This study evaluated the phytochemi

This study evaluated the phytochemical and antimicrobial activities of green, orthodox and black Kenyan tea on five microorganisms with the possible purpose of determining their pharmacological significance/ medicinal value. The in vitro antimicrobial activities of three extracts of tea was done using humanly isolated strains of Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, and, Candida albicans. The assays were carried out by agar well diffusion. Streptomycin and cefadroxil served as the control drugs. The aqueous tea extract were found to be more effective against the tested bacteria than fungi at high concentration. Orthodox tea had no antimicrobial activity against Salmonella typhimurium and Candida albicans. Extracts of green tea, orthodox and black tea showed activity on Staphylococcus aureus at concentrations ranging from 100150mgml-1 having comparable diameters of zones of inhibition of 10.0±0.0 20.0±0.0, 4±0.2- 8.0 ±0.0 and 6.5±0.0, 7.4 ±0.2 respectively. The first two tea extracts demonstrated activities on Escherichia coli and Streptococcus faecalis at concentrations ranging from 100-400mgml-1 with relatively close diameters of zones of inhibition. Only black tea inhibition the growth Candida albicans at the MIC of 100mgml-1 whereas, Salmonella typhimurium was inhibited by green tea and black tea extracts at the MIC of 200mgml-1. Black tea also inhibited growth of E. Coli, but at concentration ranging from 200-400mgml-1 with diameter zones of inhibition from 3.5±0.0- 4.0±0.0 and a MIC of 150mgml-1. Phytoscreening of the three extracts of tea showed the presence of cardiacglycosides, alkaloids, saponins, flavanoids, terpenes and tannins.
Key words: Green tea, orthodox tea, black tea, phytochemical screening, antimicrobial studies
1.0 Introduction Tea is one of the most widely consumed beverage. Its worldwide prominence is attributed to its pleasant flavor combined with it stimulating effects and health benefits. Scientific data from pharmacological and physiological studies continue to show that tea has beneficial effects on human health. There are many types of tea, including green tea, black tea and oolong tea and each has several sub-classifications (Benerjee, 1992). All of them are prepared from Camellia sinensis (L) theaca and its varieties by different manufacturing processes. The continued use of tea as a beverage has gained worldwide prominence due to the quality of its phytochemicals and other related tea extracts such as polyphenols and catechins. These pharmacological aspects had been perceived to be more in green tea than in black tea hence the tendency to influence market trends. Tea polyphenols (flavonoids) andtheir oxidative products are being identified with a number of diverse phamarcotherapeutic effects such as reduction of heart diseases and cancer in humans (Venesa and Williams, 2009). Immunosuppression and lowering oxidative stress (Kaliyor et al., 2003), antidiabetis including hyperglycemia (Vinson et al., 2001) lowering levels of cholesterol, triglycerides and decreasing fat tissue accumulation (Tokimitsu et al., 2004), and the potential improvement in special cognitive learning abilities (Hague et al., 2004). These pharmacological roles of tea tend to affect the consumption with tea trade now thriving due to medicinal value associated with catechins e.g., in 2003 China exported 800 tons of tea polyphenols,300 tons of tea pigments (thaflavins and thearubigins), 10 tons of L- theanin and appreciable amount of tea saponins (Wan et al., 2004).
2.0 Materials and Methods Processed tea samples (green, orthodox and black tea) collected in Murang’a Kenya in March 2012, were used. The micro-organism Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Candida albiccans were obtained from the microbial bank maintained in Medical Microbiology Department of JKUAT. The laboratory reagents used in these experiments were of analytical grade obtained from Sigma, Oxoid, Aldrich, Merck, Biochemical and BDH through local dealer Kobian.

201
2.1 Phytochemical Screening The aqueous extracts of tea were subjected to phytochemical analysis to screen for the presence of secondary metabolites such as Alkaloids, Saponin, Phenolics, Tannins, Anthraquinones, Cardenolides, Terpenes, Flavinoids and Cardiac glycosides. The phytochemical screening was carried out using standard procedures (Martnez, 2003, Jigna et al., 2007, Herborne 1973, Trease and Evans, 1989). The description is as follows:
2.1.1 Anthraquinones One gram of each tea sample was shaken with 10ml of ferric chloride solution with 5ml of hydrochloric acid (HCl). Each mixture was heated in a water bath for 10-15min, filtered and allowed to cool. The filtrate was extracted with chloroform and shaken gently. The clear layer at the base was pipette into test tubes and 2ml each of ammonia sulphate added. An observation of a delicate pink rose indicated the presence of anthraquinones.
