Materials and methodsBacterial isol

Materials and methods

Bacterial isolates

Four bacterial isolates, Bacillus subtilis and Bacil-
lus sp. (associates of established tea rhizosphere),

Pseudomonas corrugata 1 and P. corrugata 2 (asso-
ciates of young tea rhizosphere) were used as test

inoculants. The bacteria were selected on the basis of

strong antifungal activity against several fungi includ-
ing pathogens of tea (Pandey et al. 1997, Pandey &

Palni 1998, 1999).

Plant material

Developing seeds (5 months after anthesis) were col-
lected from local Chinery tea [Camellia sinensis (L.)

O. Kuntze] bushes growing at 1760 m above sea

level in District Almora, Central Himalaya. The im-
mature cotyledons were used for raising plantlets

through somatic embryogenesis on full strength mod-
ified MS (Murashige & Skoog 1962) medium con-
taining 10.0 μM 6-benzylaminopurine (BAP), 1.0 μM

indole 3-butyric acid (IBA), 0.5 μM gibberellic acid

(GA3) as reported by Bag et al. (1997).

The bioassay-inoculation of tissue culture raised tea

plants

Three separate inoculation experiments were carried

out with tissue culture raised tea plants during transfer

to soil in rainy, winter and summer seasons. Broth

cultures of bacterial isolates were raised in Tryp-
tone/yeast extract (TY). Approximately 175 g auto-
claved soil (pH 5.6) was filled in pots (7 cm dia, 8 cm

ht). The soil was inoculated by adding 1 ml of bacterial

broth containing 104 to 105cells ml−1. Tissue culture

raised tea plants were then transplanted (one per pot)

in control as well as inoculated pots. A total of five

treatments were considered: (1) control: plants trans-
ferred to soil containing TY broth, without bacteria,

(2) plants transferred to soil inoculated with Bacillus

subtilis, (3) plants transferred to soil inoculated with

Bacillus sp., (4) plants transferred to soil inoculated

with Pseudomonas corrugata 1, and (5) plants trans-
ferred to soil inoculated with P. corrugata 2. All the

pots were kept in a net house under natural condi-
tions; each pot was initially covered with a polybag to maintain humidity. Observations on survival, micro-
bial activity and growth performance of control and

inoculated plants were recorded one year after transfer

to soil.

Microbial analyses of rhizoplane and rhizosphere soil

from the bioassay experiment

Plants showing disease symptoms (wilting) or poor

vigour were carefully uprooted and isolations were

carried out from the rhizoplane and rhizosphere on

mycological agar. The isolated fungi were identified

upto species level. The fungal isolates were tested

against the test inoculants using spot inoculation tech-
nique on antifungal bioassay agar plates. The plates

were incubated at 25 ◦C and observed for inhibition

zones after 4 days.

Rhizosphere soil samples, 1 g from each pot (in

triplicate), collected from control as well as inoculated

treatments were analysed for bacterial and fungal pop-
ulations using serial dilution technique on nutrient and

mycological agar, respectively (Johnson & Curl 1972).

Inoculation of tea seeds

The test inoculants were also tested with local tea

seeds. Tea seeds collected during October–November

were transferred to a pit containing soil and sand (1:1,

w/w) in the month of January for cracking. Seeds

were found to crack in 2–3 months. Bacterial sus-
pension, 25 ml containing 105 to 106 cells ml−1,

mixed in approximate 50 g peat was used for coating

of cracked seeds. Fifty cracked seeds were taken for

each treatment. Seeds were thoroughly mixed in the

slurry (mixture of bacterial suspension in peat) and

sown in polybags (15 cm ht, 8 cm dia; 950 g soil;

one seed per bag). The data on survival and growth

of seedlings were recorded after six months of sowing

and statistically analysed (Snedecor & Cochran 1967).

Kết quả (Việt) 1:

Vật liệu và phương pháp

vi khuẩn cô lập

bốn chủng vi khuẩn, Bacillus subtilis và Bacil-
lus sp. (nhân viên thành lập trà rhizosphere),

Pseudomonas corrugata 1 và P. corrugata 2 (asso-
ciates của trẻ trà rhizosphere) được sử dụng như kiểm tra

inoculants. Các vi khuẩn đã được lựa chọn trên cơ sở của

bao gồm các hoạt động kháng nấm mạnh mẽ chống lại một số nấm-
tác nhân gây bệnh ing trà (Pandey et al. 1997, Pandey &

Palni 1998, 1999).

nhà máy vật liệu

đang phát triển hạt giống (5 tháng sau khi nở) là đại tá-
lected từ địa phương Chinery trà [Camellia sinensis (L.)

