine, có thể thu được.

Kết quả (Việt) 2:

Xây dựng các vector biểu hiện và nguồn gốc của
tái tổ hợp chủng
Các mã hóa HPK5 chuỗi cDNA đã được khuếch đại từ ThioA/L15-7 vector
bằng phương pháp PCR với hai mồi: Primer 1: 5'-GCCATGGTGCTGCTCCCGGATGTAG-3 ';
và Primer 2: 5'-GGAATTCTTACGGGGCCGCACACTGAGG-3 ', mà lần lượt
có các hạ sĩ quan tôi và tôi Ecor trang web enzyme hạn chế. Sau đó các
mảnh PCR-khuếch đại đã được tách ra trên 2% gel agarose có chứa
ethidium bromide và hình dung bởi tia cực tím ánh sáng chiếu sáng. Sau đó,
đoạn cDNA đã được nhân bản vô tính vào vector biểu hiện pET32a prokaryote
có chứa một thẻ histidine C-thiết bị đầu cuối để tạo điều kiện thanh lọc mối quan hệ và
sau đó chuyển vào E. coli BL21 (DE3) vi khuẩn có thẩm quyền căng thẳng. Sau đó các
chủng tái tổ hợp prokaryote E. coli BL21 (DE3) / pET32a-hK5, mà
thể hiện sự hợp nhất HPK5 với một thẻ histidine, có thể thu được.