2.1.2 Cardenolides Four grams of each sample was extracted in the test tube with 80% ethanol, and appropriately labeled. They were divided into two portions for Kedde’s test and Keler-Killian’s test. For Kedde’s test, few drops of 10% lead acetate were added to each of the tubes, followed by few drops of distilled water and chloroform. The contents were evaporated to dryness in a water bath. 5% sodium hydroxide was added to each residue and then 2% of 3-5 dinitrobenzene acid. For Keller-Killian’s test, few drops of 10% lead acetate, water and chloroform were added to each test sample. The mixture was evaporated to dryness in the water bath and subsequently a few drops of concentrated sulphulic acid were added. For Keller-Keillan’s test, a brown ring indicated the presence of cardenolides, while for Keddi’s test a brown to purple colour was indicative of cardenolides.
2.1.3 Phenolics To 2ml of alcoholic or aqueous tea extract, 1ml of 1% ferric chloride solution was added. Blue or green colour formation was an indication of phenols.
2.1.4 Flavinoids 2g tea was extracted in 10ml alcohol or water. To 2ml filtrate few drops of concentrated hydrochloric acid (HCl) followed by 0.5g zinc or magnesium turnings was added. After 3min magenta or pink colour formation indicated the presence of flavonoids.
2.1.5 Terpenes To 2ml of aqueous extract, 5mg chloroform, 2ml acetic anhydride, concentrated HCL were added carefully to form a layer. Redish-brown colour of interface was an indication of terpenes.
2.1.6 Cardiac Glycosides To 2ml alcoholic filtrate, 1ml glacial acetic acid and 1-2 drops of ferric chloride were added followed by 1ml of concentrated sulphulic acid. A presence of brown ring at the interface indicated the presence of cardiac glycosides. A violet ring might also appear below the brown ring.
2.1.7 Saponin 5ml of each plant extract was placed into a test tube and diluted with 5ml of distilled water. The mixture was shaken vigorously for 2min.Persistent appearance of foam lasting for 5min or the forming of emulsion when olive oil was added confirmed the presence of sponins.
2.1.8 Alkaloids The tea extracted (2g) was hydrolyzed with 2ml hydrochloric acid (HCl) solution by heating in water bath for 10 min, allowed to cool and 5ml of filtrate was reacted with a few drops of Dragendoff’s Mayer’s Wagner’s reagents, alkaloids were recorded as present in the sample if turbidity or brownish precipitate was observed.
2.2 Antimicrobial Screening Four human pathogenic bacteria made of two gram-positive Staphylococcus aureus and Streptococcus faecalis and two gram-negative Salmonella typhimurium and Escherichia coli were used for antibacterial assay. One yeast Candida albicans was used for antifungal assay. All the organisms were local isolates from the laboratory bacterial
202
stock of the Medical Microbiology Department, JKUAT, Kenya. Three to five identical colonies from stored slopes of microorganisms were lifted with a sterile wire loop and transferred into a single strength nutrient broth(sigma) contained in a well labeled screw cap bottles for each bacterium and fungus respectively. The bottles were well shaken and incubated at room temperature for 18-24 hrs for bacteria and 72hrs for fungi. The agar well diffusion method was used to test the tea extract for antimicrobial activity. Briefly 15ml of melted and cooled nutrient agar (Sigma Laboratories, USA) and potato dextrose agar (Sigma Laboratories, USA) were added to 0.2ml in 100 dilutions of bacteria and fungal cultures respectively in sterile petri dishes. The contents were mixed after the gar in each plate solidified, 6 wells of 5mm each were bunched in each plate using aseptic pipette tip. 0.1ml of tea extracts at varying concentrations (50mgml-1, 100mgml-1, 200mgml-1,and 400mgml-1) as well as the standard antibiotic solution was loaded into the wells. Control experiments were set up using streptomycin and cefadroxil (4mgml-1) for the bacteria and fungal assays. The plates were incubated at 37oC for 24hrs for bacteria and 48hr for fungi.
All inoculation procedures were carried out under aseptic conditions. The antimicrobial studies were done in triplicate. With the aid of a transparent ruler the diameter of zones of inhibition around the wells were measured in mm for all the three replicates and the average of the three measurements were calculated as an indication of activity. The results were interpreted according to the modified Kirby-Baur technique. The minimum inhibitory concentration (MIC) of tea extracts was determined using the broth dilution method as described by Salon and Washington (1990). Briefly 1ml of the extract solution at the concentration of 400mgml-1 was added to1 ml of nutrient broth and subsequently transferred to make solution of varying concentration (400mgml-1 200mgml, 100mgml-150mgml-1) in different test tubes. The 1ml of ba

Kết quả (Việt) 2:

Nghiên cứu này đánh giá các hoạt động phytochemical và kháng khuẩn của trà xanh Kenya, chính thống và đen trên năm vi sinh vật với mục đích có thể xác định ý nghĩa / giá trị dược liệu dược lý của họ. Các hoạt động kháng khuẩn in vitro của ba chiết xuất chè được hoàn tất sử dụng các chủng mà con người bị cô lập của Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, và, Candida albicans. Các xét nghiệm được thực hiện bởi thạch cũng khuếch tán. Streptomycin và cefadroxil phục vụ như các loại thuốc kiểm soát. Các chiết xuất trà dung dịch nước đã được tìm thấy là có hiệu quả chống lại các vi khuẩn thử nghiệm so với nấm ở nồng độ cao. Trà chính thống không có hoạt động chống lại những vi khuẩn Salmonella typhimurium và Candida albicans. Các chiết xuất từ trà xanh, chính thống và trà đen cho thấy hoạt động trên Staphylococcus aureus ở các nồng độ khác nhau, từ 100150mgml-1 có đường kính tương đương của vùng ức chế 10,0 ± 0,0 20,0 ± 0,0, 4 ± 0.2- 8,0 ± 0,0 và 6,5 ± 0,0, 7,4 ± 0.2 tương ứng. Hai chiết xuất từ trà đầu tiên chứng minh hoạt động trên Escherichia coli và Streptococcus faecalis ở các nồng độ khác nhau, từ 100-400mgml-1 có đường kính tương đối gần khu ức chế. Chỉ ức chế trà đen tăng trưởng Candida albicans tại MIC của 100mgml-1 trong khi đó, Salmonella typhimurium bị ức chế bởi trà xanh và chiết xuất từ trà đen ở MIC của 200mgml-1. Trà đen cũng ức chế sự tăng trưởng của E. Coli, nhưng ở nồng độ khác nhau, từ 200-400mgml-1 với khu đường kính của sự ức chế từ 3,5 ± 4,0 ± 0.0- 0.0 và một MIC của 150mgml-1. Phytoscreening của ba chất chiết xuất từ trà cho thấy sự hiện diện của cardiacglycosides, alkaloid, saponin, flavanoids, terpenes và tannin.
Từ khóa: trà xanh, trà chính thống, trà đen, sàng lọc phytochemical, nghiên cứu kháng sinh
1.0 Giới thiệu Trà là một trong những tiêu thụ rộng rãi nhất nước giải khát. Nổi bật của nó trên toàn thế giới là do hương vị dễ chịu của nó kết hợp với nó kích thích tác động và lợi ích sức khỏe. Dữ liệu khoa học từ các nghiên cứu dược lý và sinh lý tiếp tục cho thấy rằng trà có tác dụng có lợi trên sức khỏe con người. Có rất nhiều loại trà, bao gồm trà xanh, trà đen và trà ô long và từng có nhiều tiểu phân loại (Benerjee, 1992). Tất cả đều được chế biến từ Camellia sinensis (L) theaca và giống của nó bởi các quá trình sản xuất khác nhau. Việc tiếp tục sử dụng trà như một thức uống đã trở nên nổi tiếng trên toàn thế giới do chất lượng của chất phytochemical và chất chiết xuất từ trà có liên quan khác như polyphenol và catechin. Những khía cạnh dược lý đã được nhận thức được nhiều hơn trong trà xanh hơn trong trà đen vì thế mà có xu hướng ảnh hưởng đến xu hướng thị trường. Polyphenol trong trà (flavonoids) andtheir sản phẩm oxy hóa đang được xác định với một số hiệu ứng phamarcotherapeutic đa dạng như giảm bệnh tim và ung thư ở người (Venesa và Williams, 2009). Ức chế miễn dịch và giảm stress oxy hóa (Kaliyor et al., 2003), antidiabetis bao gồm tăng đường huyết (Vinson et al., 2001) giảm mức độ cholesterol, triglyceride và giảm tích tụ mô mỡ (Tokimitsu et al., 2004), và cải thiện tiềm năng trong đặc biệt khả năng nhận thức học tập (Hague et al., 2004). Những vai trò dược trà có xu hướng ảnh hưởng đến việc tiêu thụ với thương mại trà bây giờ phát triển mạnh do giá trị chữa bệnh kết hợp với catechins ví dụ, trong năm 2003 Trung Quốc đã xuất khẩu 800 tấn chất polyphenol trong trà, 300 tấn bột màu trà (thaflavins và thearubigins), 10 tấn L- theanin và số lượng đáng kể của các saponin trà. (Wan et al., 2004)
2.0 Vật liệu và phương pháp chế biến các mẫu trà (màu xanh lá cây, chính thống và trà đen) thu thập trong Murang'a Kenya tháng 3 năm 2012, đã được sử dụng. Các vi sinh vật Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Candida albiccans thu được từ các ngân hàng vi sinh vật duy trì trong Medical Microbiology Sở JKUAT. Các thuốc thử trong phòng thí nghiệm được sử dụng trong các thí nghiệm này của lớp phân tích thu được từ Sigma, Oxoid, Aldrich, Merck, sinh hóa và BDH thông qua đại lý địa phương Kobian. 201 2.1 Phytochemical Sàng lọc các chất chiết xuất từ dung dịch nước trà đã phải chịu phân tích phytochemical để sàng lọc cho sự hiện diện của thứ cấp chất chuyển hóa như alkaloid, saponin, phenol, Tannin, anthraquinon, cardenolides, tecpen, Flavinoids và Cardiac glycoside. Buổi chiếu phytochemical được thực hiện bằng cách sử dụng các thủ tục chuẩn (Martnez, 2003, Jigna et al., 2007, Herborne 1973, Trease và Evans, 1989). Các mô tả như sau: 2.1.1 anthraquinon Một gam mỗi mẫu trà được lắc với 10ml dung dịch clorua sắt với 5ml acid hydrochloric (HCl). Mỗi hỗn hợp được nung nóng trong một cốc nước cho 10-15min, lọc và để nguội. Dịch lọc được chiết với chloroform và lắc nhẹ nhàng. Các lớp rõ ràng tại cơ sở là pipette vào ống nghiệm và 2ml mỗi amoniac sulphate thêm. Một sự quan sát của một màu hồng hồng tinh tế chỉ ra sự hiện diện của anthraquinon. 2.1.2 cardenolides Bốn gam mỗi mẫu được chiết xuất trong ống nghiệm với 80% ethanol, và ghi nhãn phù hợp. Họ được chia thành hai phần để kiểm tra Kedde và kiểm tra Keler-Killian của. Đối với thử nghiệm của Kedde, vài giọt 10% chì acetate được thêm vào mỗi ống, tiếp theo là vài giọt nước cất và chloroform. Các nội dung này đã bốc hơi đến khô trong một cốc nước. 5% sodium hydroxide được thêm vào mỗi cặn và sau đó 2% axit dinitrobenzene 3-5. Đối với thử nghiệm Keller-Killian của, vài giọt 10% chì acetate, nước và chloroform đã được thêm vào mỗi mẫu thử nghiệm. Hỗn hợp này được làm bay hơi đến khô trong bồn tắm nước và sau đó một vài giọt axit sulphulic tập trung đã được thêm vào. Đối với thử nghiệm Keller-Keillan, một chiếc nhẫn màu nâu chỉ ra sự hiện diện của cardenolides, trong khi đối với thử nghiệm Keddi của một màu nâu sang màu tím là biểu hiện của cardenolides. 2.1.3 Phenolics Để 2ml cồn hoặc dung dịch chiết xuất trà, 1ml 1%, dung dịch sắt clorua là thêm vào. Hình thành màu xanh hoặc màu xanh lá cây là một dấu hiệu của phenol. 2.1.4 Flavinoids 2g trà được chiết xuất trong 10ml rượu hoặc nước. Đến 2 ml dịch lọc vài giọt axit clohiđric đậm đặc (HCl) tiếp theo là 0,5g kẽm hoặc magiê phoi tiện đã được bổ sung. Sau khi 3min đỏ tươi hoặc hình thành màu hồng chỉ ra sự hiện diện của chất flavonoid. 2.1.5 tecpen đến 2 ml dung dịch nước chiết xuất, chloroform 5mg, 2ml anhydride acetic, tập trung HCL đã được thêm vào một cách cẩn thận để tạo thành một lớp. Màu Redish nâu của giao diện là một dấu hiệu của tecpen. 2.1.6 tim Glycosides đến 2 ml dịch lọc cồn, 1ml axit axetic và 1-2 giọt sắt clorua được thêm vào sau đó 1ml axit sulphulic tập trung. Một sự hiện diện của chiếc nhẫn màu nâu ở giao diện chỉ ra sự hiện diện của glycosid tim. Một chiếc nhẫn màu tím cũng có thể xuất hiện bên dưới các vòng màu nâu. 2.1.7 Saponin 5ml của mỗi nhà máy chiết xuất đã được đặt vào một ống nghiệm và pha loãng với 5ml nước cất. Hỗn hợp được lắc mạnh trong 2min.Persistent xuất hiện của bọt lâu dài cho 5min hoặc sự hình thành nhũ tương khi dầu ô liu đã được bổ sung xác nhận sự hiện diện của sponins. 2.1.8 Các alkaloid chiết xuất trà (2g) đã được thủy phân bằng axit hydrochloric 2ml (HCl) giải pháp bằng cách đun nóng trong bồn tắm nước trong 10 phút, để nguội và 5ml dịch lọc được cho phản ứng với một vài giọt thuốc thử Wagner của Dragendoff của Mayer, alkaloid đã được ghi lại như hiện nay trong mẫu nếu độ đục hoặc kết tủa nâu đã được quan sát. 2.2 Antimicrobial Screening Bốn con người vi khuẩn gây bệnh làm bằng hai Staphylococcus aureus và Streptococcus faecalis gram dương và hai Salmonella typhimurium gram âm và Escherichia coli đã được sử dụng để khảo nghiệm kháng khuẩn. Một nấm men Candida albicans đã được sử dụng để khảo nghiệm kháng nấm. Tất cả các sinh vật được phân lập tại địa phương từ vi khuẩn trong phòng thí nghiệm 202 chứng khoán của Sở Vi sinh Y tế, JKUAT, Kenya. Ba đến năm thuộc địa giống hệt nhau từ dốc lưu trữ của các vi sinh vật đã được nâng lên với một vòng dây vô trùng và chuyển vào một canh dinh dưỡng sức mạnh duy nhất (sigma) chứa trong một được dán nhãn chai nắp vặn cho từng loại vi khuẩn và nấm tương ứng. Các chai được lắc đều và ủ ở nhiệt độ phòng trong 18-24 giờ đối với vi khuẩn và 72 giờ cho nấm. Các phương pháp khuếch tán cũng agar được sử dụng để thử nghiệm các chiết xuất trà cho hoạt động kháng khuẩn. Một thời gian ngắn 15ml thạch nóng chảy và làm mát bằng chất dinh dưỡng (Sigma Laboratories, USA) và môi trường thạch đường khoai tây (Sigma Laboratories, USA) đã được thêm vào 0.2ml ở 100 độ pha loãng của vi khuẩn và nấm nền văn hóa tương ứng trong đĩa petri vô trùng. Các nội dung đã được pha trộn sau khi gar trong mỗi tấm kiên cố, 6 giếng 5mm mỗi bị bó trong mỗi tấm bằng tip pipet vô trùng. 0.1ml của chiết xuất trà ở các nồng độ khác nhau (50mgml-1, 100mgml-1, 200mgml-1, và 400mgml-1) cũng như các giải pháp kháng sinh tiêu chuẩn đã được nạp vào các giếng. Thí nghiệm kiểm soát đã được thiết lập bằng cách sử dụng streptomycin và cefadroxil (4mgml-1) cho các vi khuẩn và các xét nghiệm nấm. Các tấm được ủ ở 37oC trong 24 giờ cho vi khuẩn và nấm 48hr. Tất cả các thủ tục tiêm phòng đã được thực hiện trong điều kiện vô trùng. Các nghiên cứu kháng sinh đã được thực hiện trong ba lần. Với sự trợ giúp của một người cai trị trong suốt đường kính của vùng ức chế xung quanh giếng được đo bằng mm cho tất cả ba lần nhắc lại, với mức trung bình của ba phép đo được tính như một dấu hiệu của hoạt động. Các kết quả đã được giải thích theo kỹ thuật Kirby-Baur sửa đổi. Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của chất chiết xuất từ trà đã được xác định bằng cách sử dụng phương pháp pha loãng nước dùng như mô tả của Salon và Washington (1990). Một thời gian ngắn 1ml dung dịch chiết xuất với nồng độ 400mgml-1 đã được bổ sung TO1 ml nước dùng chất dinh dưỡng và sau đó chuyển giao cho làm cho giải pháp của nồng độ khác nhau (400mgml-1 200mgml, 100mgml-150mgml-1) trong ống nghiệm khác nhau. Các 1ml của ba