O. Kuntze] bụi cây trồng tại 1760 m trên biển

cấp trong quận Almora, Trung Himalaya. Im-
trưởng thành lá mầm đã được sử dụng cho nuôi plantlets

thông qua Soma embryogenesis ngày đầy đủ sức mạnh mod-
ified MS (Murashige & Skoog 1962) vừa côn-
taining 10,0 μM 6-benzylaminopurine (bắp), 1.0 μM

indol 3 butyric axit (IBA), cách 0.5 μM gibberellic acid

(GA3) theo báo cáo của túi et al. (1997).

tiêm phòng bioassay của văn hóa mô lớn lên trà

cây

ba riêng biệt tiêm phòng thí nghiệm đã được tiến hành

ra với mô nền văn hóa lớn lên cây chè trong khi chuyển

để đất trong mưa, mùa đông và mùa hè mùa. Canh

nền văn hóa của chủng vi khuẩn được nêu ra trong Tryp-
giai điệu/nấm men giải nén (TY). Khoảng 175 g auto-
claved đất (pH 5.6) đã được lấp đầy trong chậu (7 cm dia, 8 cm

ht). Đất được tiêm chủng bằng cách thêm 1 ml của vi khuẩn

canh có 104 để 105cells ml−1. Văn hóa mô

lớn lên trà cây đã sau đó cấy (một mỗi nồi)

trong kiểm soát cũng như tiêm chủng chậu. Tổng cộng năm

phương pháp điều trị được coi là: (1) kiểm soát: cây trans-
ferred để đất có TY canh, mà không có bacteria,

(2) cây chuyển sang đất tiêm chủng với trực khuẩn

subtilis, (3) nhà máy chuyển sang đất tiêm chủng với

Bacillus sp., (4) cây chuyển sang đất tiêm chủng

với Pseudomonas corrugata 1, và (5) cây trans-
Ferred để đất tiêm chủng với P. corrugata 2. Tất cả các

chậu được giữ trong một căn nhà net theo tự nhiên condi-
tions; mỗi nồi ban đầu được bảo hiểm với một polybag để duy trì độ ẩm. Các quan sát về sự sống còn, vi
bial hiệu suất hoạt động và tăng trưởng của kiểm soát và

tiêm chủng cây được ghi nhận một năm sau khi chuyển

để đất.

các phân tích vi khuẩn rhizoplane và rhizosphere đất

từ thử nghiệm bioassay

cây đang hiện triệu chứng bệnh (héo) hoặc nghèo

hưởng dân đã được cẩn thận uprooted và đã isolations

thực hiện từ rhizoplane và rhizosphere trên

mycological agar. Nấm bị cô lập đã được xác định

tối đa cấp loài. Các chủng nấm đã được thử nghiệm

chống lại inoculants thử nghiệm bằng cách sử dụng tại chỗ tiêm phòng công nghệ-
nique trên nấm bioassay agar tấm. Các mảng

được ủ tại 25 ◦C và quan sát cho sự ức chế

vùng sau 4 ngày.

Rhizosphere đất mẫu, 1 g từ nồi mỗi (ở

triplicate), được thu thập từ kiểm soát cũng như tiêm chủng

phương pháp điều trị đã được phân tích cho vi khuẩn và nấm pop-
ulations bằng cách sử dụng kỹ thuật nối tiếp pha loãng trên chất dinh dưỡng và

mycological agar, tương ứng (Johnson & Curl 1972).

tiêm phòng của trà hạt

Inoculants kiểm tra cũng đã được thử nghiệm với địa phương trà

hạt giống. Trà hạt được thu thập trong ngày-ngày

được chuyển sang một hố có đất và cát (1:1,

w/w) trong tháng của tháng Giêng cho nứt. Hạt giống

đã được tìm thấy để crack trong 2-3 tháng. Vi khuẩn sus-
pension, 25 ml có 105 to 106 tế bào ml−1,

pha trộn trong khoảng 50 g than bùn được sử dụng cho lớp phủ

nứt hạt giống. Năm mươi nứt hạt đã được đưa cho

mỗi lần chữa trị. Hạt giống đã được triệt để pha trộn trong các

bùn (hỗn hợp của vi khuẩn đình chỉ trong than bùn) và

gieo trong polybags (ht 15 cm, 8 cm dia; đất 950 g;

một hạt giống mỗi túi). Dữ liệu về sự sống còn và tăng trưởng

của cây giống đã được ghi lại sau sáu tháng gieo

và phân tích thống kê (Snedecor & Cochran 1967).

