The pH of the fermenting liquids wa

The pH of the fermenting liquids was determined using a pH meter (Metrohm, Riverview, FL, USA). Total titratable acid (TTA) was estimated by titration with 0.1 M NaOH to neutralize all the total titratable protons. The endpoint was at pH 8.1. The calculation expresses the titratable acidity in terms of g/L of lactic acid. Reducing sugar was determined by the Somogyi-Nelson method [19]. Moisture, protein, and ash contents were considered as the basis for determination of decalcification (DC) and deproteinization (DP) efficiencies. Moisture, fat, and ash contents of samples were determined by AOAC methods [20]. Protein content was analyzed by a modified Biuret method, as described by Gornall et al. [21]. Briefly, 100 mg dried materials were digested with 10 mL 0.5 M NaOH for 4 hours at 40°C; protein in the alkaline solution mixture was collected by centrifugation and used to estimate the protein concentration. DC and DP were calculated as percentages, according to Rao et al. [14].

For determination of proteolytic activity, the supernatant (crude enzyme) was collected from the culture by centrifugation at 10,000 g at 4°C for 10 minutes. One hundred twenty μL of a diluted enzyme solution was added to 480 μL of azocasein (0.5% in 50 mM Tris buffer, pH 8.0, containing 5 mM MgCl2) and the mixture was incubated at 37°C for 1 hour. The reaction was stopped by adding 600 μL of 10% trichloroacetic acid; this was mixed and allowed to sit for 30 minutes at 4°C. The liquid was separated from the precipitate by centrifugation at 10,000 g at 4°C for 15 minutes. Four hundred μL of 1.8 N NaOH was added to 800 μL of the reaction liquid, mixed, and measured for absorbance at 420 nm () using a microplate reader (Varian Cary 50 MPR; Varian, Medical Systems, Palo Alto, CA, USA). One unit of enzyme activity was defined as the amount which yielded an increase in of 0.01 in 60 minutes at 37°C.

The degree of acetylation of chitin and chitosan samples was determined by UV-Vis spectroscopy, as described by Wu and Zivanovic [22].

For color analysis, , , and values were measured by a Hunter Lab UltraScan XE Colorimeter (HunterLab, Reston, VA, USA) using the CIELAB color system, where indicates lightness on a scale ranging from 0 (black) to 100 (white), while positive and negative values of represent red and green, and positive and negative values of represent yellow and blue, respectively. The whiteness index (WI) was calculated based on the following [3]:

Viscosities of chitin and chitosan samples were determined using a rheometer (Physica MCR 150; Anton Paar, Ashland, VA, USA) according to a modification of the Bajaj method [23]. Chitin samples were dipped into 50% ethanol for 30 minutes at 45°C to remove fat content. The chitin was then crushed into powder. N, N-dimethylacetamide (DMA) (99.5%, anhydrous, Unilab; Ajax Finechem, NSW, Australia) containing 5% lithium chloride (LiCl) (98.0%, anhydrous; LOBA Chemie, Mumbai, India) was used to prepare 0.1% (w/v) chitin solution. The mixture was stirred for 120 hours at room temperature. Chitosan solutions (1%, w/v) were obtained by dissolving chitosan powder in diluted acetic acid (1%, v/v). Each mixture was stirred for 24 hours at 55°C. A cone and plate geometry with a cone angle of 2.0° and radius of 24.975 mm was used for the measurements, and the gap size was 0.49 μ. The shear rates ranged from 0.1 to 100 s−1. The experiments were conducted at 20°C. High, medium, and low viscosity chitosan represented viscosities of ≥400, 200–400, and ≤200 mPa·s, respectively [23].

Kết quả (Việt) 1:

