Chlorate and perchlorate reductase

Chlorate and perchlorate reductase activities (triplicate samples) were determined for each fraction using
reduced methyl viologen assays [10]. Each 1 ml reaction
mixture contained 0.5 mM methyl viologen, 0.35 mM
sodium dithionite, and 10 to 100 ll of enzyme in MOPS
buffer (50 mM, pH 8.0), which yielded a starting absor-
bance of approximately 1.0. The reaction was initiated
by addition of the substrate (10 mM; chlorate or per-
chlorate), and activity quantified based on a linear de-
crease in absorbance at 600 nm (PalmSpec, Ocean
Optics, Inc.; OOIBASE32 software) for 1 to 2 min in
an anaerobic chamber with the rate corrected based on
biotic controls (no substrate; duplicate samples). Abiotic
controls containing no enzyme were also performed. A
cytoplasmic marker, soluble malate dehydrogenase,
was used to determine the extent of spheroplast rupture
according to a standard assay [19]. Specific activity was
defined as Units of activity per mass of protein (U/mg)
based on the oxidation of 1 mmol of methyl viologen
per min (600 nm). A previously determined millimolar
extinction coefficient of 13 for methyl viologen at 600
nm was used to relate absorbance to concentration
[20]. Protein concentrations were measured using the
Bradford assay reagent (Sigma).

Kết quả (Việt) 1:

Hoạt động reductase clorat và perclorat (triplicate mẫu) đã được xác định cho mỗi phần bằng cách sử dụnggiảm methyl viologen thí [10]. Mỗi phản ứng 1 mlhỗn hợp chứa 0,5 mM methyl viologen, 0.35 mMNatri đithionit, và 10-100 ll enzyme ở MOPSbuffer (50 mM, độ pH 8,0), mà mang lại một khởi đầu absor-bance khoảng 1.0. Phản ứng đã được khởi xướngbằng cách bổ sung các chất nền (10 mM; clorat hoặc mỗi-clorat), và quantified hoạt động dựa trên một de tuyến tính -nhăn ở hấp thu ở 600 nm (PalmSpec, đại dươngQuang học, Inc.; OOIBASE32 phần mềm) cho 1-2 phút trongmột phòng khí với tỷ lệ sửa chữa dựa trênkháng sinh điều khiển (không có chất nền; trùng lặp mẫu). Abioticđiều khiển có chứa không có enzyme cũng đã được thực hiện. Atế bào chất đánh dấu, hòa tan trong malate dehydrogenase,được sử dụng để xác định mức độ spheroplast vỡtheo một khảo nghiệm tiêu chuẩn [19]. Specific hoạt độngdefined như các đơn vị hoạt động cho một khối lượng của protein (U/mg)Dựa trên quá trình oxy hóa của 1 mmol methyl viologencho mỗi phút (600 nm). A trước đó xác định millimolartuyệt chủng coefficient 13 cho methyl viologen tại 600nm đã được sử dụng để hấp thu với nồng độ liên quan[20]. protein nồng độ được đo bằng cách sử dụng cácBradford khảo nghiệm tinh khiết (Sigma).

Kết quả (Việt) 2:

Hoạt động reductase clorat và perchlorate (mẫu sao thứ ba) đã được xác định cho từng phần nhỏ bằng cách sử dụng
giảm viologen xét ​​nghiệm methyl [10]. Mỗi phản ứng 1 ml
hỗn hợp chứa 0,5 mM methyl viologen, 0,35 mM
sodium đithionit, và 10-100 II của enzyme trong MOPS
bu ff er (50 mM, pH 8,0), mà mang lại một absor- bắt đầu
bance khoảng 1.0. Phản ứng được tiến hành
bằng cách bổ sung các chất nền (10 mM; chlorate hoặc trọng
chlorate), và hoạt động quanti fi ed dựa trên triển tuyến tính
gấp nơi hấp thụ ở 600 nm (PalmSpec, Dương
Quang, Inc .; phần mềm OOIBASE32) cho 1 tới 2 phút trong
một buồng kỵ khí với tỷ lệ điều chỉnh dựa trên
các điều khiển sinh học (không có chất nền; bản sao mẫu). Vô sinh
điều khiển và không chứa enzyme cũng được thực hiện. Một
dấu hiệu của tế bào chất, hòa tan dehydrogenase malat,
được sử dụng để xác định mức độ vỡ spheroplast
theo một khảo nghiệm tiêu chuẩn [19]. Hoạt động fi c Speci được
định nghĩa là đơn vị hoạt động theo khối lượng của protein (U / mg)
dựa trên các quá trình oxy hóa của 1 mmol methyl viologen
per min (600 nm). A xác định trước đây millimolar
tuyệt chủng COE ffi cient 13 cho methyl viologen ở 600
nm được sử dụng để hấp thụ liên quan đến nồng độ
[20]. Nồng độ protein được đo bằng cách sử dụng các
khảo nghiệm thuốc thử Bradford (Sigma).