The common experimental procedure f

The common experimental procedure for pollen proteomic analysis includes gelbased separation of proteins, MS analysis, subsequent database searching and data mining (illustrated in Fig. 17.2). Up until now, two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) combined with MS analysis has proved the most potent and reliable method for proteomic investigations (see Chap. 2 by Hurkman and Tanaka, this volume).
Most of the published proteomic work on pollen and pollen tubes so far has been based on total protein samples. Because mature pollen grains are often isolated from pooled pollen samples, protein samples from pollen grains should be considered as “average samples” and not biological replicates (Holmes-Davis et al. 2005). An ideal protocol for total protein preparation should reproducibly resolve almost all proteins in a proteome with a low contamination of other molecules. Additionally, proper purification and enrichment of proteins before sample loading are required for most samples derived from plant material. Due to the rigid nature of the pollen cell wall, efforts should be made to fully crush the solid wall and release the proteins before sample preparation. Total protein precipitation is achieved using TCA and acetone in commonly used protocols, which are based on protein denaturation under acidic and/ or hydrophobic conditions to help concentrate proteins and remove contaminants.

Kết quả (Việt) 1:

Thủ tục thử nghiệm phổ biến cho phấn hoa proteomic phân tích bao gồm gelbased tách biệt của protein, MS phân tích, sau đó cơ sở dữ liệu tìm kiếm và khai thác dữ liệu (minh họa trong hình 17.2). Cho đến bây giờ, hai chiều gel electrophoresis (2 DE) kết hợp với phân tích MS đã chứng minh mạnh và đáng tin cậy phương pháp nhất cho điều tra proteomic (xem chap 2 bởi Hurkman và Tanaka, khối này).Hầu hết các công việc proteomic được xuất bản trên phấn hoa và phấn hoa ống cho đến nay đã được dựa trên các mẫu tổng protein. Bởi vì hạt phấn hoa trưởng thành thường bị cô lập từ những phấn hoa mẫu, các mẫu protein từ hạt phấn hoa nên được coi là "trung bình mẫu" và sinh học không sao chép (Holmes-Davis et al. 2005). Một giao thức lý tưởng cho tất cả protein chuẩn bị reproducibly nên giải quyết hầu như tất cả protein trong một proteome với một ô nhiễm thấp của các phân tử khác. Ngoài ra, thích hợp làm sạch và làm giàu protein trước mẫu tải là cần thiết cho hầu hết các mẫu có nguồn gốc từ nguyên liệu thực vật. Do tính cứng nhắc của vách tế bào của phấn hoa, nỗ lực nên được thực hiện hoàn toàn đè bẹp các bức tường vững chắc và phát hành các protein trước khi chuẩn bị mẫu. Tất cả chất đạm mưa là đạt được bằng cách sử dụng TCA và acetone trong giao thức thường được sử dụng, dựa trên protein denaturation trong điều kiện có tính axit và / hoặc kỵ nước để giúp tập trung các protein và loại bỏ các chất gây ô nhiễm.

Kết quả (Việt) 2:

