Method development and validation D

Method development and validation
Different chromatographic systems were evaluated resulting in using an
ACQUITY HSS T3 2.1×100 mm, 1.8 µM with mobile phase A containing 0.1
% aqueous formic acid and mobile phase B consisting of methanol. The
chromatography selected was based on separation between M3S and M6S and
the separation compared to the other morphine metabolites; M3G, M6G and
morphine itself. Only one SRM transition was usable for the morphine sulfates
and they were the same. For that reason identification was established by
monitoring the analytes also in negative mode. Morphine-d3 was chosen as the
internal standard for both sulfates
0
15000000
3 3.5 4 4.5 5
3.0 3.5 4.0 4.5
5.0
1.5e6
Intensity(cps)
Time(min)
m/z 408.4
Morphine-3-Acetat-6-Sulfate
6-AM
Heroin
m/z 370.4
m/z 328.5
Figure 5 A chromatogram during characterisation of the
intermediate morphine-3-acetat-6-sulfat batch 1878 with LC-MS
using selected ion monitoring. This batch also contained impurities
of 6-AM and heroin.
22
The measuring range for plasma was 5-500 ng/ml for M3S and 4.5-454 ng/ml
for M6S. In urine the measuring range was 50-5000 ng/ml for M3S and for M6S
45.4-4544 ng/ml. The response was linear in the measuring ranges. In Figure 6 a
chromatogram of a urine calibrator is shown. The intra-assay and total
imprecision had CV:s less than11 % with accuracy between 98-111 % for both
analytes in urine and plasma. The matrix effect was of significance for both M3S
and M6S in plasma, showing an average suppression of the signal of 37 % for
M6S and 48 % for M3S. In urine, the suppression of the signal was

Kết quả (Việt) 1:

Phương pháp phát triển và xác nhận Hệ thống chromatographic khác nhau đã được đánh giá kết quả bằng cách sử dụng một ACQUITY HSS T3 2.1 × 100 mm, 1,8 μm với điện thoại di động giai đoạn có chứa 0,1 axit formic % dung dịch nước và điện thoại di động giai đoạn B gồm methanol. Các sắc kí được lựa chọn dựa trên sự tách biệt giữa m3 và M6S và sự tách biệt so với các chất chuyển hóa morphin khác; M3G, M6G và morphine chính nó. Chỉ SRM một quá trình chuyển đổi được sử dụng cho các sulfat morphin và họ đã là như vậy. Cho rằng lý do xác định được thành lập bởi theo dõi analytes cũng có trong chế độ tiêu cực. Morphine-d3 đã được chọn làm người Các tiêu chuẩn nội bộ cho cả hai sulfat 0150000003 3.5 4 4,5 53,0 3.5 4,0 4.55,01.5e6Intensity(CPS)Time(min)m/z 408.4Morphine-3-Acetat-6-sulfat6-AMMa túym/z 370.4m/z 328.5Hình 5 A chromatogram trong characterisation của các Trung cấp morphine-3-acetat-6-sulfat lô 1878 với LC-MS sử dụng chọn lọc ion giám sát. Lô này cũng chứa tạp chất 6-AM và ma túy. 22Phạm vi đo cho huyết tương là 5-500 ng/ml cho M3 và 4,5-454 ng/ml cho M6S. Trong nước tiểu có phạm vi đo là 50-5000 ng/ml cho M3 và M6S 45.4-4544 ng/ml. Các phản ứng là tuyến tính trong phạm vi đo. Trong hình 6 một chromatogram calibrator nước tiểu được hiển thị. Intra-khảo nghiệm và tổng số không chính xác đã có CV:s ít than11% với độ chính xác giữa 98-111% cho cả hai analytes trong huyết tương và nước tiểu. Hiệu ứng ma trận là ý nghĩa cho cả hai m3 và M6S trong huyết tương, Đang hiển thị một trung bình là đàn áp các tín hiệu của 37% cho M6S và 48% cho M3. Trong nước tiểu, đàn áp các tín hiệu < 15% cho cả hai analytes.

