2.5. Sensitivity of RT-LAMPTen-fold

2.5. Sensitivity of RT-LAMP

Ten-fold serial dilutions (10−1 to 10−7 diluted) of RNA extracted from TSV-infected shrimp was used as template for RT-LAMP following optimized conditions. The products were analyzed by 2% agarose gel electrophoresis.

2.6. RT-PCR for TSV detection

Ten-fold serial dilutions (10−1 to 10−6 diluted) of RNA extracted from TSV-infected shrimp was then amplified by RT-PCR from OIE manual of diagnostic tests for aquatic ani- mals 2006. The primers amplify a 231 bp sequence of the TSV genome (Nunan et al., 1998). The RT-PCR products were detected by 1.5% agarose gel electrophoresis following ethidium bromide staining and visualizing on a UV transluminator.

2.7. Nested RT-PCR for TSV detection

Ten-fold serial dilutions (10−3 to 10−7 diluted) of RNA extracted from TSV-infected shrimp was then amplified by RT-PCR using IQ2000TM TSV Detection and Prevention Sys- tem (Farming IntelliGene Technology Corporation) according to the manufacturer’s protocol. The nested PCR products were detected by 2% agarose gel electrophoresis following ethidium bromide staining and visualizing on a UV transluminator.

2.8. Specificity of RT-LAMP detection

The specificity of RT-LAMP primers was examined using 200 ng of total RNA/DNA extracted from YHV-infected shrimp, WSSV-infected shrimp, and healthy shrimp as the template.

Kết quả (Việt) 1:

2.5. sự nhạy cảm của RT-đènTen-Fold nối tiếp dilutions (10−1-10−7 pha loãng) của RNA được chiết xuất từ tôm nhiễm bệnh TSV được sử dụng làm mẫu cho RT-đèn sau tối ưu hóa điều kiện. Các sản phẩm được phân tích bằng 2% agarose gel electrophoresis.2.6. RT-PCR phát hiện TSVTen-Fold nối tiếp dilutions (10−1-10−6 pha loãng) của RNA được chiết xuất từ tôm nhiễm bệnh TSV sau đó khuếch đại bằng RT-PCR từ OIE hướng dẫn sử dụng của các xét nghiệm chẩn đoán đối với thủy sản ani-mals 2006. Các chất nền, mồi khuyếch đại một chuỗi bp 231 của TSV gen (Nunan và ctv., 1998). Các sản phẩm RT-PCR được phát hiện bởi 1,5% agarose gel electrophoresis sau ethidium bromua nhuộm và hình dung về một transluminator UV.2.7. lồng RT-PCR phát hiện TSVTen-Fold nối tiếp dilutions (10−3 để 10−7 pha loãng) của RNA được chiết xuất từ tôm nhiễm bệnh TSV sau đó được khuyếch đại bởi RT-PCR bằng cách sử dụng IQ2000TM TSV phát hiện và phòng chống Sys - tem (nông nghiệp IntelliGene công nghệ Corporation) theo giao thức của nhà sản xuất. Các sản phẩm PCR lồng nhau được phát hiện bởi 2% agarose gel electrophoresis sau ethidium bromua nhuộm và hình dung về một transluminator UV.2.8. Specificity RT-đèn phát hiệnCác đặc trưng của chất nền, mồi RT-đèn được kiểm tra bằng cách sử dụng 200 ng tất cả RNA/ADN được chiết xuất từ nhiễm YHV tôm, tôm nhiễm bệnh WSSV và tôm khỏe mạnh như các bản mẫu.

Kết quả (Việt) 2:

2.5. Độ nhạy của RT-LAMP

Mười lần pha loãng nối tiếp (10-1 đến 10-7 pha loãng) của RNA chiết xuất từ tôm TSV nhiễm đã được sử dụng làm khuôn cho RT-LAMP sau điều kiện tối ưu. Các sản phẩm được phân tích bằng 2% agarose gel điện.

2.6. RT-PCR để phát hiện TSV

Mười lần pha loãng nối tiếp (10-1 đến 10-6 pha loãng) của RNA chiết xuất từ tôm TSV nhiễm sau đó được khuếch đại bằng RT-PCR từ OIE tay xét nghiệm chẩn đoán cho mals ani- thủy sản năm 2006. Các mồi khuyếch đại một chuỗi 231 bp của gen TSV (Nunan et al., 1998). Các sản phẩm RT-PCR được phát hiện bởi 1,5% agarose gel điện sau nhuộm ethidium bromide và hình dung về một transluminator UV.

2.7. Nested RT-PCR để phát hiện TSV

pha loãng serial Mười lần (10-3 đến 10-7 pha loãng) của RNA chiết xuất từ tôm TSV nhiễm sau đó được khuếch đại bằng RT-PCR sử dụng IQ2000TM TSV Phát hiện và phòng chống thống tem (Farming IntelliGene Công nghệ Tổng công ty) theo giao thức của nhà sản xuất. Các sản phẩm PCR lồng nhau đã được phát hiện bởi 2% agarose gel điện di sau nhuộm ethidium bromide và hình dung về một transluminator UV.

2.8. Speci fi thành phố phát hiện RT-LAMP

đặc hiệu của mồi RT-LAMP đã được kiểm tra sử dụng 200 ng tổng RNA / DNA chiết xuất từ tôm YHV nhiễm, tôm WSSV nhiễm, và tôm khỏe mạnh như mẫu.