Detection of PCR products: PCR prod

Detection of PCR products: PCR products were separated in 2%
agarose gel 1 TBE buffer stained with ethidium bromide and
visualized by ultraviolet (UV) transillumination. We also tested
samples by Real time RT-PCR method (Creelan et al., 2002) using
the primers and probe (FAM and TAMRA) for both Matrix gene (M
gene) and Fusion gene as shown Table 1.
One-step real-time RT-PCR kits QuantiTect Probe RT-PCR kit
(Qiagen GmbH, Hilden, Germany) was used. The reaction mixture
for both assays contained 5 μl of RNA, 12.5 μl of 2× Buffer Mix, 900
nM of each primer and 0.25 μl of Taq Mix. In the M-gene and F
gene assay, 250nM of M-probe was added. The RT-PCR thermal
profile consisted of an initial RT step of 50°C for 30 min, followed by
denaturation at 95°C for 15 min and 45 cycles of 20 s at 95°C and
60 s at 58°C in the F-gene assay and 52°C in the M gene assay. In
order to test the RT-PCR efficiency, the La Sota strain RNAs
extracted from the antigen solutions provided in house (CVL) were
diluted serially 10-fold in sterile, nuclease-free water.
RNA extracted from Newcastle antigen (used in HI
test) as positive control and was included in each test (Figure 1).
Also some known positive samples from commercial chicken were
tested. Our system could detect these samples. We got Ct about 20
and made standard curve by serial dilution 1:10 to check PCR
efficiency. Efficiency was calculated about -3.3.
Serological procedure

Figure 1. Result of the PCR assay: Amplifying 362-bp segment of F-gene of NDV. M: DNA (100 bp) marker, L1: positive control (LaSota
vaccine strain), L2-L6: negative samples, L7: negative control.

Kết quả (Việt) 1:

Các phát hiện của Đảng Cộng sản Romania sản phẩm: Đảng Cộng sản Romania sản phẩm đã được tách ra trong 2%agarose gel 1 TBE đệm màu với ethidium bromua vàhình dung bởi tia cực tím (UV) transillumination. Chúng tôi cũng thử nghiệmmẫu bằng phương pháp thời gian thực RT-Đảng Cộng sản Romania (Creelan et al., 2002) bằng cách sử dụngchất nền, mồi và thăm dò (FAM và TAMRA) cho cả hai ma trận gen (Mgen) và Fusion gen như hiển thị bảng 1.One-bước thời gian thực RT-PCR bộ dụng cụ QuantiTect thăm dò RT-PCR kit(Qiagen GmbH, Hilden, Đức) đã được sử dụng. Hỗn hợp phản ứngđể thử nghiệm cả hai chứa 5 μl RNA, 12,5 μl 2 × bộ đệm trộn, 900nM của mỗi mồi và 0,25 μl Taq kết hợp. M-gen và Fkhảo nghiệm gen, 250nM M-thăm dò đã được bổ sung. RT-Đảng Cộng sản Romania nhiệtHồ sơ bao gồm một bước RT khởi đầu của 50° C trong 30 phút, tiếp theo làdenaturation tại 95° C cho 15 phút và các chu kỳ 45 20 s tại 95° C và60 s ở 58° C trong khảo nghiệm F-gen và 52° C trong khảo nghiệm gen M. Ởđể kiểm tra hiệu quả RT-Đảng Cộng sản Romania, sự căng thẳng La Sota Rnas và Bắc Irelandchiết xuất từ các giải pháp kháng nguyên được cung cấp trong nhà (CVL)pha loãng serially 10-fold trong nước vô trùng, nuclease miễn phí.RNA được chiết xuất từ Newcastle kháng nguyên (được sử dụng trong HIkiểm tra) như là tích cực điều khiển và được bao gồm trong mỗi bài kiểm tra (hình 1).Cũng đã một số mẫu tích cực được biết đến từ thương mại gàthử nghiệm. Hệ thống của chúng tôi có thể phát hiện các mẫu. Chúng tôi đã nhận Ct về 20và thực hiện tiêu chuẩn đường cong nối tiếp pha loãng 1:10 để kiểm tra xem Đảng Cộng sản Romaniahiệu quả. Hiệu quả đã được tính toán về-3.3.Thủ tục serologicalHình 1. Kết quả của các khảo nghiệm PCR: khuyếch đại 362-bp phân đoạn của F-gen của NDV. M: DNA (100 bp) đánh dấu, L1: tích cực kiểm soát (LaSotatiêm chủng), L2-L6: phủ định mẫu, L7: tiêu cực điều khiển.

Kết quả (Việt) 2:

Phát hiện sản phẩm PCR: sản phẩm PCR đã được tách ra trong 2%
gel agarose 1 TBE đệm nhuộm với ethidium bromide và
hình dung bằng tia cực tím (UV) transillumination. Chúng tôi cũng đã thử nghiệm
mẫu bằng phương pháp RT-PCR thời gian thực (Creelan et al., 2002) bằng cách sử dụng
các đoạn mồi và thăm dò (FAM và Tamra) cho cả hai gen Matrix (M
gen) và gen Fusion như Bảng 1.
Một bước gian thực bộ dụng cụ time RT-PCR kit QuantiTect Probe RT-PCR
(Qiagen GmbH, Hilden, Đức) đã được sử dụng. Hỗn hợp phản ứng
cho cả hai xét nghiệm chứa 5 ml RNA, 12,5 ml 2 × Buffer Mix, 900
nM của mỗi lớp sơn lót và 0,25 ml Taq Mix. Trong M-gen và F
gen khảo nghiệm, 250nM của M-thăm dò đã được bổ sung. Các nhiệt RT-PCR
hồ sơ gồm một RT bước ban đầu là 50 ° C trong 30 phút, tiếp theo là
sự biến tính ở 95 ° C trong 15 phút và 45 chu kỳ của 20 s ở 95 ° C và
60 s ở 58 ° C trong F khảo nghiệm -gene và 52 ° C trong gen khảo nghiệm M. Trong
thứ tự để kiểm tra hiệu quả RT-PCR, các RNA căng La Sota
chiết xuất từ các giải pháp kháng nguyên được cung cấp trong nhà (CVL) đã được
pha loãng serially 10 lần trong vô trùng, nước nuclease-free.
RNA chiết xuất từ Newcastle kháng nguyên (được sử dụng trong HI
test ) là tích cực kiểm soát và đã được bao gồm trong mỗi bài kiểm tra (Hình 1).
Ngoài ra một số mẫu dương tính được biết đến từ gà thương mại đã được
thử nghiệm. Hệ thống của chúng tôi có thể phát hiện các mẫu. Chúng tôi đã nhận Ct khoảng 20
và thực hiện đường cong tiêu chuẩn của serial pha loãng 1:10 đến kiểm tra PCR
hiệu quả. Hiệu quả đã được tính toán khoảng -3,3.
thủ tục huyết thanh học Hình 1. Kết quả xét nghiệm PCR: Khuếch đại đoạn 362 bp của F-gen của NDV. M: DNA (100 bp) marker, L1: chứng dương (LaSota chủng vaccine), L2-L6: mẫu âm tính, L7: kiểm soát tiêu cực.