Screening and isolation of lactobac

Screening and isolation of lactobacilli producing β-galactosidase
One gram of homogenized samples (fermented foods, feces, breast milk) was placed in 0.1% peptone,and incubated at 37°C for 24 hours. Then the sample was diluted with MRS broth to obtain serial dilutions from 10-3 to 10-6. One milliliter of each dilution was poured on to MRS + bromocresol green agar then incubated at 37°C for 24 hours. After screening of lactobacilli producing β-galactosidase by cultivation on MRS + X-gal + IPTG agar, the colonies that
changed from white to blue colonies were selected.
Selection of the lactobacilli that have the highest enzyme activity
The selected strains were cultured in MRS broth at 37°C for 16 hours for preparing crude enzyme.
Then the sample was centrifuged (11,400×g) at 4°C for 15 minutes. The pellet was washed twice with 50mM phosphate buffer (pH 7.0) followed by z-buffer and acetone:toluene (9:1) was added and mixed for 5 seconds. Incubation was carried out at 37°C for 20 minutes.Enzyme activity was determined using 450 µl of 22 mM oNPG with 50 µl of the β-galactosidase incubated at 37°C for 15 minutes. And the reaction was terminated by 750 µl of Na2CO3. Enzyme activity was measured by spectrophotometer at 420 nm and compared with the z-buffer instead of enzyme. One
unit of β-galactosidase is defined as enzyme activity that delivered 1 molecule of galactose and glucose from lactose within 1 second. The enzyme activity was calculated by the following formula:

Kết quả (Việt) 1:

Sàng lọc và cô lập của lactobacilli β-hoá sản xuấtMột gram homogenized mẫu (loại thực phẩm lên men, phân, sữa mẹ) đã được đặt trong chế phẩm peptone 0,1% và ủ ở 37° C trong 24 giờ. Sau đó, mẫu được pha loãng với nước luộc MRS để có được dilutions nối tiếp từ 10-3-10-6. Một trong những milliliter pha loãng mỗi được đổ vào để MRS + bromocresol xanh agar sau đó ủ ở 37° C trong 24 giờ. Sau khi sàng lọc của lactobacilli sản xuất β-hoá bằng cách trồng trọt ngày MRS + X-gal + IPTG agar, các thuộc địa màthay đổi từ trắng sang màu xanh thuộc địa đã được lựa chọn.Sự lựa chọn của lactobacilli có hoạt động của enzyme cao nhấtCác chủng được chọn đã được nuôi cấy trong MRS canh ở 37° C 16 giờ cho việc chuẩn bị thô enzyme.Sau đó, các mẫu được ly (11, 400 × g) ở 4° C trong 15 phút. Miếng đã được rửa sạch hai lần với 50mM phosphat đệm (pH 7,0) theo sau là z-đệm và axeton: toluene (9:1) đã được thêm vào và hỗn hợp trong 5 giây. Ủ được thực hiện ở 37° C trong 20 phút. Hoạt động của enzyme được xác định bằng cách sử dụng 450 ml oNPG 22 mM với 50 ml của β-hoá ủ ở 37° C trong 15 phút. Và phản ứng đã được chấm dứt bởi 750 ml Na2CO3. Hoạt động của enzyme được đo bằng phối tại 420 nm và so với z-đệm thay vì men tiêu hóa. Một trong nhữngđơn vị β-hoá được xác định là hoạt động của enzyme cung cấp 1 phân tử glucose và galactose lactose trong vòng 1 giây. Hoạt động của enzyme được tính theo công thức sau:

Kết quả (Việt) 2:

Sàng lọc và cô lập của lactobacilli sản xuất β-galactosidase
Một gam mẫu đồng nhất (thực phẩm lên men, phân, sữa mẹ) đã được đặt trong 0,1% peptone, và ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Sau đó mẫu được pha loãng với MRS để có được pha loãng serial 10-3 đến 10-6. Một ml của mỗi pha loãng đã được đổ vào để MRS + thạch xanh bromocresol sau đó ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Sau khi sàng lọc của lactobacilli sản xuất β-galactosidase của canh tác trên MRS + X-gal + IPTG thạch, các thuộc địa mà
thay đổi từ màu trắng sang màu xanh khuẩn đã được lựa chọn.
Lựa chọn của lactobacilli có các hoạt động của enzyme cao nhất
Các chủng chọn được nuôi cấy trong MRS ở 37 ° C trong 16 giờ để chuẩn bị enzyme thô.
Sau đó, mẫu được ly tâm (11.400 × g) ở 4 ° C trong 15 phút. Các viên đã được rửa sạch hai lần với đệm 50mM phosphate (pH 7.0) tiếp theo là z-buffer và acetone: toluen (9: 1) được thêm vào và trộn trong 5 giây. Ủ bệnh được thực hiện ở 37 ° C trong 20 hoạt động minutes.Enzyme được xác định bằng 450 ml 22 mM ONPG với 50 ml của β-galactosidase ủ ở 37 ° C trong 15 phút. Và phản ứng đã được chấm dứt bởi 750 ml Na2CO3. Hoạt động của enzyme được đo bằng quang phổ ở 420 nm và so sánh với z-buffer thay vì enzyme. Một
đơn vị của β-galactosidase được định nghĩa là hoạt động của enzyme mà giao 1 phân tử galactose và glucose từ lactose trong vòng 1 giây. Các hoạt động của enzyme đã được tính toán theo công thức sau đây: