The fish were eutha- nized 48 hours

The fish were eutha- nized 48 hours post-inoculation by anesthetizing them with 5% (w/v) tricaine methanesulfonate (MS-222) (Argent Chemical Laboratories, Redmon WA, USA) and cutting their spinal cords. The brains and eyes from 20 animals were individually suspended in 1 × TE buffer (10 mM TrisHCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) and frozen at −20 °C. DNA was extracted by using an UltraClean Cells & Tissue DNA isolation kit (Mo Bio Laboratories Inc., USA), visualized by 1.5% agarose gel electrophoresis to observe DNA integrity, and quantified by using a Qubit fluorometer (Invitrogen Life Technologies, USA). The DNA was then diluted to a final 10 ng/mL concentration with 1 × TE buffer and kept at −20 °C until use. The remaining 20 brains and the eyes were fixed in 3.7% buffered formalin for 24 h and then individually embedded in paraffin-wax blocks. Twenty 3–4 μm thick sections were cut separately from both brain and eyes and then placed into vials to be deparafinized with absolute xylene for 25 min at 60 °C. Fol- lowing a second xylene treatment, the vials were spun at 14,000 rpm for 10 min, the supernatant was discarded and the samples were washed twice with 1 mL of absolute ethanol. The tissues were washed once with 70% ethanol and hydrated in 1× TE buffer, pH 8.0, for 5 minutes at 55 °C (Coura et al., 2005). The DNA was extracted and quantified as described above.

Kết quả (Việt) 1:

fish là eutha-nized 48 giờ sau tiêm chủng của anesthetizing họ với 5% (w/v) tricaine methanesulfonate (MS-222) (phòng thí nghiệm hóa học Argent, Redmon WA, Hoa Kỳ) và cắt dây cột sống của họ. Bộ não và mắt từ 20 con vật đã từng bị đình chỉ trong bộ đệm TE 1 × (10 mM TrisHCl, 1 mM EDTA, pH 8,0) và đông lạnh ở nhiệt độ-20 ° C. DNA được chiết xuất bằng cách sử dụng một UltraClean các tế bào và mô DNA isolation kit (Mo Bio Laboratories Inc, Mỹ), hình dung bởi 1,5% agarose gel electrophoresis để quan sát toàn vẹn DNA và quantified bằng cách sử dụng một Qubit fluorometer (Invitrogen cuộc sống công nghệ, Hoa Kỳ). Sau đó, DNA được pha loãng đến nồng độ 10 ng/mL ngoài với 1 × TE đệm và giữ ở nhiệt độ-20 ° C cho đến khi sử dụng. Còn lại 20 não và mắt là fixed trong 3,7% đệm formalin cho 24 h và sau đó cá nhân nhúng trong các khối paraffin-sáp. Hai mươi 3-4 μm dày phần bị cắt giảm một cách riêng biệt từ não và mắt và sau đó đặt vào lọ để là deparafinized với Xylen tuyệt đối cho 25 phút ở 60 ° C. Fol-lowing điều trị Xylen thứ hai, các lọ đã tách 14.000 rpm cho 10 phút, supernatant đã bị loại bỏ và các mẫu đã được rửa sạch hai lần với 1 mL cồn tuyệt đối. Các mô đã được rửa sạch một lần với 70% ethanol và ngậm nước trong 1 × TE bộ đệm, pH 8.0, trong 5 phút tại 55 ° C (Coura và ctv., 2005). DNA được chiết xuất và quantified như mô tả ở trên.

Kết quả (Việt) 2:

Sh fi được eutha- nized 48 giờ sau khi gây nhiễm bởi anesthetizing chúng với 5% (w / v) tricaine methanesulfonate (MS-222) (Argent Hóa chất phòng thí nghiệm, Redmon WA, USA) và cắt dây cột sống của họ. Những bộ óc và đôi mắt của 20 loài động vật đã bị đình chỉ riêng trong 1 × đệm TE (10 mM TrisHCl, 1 mM EDTA, pH 8,0) và đông lạnh ở -20 ° C. DNA được chiết xuất bằng cách sử dụng một UltraClean cô lập tế bào và mô DNA kit (Mo Bio Laboratories Inc., USA), hình dung bằng 1,5% agarose gel điện di để quan sát toàn vẹn DNA, và quanti fi ed bằng cách sử dụng một qubit fl uorometer (Invitrogen Life Technologies, Mỹ). DNA sau đó được pha loãng đến 10 ng / mL Nồng độ một fi nal với 1 × đệm TE và giữ ở -20 ° C cho đến khi sử dụng. 20 bộ não còn lại và đôi mắt là cổ định trong 3,7% formalin đệm cho 24 h và sau đó từng nhúng trong paraf fi khối n-sáp. Hai mươi 3-4 micron phần dày được cắt cách cả não và mắt và sau đó được đặt vào lọ để được depara fi nized với xylen tuyệt đối cho 25 phút ở 60 ° C. Fol lowing điều trị xylene thứ hai, các lọ đã được quay tại 14.000 rpm trong 10 phút, gạn được loại bỏ và các mẫu được rửa sạch hai lần với 1 ml ethanol tuyệt đối. Các mô được rửa một lần với 70% ethanol và ngậm nước trong 1 × đệm TE, pH 8.0, trong 5 phút ở 55 ° C (Coura et al., 2005). DNA được chiết xuất và quanti fi ed như mô tả ở trên.