Recombinant human Granulocyte Macro

Recombinant human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor (rhGM-CSF) is an FDA approved therapeutic glycoprotein for the treatment of neutropenia and leukemia in combination with chemotherapies. Recombinant hGM-CSF production in the baker’s yeast Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae)is recognized as safe and is suitable for large-scale industrial fermentation processes. Recently, methylotrophic yeast Pichia pastoris (P. pastoris)is emerged as an alternative due to its shorter and less immunogenic glycosylated productions; higher cell density growth and higher foreign protein secretion than those of S. cerevisiae. In this study, we compare from gene to production of rhGM-CSFs produced from both yeasts. After codon optimization in silico, the optimized sequence of rhGM-CSF showed no different in both yeasts regarding frequent codon usage. However, in accordance with hyper-glycosylation capacity, rhGM-CSFs from S. cerevisiae BY4742 showed a significant discrepancy in expression profile from those of P. pastoris X33. Fed-batch fermentation in 3.5-liter medium supplemented with methanol or galactose for P. pastoris X33 or S. cerevisiaeBY4742, respectively, over 72 hours showed that rhGMCSF was highly secreted in P. pastoris (285 vs 64 mg total secreted protein/L). SDS-PAGE analysis showed purified rhGM-CSF species of molecular weights ranging from 30 to more than 60 kDa (dependent upon glycosylation status) and ion exchange chromatography gave higher purity and recovery yield to that of hydrophobic interaction chromatography. With the same purity, purified rhGM-CSFs from P. pastoriswere 327 times higher to those of S. cerevisiae, in term of proliferative stimulating capacity on an hGM-CSF dependent cell line TF-1. The presented data accumulates further supportive evidence for methylotrophic yeast P. pastoris as an alternative for foreign glycoprotein production.

Kết quả (Việt) 1:

Tái tổ hợp bạch cầu hạt đại thực bào thuộc địa của kích thích yếu tố con người (rhGM-CSF) là một FDA chấp thuận điều trị glycoprotein để điều trị giảm bạch cầu và ung thư máu kết hợp với chemotherapies. HGM-CSF tái tổ hợp sản xuất ở baker của nấm men Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) được công nhận là an toàn và phù hợp cho quá trình lên men công nghiệp quy mô lớn. Gần đây, nấm men methylotrophic Pichia pastoris (P. pastoris) nổi lên như là một thay thế do của nó ngắn hơn và ít immunogenic glycosylated productions; cao hơn tăng trưởng mật độ tế bào và cao hơn nước ngoài protein tiết so với S. cerevisiae. Trong nghiên cứu này, chúng tôi so sánh từ gen sang sản xuất rhGM-CSFs được sản xuất từ nấm men đều. Sau khi tối ưu hóa codon trong silico, dãy rhGM-CSF, tối ưu hóa cho thấy không khác nhau trong cả hai men liên quan đến việc sử dụng thường xuyên codon. Tuy nhiên, phù hợp với năng lực siêu glycosylation, rhGM-CSFs từ S. cerevisiae BY4742 đã cho thấy một sự khác biệt đáng kể trong biểu hiện hồ sơ của P. pastoris X33. Fed-lô lên men trong 3.5 lít vừa bổ sung với methanol hoặc galactose P. pastoris X33 hoặc S. cerevisiaeBY4742, tương ứng, hơn 72 giờ đã cho thấy rằng rhGMCSF cao được tiết ra trong P. pastoris (285 vs 64 mg tổng tiết ra protein/L). Dùng mũi SDS-TRANG phân tích cho thấy loài tinh khiết rhGM-CSF khối lượng phân tử từ 30 tới 60 kDa (phụ thuộc vào tình trạng glycosylation) và sắc ký trao đổi ion cho độ tinh khiết cao hơn và năng suất phục hồi của sắc ký kỵ tương tác. Với cùng một độ tinh khiết, tinh khiết rhGM CSFs từ P. pastoriswere cao 327 lần với S. cerevisiae, trong thuật ngữ của proliferative kích thích năng lực trên một đường dây phụ thuộc vào di động hGM-CSF TF-1. Trình bày dữ liệu tích lũy thêm hỗ trợ bằng chứng cho nấm men methylotrophic P. pastoris như là một thay thế cho sản xuất nước ngoài glycoprotein.