Độ pH của chất lỏng men đã được xác định bằng cách sử dụng một đồng hồ đo độ pH (Metrohm, Riverview, FL, Hoa Kỳ). Tất cả titratable axit (TTA) được ước tính của các chuẩn độ với 0.1 M NaOH để vô hiệu hóa tất cả các proton titratable tất cả. Điểm cuối là ở pH 8.1. Tính toán thể hiện tính axit titratable trong điều khoản của g/L của axit lactic. Giảm đường đã được xác định bằng phương pháp Somogyi-Nelson [19]. Độ ẩm, protein, và tro nội dung được coi là cơ sở để xác định decalcification (DC) và deproteinization (DP) hiệu quả. Nội dung độ ẩm, chất béo, và tro của mẫu đã được xác định bằng phương pháp AOAC [20]. Protein nội dung được phân tích bằng phương pháp Biuret lần, như được mô tả bởi Gornall et al. [21]. Một thời gian ngắn, 100 mg khô vật liệu được tiêu hóa với 10 mL 0.5 M NaOH cho 4 giờ ở 40° C; protein trong hỗn hợp kiềm được thu thập bởi số và được sử dụng để ước tính nồng độ chất đạm. DC và DP được tính toán như là tỷ lệ phần trăm, theo Rao et al. [14].Xác định hoạt động proteolytic, supernatant (thô enzym) đã được thu thập từ các nền văn hóa bởi số 10.000 g tại 4° C trong 10 phút. Một trăm hai mươi μL của một giải pháp pha loãng enzyme được thêm 480 μL azocasein (0,5% trong 50 mM Tris đệm, pH 8.0, chứa 5 mM MgCl2) và hỗn hợp được ủ tại 37° C trong 1 giờ. Phản ứng đã được ngừng lại bằng cách thêm 600 μL Axit tricloaxetic 10%; Điều này được trộn lẫn và có thể ngồi trong 30 phút ở 4° C. Chất lỏng được tách khỏi tỉnh precipitate bởi số 10.000 g tại 4° C trong 15 phút. Bốn trăm μL 1,8 N NaOH được thêm vào 800 μL chất lỏng phản ứng, pha trộn, và đo cho hấp thu tại 420 nm () bằng cách sử dụng một trình đọc microplate (Varian Cary 50 MPR; Varian, Hệ thống y tế, Palo Alto, California, Hoa Kỳ). Một đơn vị hoạt động của enzyme được định nghĩa là số tiền mà mang lại sự gia tăng trong 0,01 trong 60 phút 37° C.Mức độ acetylation chitin và chitosan mẫu đã được xác định bằng quang phổ UV-Vis, như được mô tả bởi ngô và Zivanovic [22].Để phân tích màu,,, và giá trị được đo bằng một thợ săn phòng thí nghiệm UltraScan XE Colorimeter (HunterLab, Reston, VA, Mỹ) bằng cách sử dụng CIELAB màu sắc Hệ thống, nơi cho thấy nhẹ nhàng trên quy mô khác nhau, từ 0 (đen) đến 100 (trắng), trong khi giá trị tích cực và tiêu cực của đại diện cho màu đỏ và màu xanh lá cây, và giá trị tích cực và tiêu cực của đại diện cho màu vàng và màu xanh, tương ứng. Chỉ số trắng (WI) đã được tính toán dựa trên những điều sau đây [3]:Độ nhớt của chitin và chitosan mẫu đã được xác định bằng cách sử dụng một rheometer (Physica MCR 150; Anton Paar, Ashland, VA, Mỹ) theo một biến thể của phương pháp Bajaj [23]. Chitin mẫu đã được nhúng vào 50% ethanol cho 30 phút 45° C để loại bỏ nội dung chất béo. Chitin sau đó nghiền thành bột. N, N-dimethylacetamide (DMA) (99,5%, Khan, Unilab; Ajax Finechem, NSW, Australia) có 5% lithium clorua (LiCl) (98.0%, Khan; LOBA Chemie, Mumbai, Ấn Độ) đã được sử dụng để chuẩn cho giải pháp chitin 0.1% (w/v). Hỗn hợp được khuấy cho 120 giờ ở nhiệt độ phòng. Giải pháp chitosan (1%, w/v) đã thu được bằng cách hòa tan chitosan bột trong pha loãng các axit axetic (1%, v/v). Hỗn hợp mỗi được khuấy trong 24 giờ ở 55° C. Một hình nón và tấm hình học với một góc hình nón 2.0° và bán kính của 24.975 mm được sử dụng cho các phép đo, và kích thước khoảng cách là 0.49 μ. Các tỷ lệ cắt khoảng 0.1 đến 100 s−1. Các thí nghiệm được tiến hành tại 20° C. Độ nhớt cao, Trung bình và thấp chitosan đại diện cho độ nhớt của ≥400, 200-400, và ≤200 mPa·s, tương ứng [23].

