The common flow of protein identifi

The common flow of protein identification is: 1) the protein of interest, which is, in many cases separated by 2D electrophoresis, is either enzymatically or chemically
cleaved, 2) the obtained peptide mixture is analyzed by mass spectrometric techniques, and 3) the obtained peptide mass fingerprint is subsequently compared to “virtual” fingerprints obtained by theoretical cleavage of protein sequences stored in databases and the ones with
more number of peptide similarity are retrieved as possible candidate protein (Gevaert and
Vandekerckhove, 2000). Before the MS instrument was applied in proteomics, protein sequencing was carried out with Edman technique (Smith, 2001; Steen and Mann, 2004). However, nowadays, this method is very occasionally used in proteomics (Jorrin-Novo, 2014). Edman sequencing relies on a stepwise cleaving (fragmenting) of peptides from the amino terminus using chemicals in a process that may take hours or days. This method needs sample purification, requires much
expertise, fails completely if the peptide was acetylated at its amino terminus or otherwise was blocked to Edman reaction, which requires a free amino terminus, and often no sufficiently long and unambiguous peptide sequence could be identified by this method (Steen and Mann, 2004). However MS does not require peptide to be purified to homogeneity, it does not have a problem
identifying blocked or modified proteins, it is much more sensitive, and can fragment the peptides in seconds (Steen and Mann, 2004). According to De-Hoffmann and Stroobant (2007), unequalled sensitivity, detection limits, speed and diversity of its applications have raised Mass Spectrometry to an outstanding position among other analytical techniques. Hence, since the start of the application of Mass Spectrometry in protein chemistry, peptide mass fingerprinting (PMF) analysis has become the method of choice in high throughput protein identification (Gevaert and Vandekerckhove, 2000).

Kết quả (Việt) 1:

Dòng chảy thông thường nhận dạng protein là: 1) protein quan tâm, đó là, trong nhiều trường hợp ngăn cách bởi 2D electrophoresis, là enzymatically hoặc hóa họccảm 2) hỗn hợp thu được peptide được phân tích kỹ thuật phổ khối lượng, và 3) dấu vân tay hàng loạt peptide thu được sau đó được so sánh với "ảo" dấu vân tay thu được bằng lý thuyết cleavage chuỗi protein được lưu trữ trong cơ sở dữ liệu và những người vớiThêm số lượng các peptide tương tự được lấy như là ứng cử viên có thể có đạm (Gevaert vàVandekerckhove, 2000). Trước khi công cụ bà được áp dụng trong proteomic, protein sắp được thực hiện với Edman kỹ thuật (Smith, 2001; Steen và Mann, 2004). Tuy nhiên, hiện nay, phương pháp này rất thường xuyên được sử dụng trong proteomic (Jorrin-Novo, năm 2014). Edman trình tự dựa trên một stepwise cleaving (phân mảnh) của peptide từ amino terminus sử dụng hóa chất trong một quá trình mà có thể mất giờ hoặc ngày. Phương pháp này cần mẫu thanh lọc, đòi hỏi nhiềuchuyên môn, không thành công hoàn toàn nếu peptide acetylated tại terminus amin của nó hoặc nếu không bị chặn đến phản ứng Edman, mà yêu cầu một amino terminus miễn phí, và thường không có chuỗi peptide đủ dài và rõ ràng có thể được xác định bằng phương pháp này (Steen và Mann, 2004). Tuy nhiên, bà không yêu cầu các peptide để được tinh chế để tính đồng nhất, không có một vấn đềxác định protein bị chặn hoặc sửa đổi, nó là nhiều hơn nữa nhạy cảm, và có thể đoạn các peptide trong vài giây (Steen và Mann, 2004). Theo De-Hoffmann và Stroobant (2007), unequalled nhạy cảm, phát hiện giới hạn, tốc độ và sự đa dạng của các ứng dụng của nó đã tăng Mass Spectrometry đến một vị trí nổi bật trong số các kỹ thuật phân tích khác. Do đó, kể từ khi bắt đầu ứng dụng Mass Spectrometry đạm hóa học, các peptide khối lượng fingerprinting (PMF) phân tích đã trở thành phương pháp của sự lựa chọn trong việc xác định protein cao thông lượng (Gevaert và Vandekerckhove, 2000).