Kết quả (Việt) 2:

Xác nhận sự phát triển phương pháp và
hệ thống sắc ký khác nhau được đánh giá kết quả trong việc sử dụng một
Acquity HSS T3 2.1 × 100 mm, 1,8 mM với pha động A có chứa 0,1
% axit formic dịch nước và pha B di động bao gồm methanol. Các
sắc ký chọn được dựa trên sự tách biệt giữa M3S và M6S và
sự tách biệt so với các chất chuyển hóa morphin khác; M3G, M6G và
morphine tự. Chỉ có một quá trình chuyển đổi SRM là có thể sử dụng cho các sunfat morphine
và họ là như nhau. Cho rằng việc xác định nguyên nhân được thành lập bởi
giám sát các chất phân tích cũng trong chế độ tiêu cực. Morphine-d3 được chọn là
tiêu chuẩn nội bộ cho cả sunfat
0
15000000
3 3,5 4 4,5 5
3,0 3,5 4,0 4,5
5,0
1.5e6
Cường (cps)
Thời gian (phút)
m / z 408,4
morphine-3-Acetat-6-Sulfate
6-AM
heroin
m / z 370,4
m / z 328,5
Hình 5 Một sắc ký trong đặc tính của
morphin-3-Acetat-6-sulfat trung hàng loạt năm 1878 với LC-MS
sử dụng theo dõi ion chọn. Đợt này cũng chứa các tạp chất
của 6-AM và heroin.
22
Phạm vi đo plasma là 5-500 ng / ml cho M3S và 4,5-454 ng / ml
cho M6S. Ở nước tiểu phạm vi đo là 50-5000 ng / ml cho M3S và cho M6S
45,4-4544 ng / ml. Sự phản hồi tuyến tính trong phạm vi đo. Trong hình 6 một
sắc của một calibrator nước tiểu được hiển thị. Các nội khảo nghiệm và tổng số
không chính xác đã có CV: s ít than11% với độ chính xác giữa 98-111% cho cả
chất phân tích trong nước tiểu và huyết tương. Các hiệu ứng ma trận là quan trọng đối với cả hai M3S
và M6S trong huyết tương, cho thấy một sự đàn áp trung bình của tín hiệu 37% cho
M6S và 48% cho M3S. Trong nước tiểu, sự đàn áp của tín hiệu là <15% cho
cả hai chất phân tích.

Kết quả (Việt) 3:

Phương pháp phát triển và xác nhậnSắc ký đã tiến hành đánh giá hệ thống khác nhau, dẫn đến việc sử dụng2.1 * Acquity HSS T3 100 mm, chứa µ 1.8 m với dòng chảy của giai đoạn 1. 0% axit và chảy nước giai đoạn B by methanol tạo thành.Cái nàySắc ký được lựa chọn dựa trên M3S và M6S và tách rờiChất chuyển hóa khác tách biệt so với morphine; M3G, M6G vàMorphine itself.Chỉ có duy nhất một SRM chuyển sang sử dụng morphine sulfateChúng là giống nhau.Vì lý do này, xác định xây dựng.Giám sát và phân tích vật trong chế độ âm.Morphine-d3 choTrong đó tiêu chuẩn về sulfate0.- 153.5 4,5 5 4 33.5 - 4.5 t5.1.5e6Cường độ (CPS)Thời gian (phút)M / z 408.4Morphine-3-acetat-6-sulfate6-AMHeroinM / z 370.4M / z 328.5Đồ 5 đang trong quá trình sắc ký đồGiữa những công nghệ morphine-3-acetat-6-sulfat 1878Sử dụng Ion đã chọn giám sát.Đợt này còn có chứa tạp chấtĐúng 6-AM và heroin.Hai mươi haiPhạm vi của plasma đo cho 5-500 / ml M3S và 4.5-454 / mlĐối với M6S. Nước tiểu. Phạm vi của 50-5000 đo hàng / mL M3S và M6S45.4-4544 ng/mL phản ứng là tuyến tính phạm vi đo lường.Như biểu đồ những sê - 6Một thiết bị hiển thị sắc ký sinh.Trong đo lường và TổngKhông chính xác có 11% Chọn cổng để kết nối và o nhỏ hơn cho độ chính xác giữa 24-29%Nước tiểu và plasma trong phân tích của vật.Hiệu ứng là M3S nghĩaVà M6S trong huyết tương, trình bày ra 37% ức chế tín hiệu trung bìnhM3S M6S và 48%. Trong nước tiểu, tín hiệu của ức chế là < 15%Phân tích vật.