Kết quả (Việt) 2:

Độ pH của chất lỏng lên men đã được xác định bằng máy đo pH (Metrohm, Riverview, FL, USA). Tổng số axit chuẩn độ (TTA) được ước tính bằng cách chuẩn độ với NaOH 0,1 M để trung hòa tất cả các tổng proton chuẩn độ. Các thiết bị đầu cuối là ở pH 8,1. Việc tính toán thể hiện độ axit chuẩn độ về g / L của axit lactic. Giảm lượng đường được xác định bằng phương pháp Somogyi-Nelson [19]. Độ ẩm, protein, và các nội dung tro được coi là cơ sở để xác định decalcification (DC) và deproteinization (DP) hiệu quả. Độ ẩm, chất béo, và tro nội dung của mẫu được xác định bằng phương pháp AOAC [20]. Hàm lượng protein đã được phân tích bằng phương pháp Biuret sửa đổi, như được mô tả bởi Gornall et al. [21]. Một thời gian ngắn, 100 mg khô nguyên liệu đã được tiêu hóa với 10 ml dung dịch NaOH 0,5 M cho 4 giờ ở 40 ° C; protein trong hỗn hợp dung dịch kiềm được thu thập bằng cách ly tâm và được sử dụng để ước tính nồng độ protein. DC và DP được tính như tỷ lệ phần trăm, theo Rao et al. [14]. Để xác định các hoạt động phân giải protein, nổi trên mặt (enzyme thô) được thu thập từ các nền văn hóa bằng ly tâm ở 10.000 g ở 4 ° C trong 10 phút. Một trăm hai mươi ml của một giải pháp enzym pha loãng đã được thêm vào 480 ml ​​azocasein (0,5% trong 50 mM Tris buffer, pH 8,0, chứa 5 mM MgCl2) và hỗn hợp được ủ ở 37 ° C trong 1 giờ. Các phản ứng đã được ngừng lại bằng cách thêm vào 600 ml 10% axit trichloroacetic; này được trộn lẫn và được phép ngồi trong 30 phút ở nhiệt độ 4 ° C. Chất lỏng được tách ra từ các kết tủa bằng ly tâm ở 10.000 g ở 4 ° C trong 15 phút. Bốn trăm ml NaOH 1,8 N đã được thêm vào 800 ml dung dịch phản ứng, hỗn hợp, và đo cho độ hấp thụ ở 420 nm () sử dụng một đầu đọc microplate (Varian Cary 50 MPR; Varian, hệ thống y tế, Palo Alto, CA, USA) . Một đơn vị hoạt động enzyme được định nghĩa là số tiền mà mang lại sự gia tăng của 0,01 trong 60 phút ở 37 ° C. Mức độ acetyl hóa của chitin và chitosan mẫu được xác định bằng phổ UV-Vis, như mô tả của Wu và Zivanovic [22 ]. Đối với phân tích màu sắc,,, và các giá trị được xác định bởi một Hunter Lab Ultrascan XE Colorimeter (Hunterlab, Reston, VA, USA) sử dụng hệ thống màu CIELAB, nơi mà chỉ nhẹ nhàng trên thang điểm từ 0 (màu đen) đến 100 (màu trắng ), trong khi giá trị tích cực và tiêu cực của đại diện cho các giá trị màu đỏ và màu xanh lá cây, và tích cực và tiêu cực của đại diện cho màu vàng và màu xanh, tương ứng. Các chỉ số độ trắng (WI) đã được tính toán dựa trên những điều sau đây [3]: Độ nhớt của chitin và chitosan mẫu được xác định bằng cách sử dụng một Rheometer (Physica MCR 150; Anton Paar, Ashland, VA, USA) theo sự thay đổi của các phương pháp Bajaj [ 23]. Mẫu Chitin được nhúng vào ethanol 50% trong 30 phút ở 45 ° C để loại bỏ lượng mỡ. Các chitin sau đó được nghiền thành bột. N, N-dimethylacetamid (DMA) (99,5%, khan, Unilab; Ajax Finechem, NSW, Australia) có chứa 5% lithium chloride (LiCl) (98,0%, khan; LOBA Chemie, Mumbai, Ấn Độ) đã được sử dụng để chuẩn bị 0,1% (w / v) giải pháp chitin. Hỗn hợp được khuấy cho 120 giờ ở nhiệt độ phòng. Giải pháp Chitosan (1%, w / v) đã thu được bằng cách hòa tan bột chitosan trong axit acetic loãng (1%, v / v). Mỗi hỗn hợp được khuấy trong 24 giờ ở 55 ° C. Một hình nón và tấm hình học với một góc của hình nón 2,0 ° và bán kính của 24,975 mm được sử dụng cho các phép đo, và kích thước khoảng cách là 0,49 μ. Mức cắt dao 0,1-100 s-1. Các thí nghiệm được tiến hành tại 20 ° C. Cao, trung bình, độ nhớt và độ nhớt chitosan thấp đại diện của ≥400, 200-400, và ≤200 mPa · s, tương ứng [23].