Isolation and Characterization of P

Isolation and Characterization of Plant Protein Complexes by Mass Spectrometry
Even though high-resolution LC-MS (Liquid chromatography–mass spectrometry) strategies have resolved some of the issues with direct analysis of complex peptide mixtures, other problems have risen from metabolites and proteases in great abundance -e.g. cell wall polysaccharides and polyphenols, lipids, and starch [12]. Therefore, these substances were heavily diluted or removed completely. However, such purification can often lead to sample loss [13]. Hence, the use of self-packed nano-LC columns for purification before matrix assisted laser desorption/ionization Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) has been employed successfully [14].
Protein extraction
The protein-pellet homogenization method and the lyses buffer have a significant influence on protein solubilization and separation in classical proteomic analysis of plants. Most of the protocols used in extraction of proteins from plant tissues are based on either phenol
or TCA/acetone precipitation methods. The TCA/acetone procedure has some limitations. For example, the resulting pellet may be hard to dissolve; nucleic acids longer than ~20 nucleotides can be precipitated; and in some cases, proteins can be hydrolyzed by TCA. Protein extraction
and sample preparation, particularly from recalcitrant tissues such as grape leaf, cucurbit pericarp, pine needle (generally containing high level of interfering substances, such as phenolic compounds, proteolytic and oxidative enzymes, terpenes, organic acids and carbohydrates) are among the most challenging aspects of proteomic analyses [15].
It has been demonstrated in recalcitrant plant tissues and others that TCA-acetone–phenol-based method is more effective than TCA/acetone precipitation alone prior to protein solubilization [12].However, various protein extraction and solubilization buffers with a diversity of chemical compositions and concentrations have been used, such as Mg/NP-40 buffer and Tris Buffer. The use of PMSF, a protein inhibitor, and many other protease inhibitors, function to minimize the
proteolysis of proteins during isolation [16].

Kết quả (Việt) 1:

Cô lập và đặc tính của khu phức hợp Protein thực vật bởi Mass SpectrometryMặc dù độ phân giải cao LC-MS (lỏng sắc kí-mass spectrometry) chiến lược đã giải quyết một số vấn đề với các phân tích trực tiếp của khu phức hợp peptide hỗn hợp, các vấn đề đã tăng từ chất chuyển hóa và protease trong sự phong phú tuyệt vời-ví dụ như vách tế bào polysaccharides và polyphenol, chất béo và tinh bột [12]. Do đó, các chất này đã được rất nhiều pha loãng hoặc gỡ bỏ hoàn toàn. Tuy nhiên, như vậy làm sạch thường xuyên có thể dẫn đến mẫu mất [13]. Do đó, việc sử dụng nano-LC tự đóng gói cột cho lọc trước khi hỗ trợ ma trận laser desorption/ion hóa Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) đã được làm việc thành công [14].Chiết xuất proteinPhương pháp homogenization protein-miếng và đệm lyses có một ảnh hưởng đáng kể vào protein solubilization và tách trong cổ điển proteomic phân tích của nhà máy. Hầu hết các giao thức được sử dụng trong chiết xuất protein từ thực vật mô được dựa trên hoặc là phenolhoặc TCA/axeton mưa phương pháp. Thủ tục TCA/axeton có một số hạn chế. Ví dụ, viên kết quả có thể được khó khăn để hòa tan; có thể được kết tủa acid nucleic dài hơn ~ 20 nucleotide; và trong một số trường hợp, protein có thể được hydrolyzed bởi TCA. Chiết xuất proteinvà chuẩn bị mẫu, đặc biệt là từ ương ngạnh mô như lá nho, cucurbit pericarp, cây thông kim (thường có chứa mức độ cao của chất can thiệp, chẳng hạn như các hợp chất phenolic, proteolytic và oxy hóa enzyme, tecpen, axit hữu cơ và carbohydrate) là một trong những khía cạnh thách thức nhất của phân tích proteomic [15].Nó đã được chứng minh trong các mô thực vật ngoan cố và những người khác rằng TCA-axeton-phenol dựa trên phương pháp có hiệu quả hơn so với TCA/axeton mưa một mình trước khi protein solubilization [12]. Tuy nhiên, nhiều protein tách chiết và solubilization đệm với một sự đa dạng về thành phần hóa học và nồng độ đã được sử dụng, chẳng hạn như bộ đệm Mg/NP-40 và Tris đệm. Sử dụng PMSF, một chất ức chế protein và nhiều khác ức chế protease, chức năng để giảm thiểu cácproteolysis protein trong sự cô lập [16].

Kết quả (Việt) 2:

Phân lập và Đặc tính của phức hợp protein thực vật của Mass Spectrometry
Mặc dù độ phân giải cao LC-MS (Liquid sắc ký khối phổ) các chiến lược đã được giải quyết một số vấn đề với phân tích trực tiếp hỗn hợp peptide phức tạp, vấn đề khác đã tăng từ chất chuyển hóa và protease trong tuyệt vời sự phong phú -eg polysaccharides thành tế bào và polyphenol, chất béo, tinh bột và [12]. Do đó, các chất này đã được rất nhiều pha loãng hoặc gỡ bỏ hoàn toàn. Tuy nhiên, thanh tịnh như vậy thường có thể dẫn đến mẫu mất [13]. Do đó, việc sử dụng các cột nano-LC tự đóng gói để thanh lọc trước khi giải hấp ma trận hỗ trợ laser / ion hóa Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) đã được sử dụng thành công [14].
Chiết Protein
Các phương pháp đồng nhất protein thức ăn viên và các bộ đệm làm tan có một ảnh hưởng đáng kể đến hòa tan protein và phân chia trong phân tích protein học cổ điển của các nhà máy. Hầu hết các giao thức được sử dụng trong khai thác của các protein từ các mô thực vật được dựa trên một trong hai phenol
hoặc các phương pháp TCA / axeton mưa. Thủ tục TCA / axeton có một số hạn chế. Ví dụ, các pellet kết quả có thể được khó khăn để hòa tan; axit nucleic dài hơn ~ 20 nucleotide có thể được kết tủa; và trong một số trường hợp, các protein có thể bị thủy phân bởi TCA. Chiết protein
và chuẩn bị mẫu, đặc biệt là từ các mô cứng đầu như lá nho, vỏ quả bầu bí, kim thông (thường có chứa mức độ cao của chất can thiệp, chẳng hạn như các hợp chất phenolic, phân giải protein và oxy hóa enzyme, tecpen, axit hữu cơ và carbohydrate) là một trong những nhất những thách thức của các phân tích proteomic [15].
Nó đã được chứng minh trong các mô thực vật ngoan cố và những người khác rằng phương pháp TCA-acetone-phenol dựa trên hiệu quả hơn TCA / axeton mưa một mình trước khi protein hòa tan [12] .Tuy nhiên, chiết xuất protein khác nhau và bộ đệm hòa tan với sự đa dạng về thành phần hóa học và nồng độ đã được sử dụng, chẳng hạn như Mg / NP-40 đệm Tris và đệm. Việc sử dụng các PMSF, một chất ức chế protein và nhiều chất ức chế protease khác, chức năng để giảm thiểu
sự phân giải protein của protein trong quá trình cô lập [16].