Kết quả (Việt) 2:

Tái tổ hợp nhân bạch cầu hạt đại thực bào Colony Stimulating Factor (rhGM-CSF) là một FDA chấp thuận glycoprotein trị liệu để điều trị giảm bạch cầu và bạch cầu kết hợp với hóa trị liệu. sản xuất HGM-CSF tái tổ hợp ở nấm men Saccharomyces cerevisiae của thợ làm bánh (S. cerevisiae) được công nhận là an toàn và phù hợp cho quá trình lên men công nghiệp quy mô lớn. Gần đây, nấm men Pichia pastoris methylotrophic (P. pastoris) đang nổi lên như là một thay thế do sản xuất glycosylated ngắn hơn và ít miễn dịch của nó; tăng trưởng mật độ tế bào cao hơn và tiết protein nước ngoài cao hơn so với S. cerevisiae. Trong nghiên cứu này, chúng tôi so sánh từ gen để sản xuất rhGM-CSF được sản xuất từ ​​cả nấm men. Sau codon tối ưu hóa trong silico, trình tự tối ưu hóa của rhGM-CSF cho thấy không có khác nhau trong cả hai loại men liên quan đến việc sử dụng codon thường xuyên. Tuy nhiên, theo khả năng siêu glycosyl hóa, rhGM-CSF từ S. cerevisiae BY4742 cho thấy một sự khác biệt đáng kể trong hồ sơ thể hiện từ những P. pastoris x33. Fed-lô lên men trong môi trường 3.5 lít có bổ sung methanol hoặc galactose cho P. pastoris x33 hoặc S. cerevisiaeBY4742, tương ứng, hơn 72 giờ cho thấy rằng rhGMCSF được đánh giá cao tiết trong P. pastoris (285 vs 64 mg tổng tiết ra protein / L) . phân tích SDS-PAGE cho thấy loài rhGM-CSF tinh khiết của trọng lượng phân tử khác nhau, từ 30 đến hơn 60 kDa (phụ thuộc vào tình trạng glycosyl hóa) và trao đổi ion sắc ký cho sự tinh khiết và phục hồi năng suất cao hơn với sắc ký tương tác kỵ nước. Với độ tinh khiết tương tự, tịnh rhGM-CSF từ P. pastoriswere cao hơn 327 lần để những người của S. cerevisiae, trong thời hạn khả năng kích thích tăng sinh trên một HGM-CSF dòng tế bào phụ thuộc TF-1. Số liệu tích lũy thêm bằng chứng hỗ trợ cho men methylotrophic P. pastoris như một sự thay thế cho sản xuất glycoprotein nước ngoài.

Kết quả (Việt) 3:

Tập hợp người bạch cầu hạt rơi xuống đại thực bào tập kích thích tố (rhGM-CSF) là FDA phê chuẩn điều trị hóa trị glycoprotein kết hợp giảm bạch cầu và điều trị bệnh bạch cầu.Bánh mì hGM-CSF men Saccharomyces cerevisiae tái tổ hợp sản xuất (S. cerevisiae) được xem như là an toàn và phù hợp với ngành công nghiệp quy mô lớn quá trình lên men.Gần đây, lên men đỏ (P. pastoris) như là một thay thế cho due to its ngắn ngủi của miễn dịch đường cơ sở hóa sản phẩm; mật độ cao và tăng trưởng cao hơn so với protein tiết Saccharomyces cerevisiae.Trong cuộc nghiên cứu này, chúng ta đã so sánh từ gen cho rhGM CSF sản xuất từ nấm men.Mã điện tử sau khi trình tự tối ưu hóa tối ưu hóa, rhGM-CSF hiển thị ở nấm men thường xuyên của mật mã dùng cho con trai không khác biệt gì.Tuy nhiên, trong siêu nhóm hóa khả năng đường thống nhất, rhGM CSF từ Saccharomyces cerevisiae BY4742 hiển thị những cứu Xích nấm men X33 bày tỏ sự khác biệt của quang phổ.Ở 3.5 lít Medium thêm các methanol hoặc galactose X33 hay nấm men lên men cerevisiaeby4742 Mỹ, riêng biệt, hơn 72 giờ rhGMCSF cứu độ cao cho thấy trong men đỏ tiết (285 và 64 mg Tổng tiết protein / L).SDS-PAGE phân tích cho thấy rhGM-CSF species of the purified phân tử lượng khoảng từ 30 đến hơn 60 kDa (phụ thuộc vào tình trạng đường cơ sở hóa) và sắc ký trao đổi ion có độ tinh khiết cao hơn và tỷ lệ tái chế, vai trò sắc ký.Có cùng sự tinh khiết, thanh lọc rhGM của CSFs P. pastoriswere cao 327 lần ở nấm men, kích thích tăng trưởng với hGM-CSF phụ thuộc vào khả năng các dòng tế bào TF-1.Đề nghị cho dữ liệu tích lũy men men đỏ methanol cứu thêm bằng chứng ngoại quốc khác hỗ trợ cho sản xuất một loại glycoprotein.