Tiến trình thí nghiệm thông thường để phân tích phấn hoa proteomic bao gồm tách gelbased protein, phân tích MS, tìm kiếm cơ sở dữ liệu tiếp theo và khai thác dữ liệu (minh họa trong hình. 17,2). Cho đến bây giờ, hai chiều gel điện (2-DE) kết hợp với MS phân tích đã chứng minh phương pháp mạnh nhất và đáng tin cậy để điều tra protein học (xem Chap. 2 bởi Hurkman và Tanaka, khối lượng này).
Hầu hết các công việc proteomic bố trên ống phấn và phấn hoa cho đến nay đã được dựa trên tổng số mẫu protein. Bởi vì các hạt phấn hoa trưởng thành thường được phân lập từ mẫu phấn hoa gộp lại, các mẫu protein từ các hạt phấn hoa nên được coi là "mẫu trung bình" và không nhắc lại sinh học (Holmes-Davis et al. 2005). Một giao thức lý tưởng cho tổng chuẩn bị protein reproducibly nên giải quyết gần như tất cả các protein trong một hệ protein với ô nhiễm thấp của các phân tử khác. Ngoài ra, lọc thích hợp và làm giàu protein trước khi tải mẫu được yêu cầu cho hầu hết các mẫu có nguồn gốc từ thực vật. Do tính chất cứng nhắc của bức tường tế bào phấn hoa, cần phải nỗ lực để đè bẹp hoàn toàn các bức tường vững chắc và phát hành các protein trước khi chuẩn bị mẫu. Tổng lượng mưa protein đạt được sử dụng TCA và acetone trong các giao thức thường được sử dụng, mà là dựa trên sự biến tính protein trong điều kiện có tính axit và / hoặc kỵ để giúp tập trung protein và loại bỏ chất gây ô nhiễm. lọc thích hợp và làm giàu protein trước khi tải mẫu được yêu cầu cho hầu hết các mẫu có nguồn gốc từ thực vật. Do tính chất cứng nhắc của bức tường tế bào phấn hoa, cần phải nỗ lực để đè bẹp hoàn toàn các bức tường vững chắc và phát hành các protein trước khi chuẩn bị mẫu. Tổng lượng mưa protein đạt được sử dụng TCA và acetone trong các giao thức thường được sử dụng, mà là dựa trên sự biến tính protein trong điều kiện có tính axit và / hoặc kỵ để giúp tập trung protein và loại bỏ chất gây ô nhiễm. lọc thích hợp và làm giàu protein trước khi tải mẫu được yêu cầu cho hầu hết các mẫu có nguồn gốc từ thực vật. Do tính chất cứng nhắc của bức tường tế bào phấn hoa, cần phải nỗ lực để đè bẹp hoàn toàn các bức tường vững chắc và phát hành các protein trước khi chuẩn bị mẫu. Tổng lượng mưa protein đạt được sử dụng TCA và acetone trong các giao thức thường được sử dụng, mà là dựa trên sự biến tính protein trong điều kiện có tính axit và / hoặc kỵ để giúp tập trung protein và loại bỏ chất gây ô nhiễm.

Kết quả (Việt) 3:

Phấn hoa của nhóm protein thường bao gồm chương trình học phân tích thí nghiệm phân tích khối phổ gelbased protein tách, mở khóa cho cơ sở dữ liệu tìm kiếm và khai thác dữ liệu (đồ 17,2 đã - si).Cho đến bây giờ, 2D gel điện (2-DE) kết hợp với phân tích khối phổ đã được chứng minh là hiệu quả nhất và đáng tin cậy của nhóm học phương pháp nghiên cứu protein (xem chương 2 của Hurkman và Tanaka, cái cuộn).Cho đến giờ, hầu hết published in phấn hoa và protein trên nhóm học nghiên cứu đều dựa trên mẫu tổng protein;.Khi trưởng thành thường tách biệt với mẫu phấn hoa, phấn hoa các protein của mẫu, nên bị coi là "trung bình mẫu sao chép" và phi sinh học (Holmes Davis et);.2005).Một nơi lý tưởng để tổng hợp protein chuẩn bị nên có thể giải quyết một ô nhiễm thấp của phân tử protein khác hầu như tất cả các nhóm protein.Bên cạnh đó, phù hợp, lọc và mẫu - làm giàu protein cần thiết cho tải trước khi hầu hết các mẫu vật liệu từ thực vật.Do tính chất kiên cường của phấn hoa thành tế bào, nên cố gắng để đập vỡ tường vững chắc và thả protein mẫu chuẩn bị trước.Tổng lượng mưa thường sử dụng TCA acetone protein là thỏa thuận đạt được, đó là dựa trên thay đổi giới tính của protein có tính axit và / hoặc chất kị nước dưới những điều kiện giúp cô đặc protein và chất thải được gỡ bỏ.