Fig 3. Anti-HCMV gRNAs efficiently

Fig 3. Anti-HCMV gRNAs efficiently abrogate HCMV replication in human cells.
a) Targeting essential HCMV genes with CRISPR/Cas9 impairs HCMV replication. MRC5 cells transduced with the indicated gRNAs were infected with HCMV-eGFP strain TB40/E at an MOI of 0.05 and subjected to flow cytometry at 2, 5, 8, and 11 dpi to assess the percentage of eGFP-positive infected cells. For each essential gene, four different gRNAs were monitored. Besides targeting human genes as controls, gRNAs targeting nonessential HCMV genes US6, US7, and US11 were included. b) Anti-HCMV gRNAs impair replication of both TB40/E and AD169 strains with the exception of anti-UL84 gRNAs. gRNA-expressing MRC5 cells were infected with eGFP-tagged TB40/E or AD169 and the percentage of eGFP-expressing cells was monitored at 2, 5, and 8 dpi. For bar diagrams in a) triplicate measurements + STD are presented. Bar diagrams in b) are from (at least) duplicate measurements.
http://dx.doi.org/10.1371/journal.ppat.1005701.g003
The inhibitory capacity of the anti-HCMV gRNAs was also assessed towards a different strain of HCMV: AD169. Most gRNAs that were effective at limiting TB40/E replication also impaired AD169 replication (Fig 3B). Unlike TB40/E, AD169 was targeted successfully by two independent gRNAs directed against UL84 (Fig 3B). Hence, replication of AD169 crucially depends on UL84, whereas replication of TB40/E does not. This data agrees with experiments described by Spector and Yetming [43].
In conclusion, effective inhibition of HCMV replication can be achieved using the CRISPR/Cas9 technology; this requires targeting of essential HCMV genes

Kết quả (Việt) 1:

Hình 3. Anti-HCMV gRNAs hiệu quả thay bỏ HCMV sao chép trong các tế bào của con người.a) nhắm mục tiêu cần thiết HCMV gen với CRISPR/Cas9 làm suy yếu nhân rộng HCMV. Tế bào MRC5 transduced với gRNAs được chỉ định đã bị nhiễm HCMV-eGFP căng TB40/E tại một MOI 0,05 và chịu các dòng chảy cytometry 2, 5, 8 và 11 dpi để đánh giá tỷ lệ phần trăm của các tế bào bị nhiễm eGFP tích cực. Cho mỗi gen cần thiết, bốn gRNAs khác nhau đã được theo dõi. Bên cạnh việc nhắm mục tiêu các gen của con người như điều khiển, gRNAs nhắm mục tiêu không thiết yếu HCMV gen US6, US7 và US11 được bao gồm. b) anti-HCMV gRNAs gây ảnh hưởng rộng của cả hai TB40/E và AD169 chủng ngoại trừ anti-UL84 gRNAs. thể hiện gRNA MRC5 tế bào bị nhiễm eGFP dán TB40/E hoặc AD169 và tỷ lệ phần trăm của các tế bào eGFP thể hiện được theo dõi tại 2, 5 và 8 dpi. Nhất thanh sơ đồ trong một) đo đạc triplicate + STD được trình bày. Bar sơ đồ b) là từ các đo đạc trùng lặp (ít nhất).http://DX.Doi.org/10.1371/Journal.ppat.1005701.g003Khả năng ức chế gRNAs anti-HCMV cũng được đánh giá theo hướng một chủng khác nhau của HCMV: AD169. Hầu hết các gRNAs đã được hiệu quả hạn chế sao chép TB40/E cũng hỏng AD169 sao chép (hình 3B). Không giống như TB40/E, AD169 được nhắm mục tiêu thành công bởi hai gRNAs độc lập nhằm chống lại UL84 (hình 3B). Do đó, bản sao của AD169 chủ yếu phụ thuộc vào UL84, trong khi các bản sao của TB40/E thì không. Dữ liệu này đồng ý với các thí nghiệm mô tả bởi Spector và Yetming [43].Trong kết luận, có hiệu quả ức chế HCMV nhân bản có thể đạt được bằng cách sử dụng công nghệ CRISPR/Cas9; Điều này đòi hỏi nhắm mục tiêu các thiết yếu HCMV gen

Kết quả (Việt) 2:

Hình 3. Chống HCMV gRNAs hiệu quả bãi bỏ HCMV nhân rộng trong các tế bào của con người.
A) Nhắm mục tiêu gen HCMV thiết yếu với CRISPR / Cas9 làm suy yếu HCMV nhân rộng. MRC5 tế bào tải nạp với gRNAs chỉ bị nhiễm HCMV-EGFP căng TB40 / E tại một MOI 0,05 và bị đo dòng tế bào ở 2, 5, 8, và 11 dpi để đánh giá tỷ lệ phần trăm của các tế bào bị nhiễm EGFP dương. Đối với mỗi gen cần thiết, bốn gRNAs khác nhau đã được theo dõi. Bên cạnh mục tiêu gen của con người như điều khiển, gRNAs nhắm mục tiêu gen HCMV không cần thiết US6, US7, và US11 được thu nhận. b) Chống HCMV gRNAs làm suy yếu nhân rộng của cả hai chủng TB40 / E và AD169 với ngoại lệ của anti-UL84 gRNAs. gRNA-hiện MRC5 tế bào bị nhiễm EGFP gắn thẻ TB40 / E hoặc AD169 và tỷ lệ phần trăm của các tế bào EGFP diễn đạt được theo dõi vào lúc 2, 5, 8 và dpi. Đối với sơ đồ thanh trong một) đo ba lần + STD được trình bày. Sơ đồ Bar trong b) là từ (ít nhất) lặp lại phép đo.
Http://dx.doi.org/10.1371/journal.ppat.1005701.g003
Khả năng ức chế của các anti-HCMV gRNAs cũng được đánh giá đối với một chủng khác nhau của HCMV: AD169. Hầu hết gRNAs rằng có hiệu quả trong việc hạn chế TB40 / E sao chép cũng khiếm nhân rộng AD169 (hình 3B). Không giống như TB40 / E, AD169 được nhắm mục tiêu thành công bởi hai gRNAs độc lập chống lại UL84 (hình 3B). Do đó, nhân rộng AD169 điều quan trọng phụ thuộc vào UL84, trong khi nhân rộng TB40 / E thì không. Những thông tin này đồng ý với các thí nghiệm được mô tả bởi Spector và Yetming [43].
Trong kết luận, sự ức chế hiệu quả của HCMV nhân rộng có thể đạt được bằng cách sử dụng CRISPR / công nghệ Cas9; điều này đòi hỏi mục tiêu của các gen cần thiết HCMV