Kết quả (Việt) 2:

Vật liệu và phương pháp phân lập vi khuẩn Bốn mẫu vi khuẩn, vi khuẩn Bacillus subtilis và Bacil- lus sp. (Thành lập liên kết của vùng rễ trà), Pseudomonas corrugata 1 và P. corrugata 2 (ÆÂng ciates trà trẻ vùng rễ) được sử dụng như kiểm tra inoculants. Các vi khuẩn được lựa chọn trên cơ sở hoạt tính kháng nấm mạnh đối với một số loại nấm bao gåm ing tác nhân gây bệnh của trà (Pandey et al. 1997, Pandey & Palni 1998, 1999). nguyên liệu thực vật hạt giống phát triển (5 tháng sau khi nở) được đồng nghiệp từ thập chinery trà [Camellia sinensis địa phương (L.) O. Kuntze] bụi cây tăng trưởng ở mức 1.760 m trên mực nước biển cấp huyện Almora, Trung Himalaya. Các trọng lá mầm trưởng thành đã được sử dụng để nâng cao cây con qua phôi soma trên toàn bộ sức mạnh vào mô hình ified MS (Murashige & Skoog 1962) dựng trung TaiNing 10.0 mM 6-benzylaminopurine (BAP), 1.0 mM axit indole 3-butyric (IBA), 0.5 mM gibberellic acid (GA3) theo báo cáo của túi et al. (1997). Phương pháp xét nghiệm, tiêm phòng nuôi cấy mô nuôi trà nhà máy Ba thí nghiệm tiêm riêng biệt được thực hiện với cây chè nuôi cấy mô lớn lên trong lúc di chuyển vào đất trong mùa mưa, mùa đông và mùa hè mùa. Nước dùng văn hóa của vi khuẩn phân lập được nuôi trong Tryp- giai điệu / chiết nấm men (TY). Khoảng 175 g tự động tương claved đất (pH 5.6) đã được lấp đầy trong chậu (7 dia cm, 8 cm ht). Đất đã được tiêm phòng bằng cách thêm 1 ml dung dịch vi khuẩn nước dùng có chứa 104 ml 105cells-1. Nuôi cấy mô cây chè tăng sau đó được cấy ghép (mỗi nồi) trong việc kiểm soát cũng như chậu tiêm. Tổng cộng có năm phương pháp điều trị được xem là: (1) kiểm soát: cây bạch ferred vào đất có chứa TY nước dùng, không có vi khuẩn, (2) nhà máy chuyển sang đất tiêm vi khuẩn Bacillus subtilis, (3) các nhà máy chuyển sang đất tiêm vi khuẩn Bacillus sp. , (4) các nhà máy chuyển sang đất tiêm với Pseudomonas corrugata 1, và (5) cây bạch ferred vào đất tiêm P. corrugata 2. Tất cả các chậu được giữ trong nhà lưới trong điều kiện tự nhiên tions; mỗi nồi ban đầu được bao phủ bởi một bầu nhựa để duy trì độ ẩm. Những quan sát về sự tồn tại, vi hoạt động Bial và hiệu suất tăng trưởng của kiểm soát và cây được lây bệnh được ghi nhận một năm sau khi chuyển giao vào đất. vi sinh vật phân tích của rhizoplane và đất vùng rễ từ thí nghiệm xét nghiệm sinh học thực vật cho thấy triệu chứng bệnh (héo) hoặc kém sức sống đã bật gốc một cách cẩn thận và phân lập được thực hiện từ rhizoplane và rễ trên môi trường thạch nấm. Các loại nấm độc lập được xác định tối đa mức độ loài. Các chủng nấm đã được thử nghiệm chống lại inoculants thử nghiệm sử dụng tại chỗ tiêm nghệ nique trên đĩa thạch xét nghiệm sinh học kháng nấm. Các tấm được ủ ở 25 oC và quan sát để ức chế khu sau 4 ngày. mẫu đất vùng rễ, 1 g mỗi nồi (trong ba lần), được thu thập từ việc kiểm soát cũng như tiêm điều trị được phân tích cho pop- vi khuẩn và nấm ulations sử dụng nối tiếp kỹ thuật pha loãng chất dinh dưỡng và môi trường thạch nấm, tương ứng (Johnson & Curl 1972). tiêm phòng giống trà inoculants Các thử nghiệm đã được cũng đã thử nghiệm với trà địa phương hạt. Hạt chè được thu thập trong tháng mười tháng mười một đã được chuyển giao cho một hố chứa đất và cát (1: 1, w / w) trong tháng Giêng cho nứt. Hạt giống đã được tìm thấy để crack trong 2-3 tháng. Vững vi khuẩn lương hưu, 25 ml có chứa 105-106 ml tế bào-1, trộn lẫn trong xấp xỉ 50 g than bùn được sử dụng cho lớp phủ hạt nứt. Năm mươi hạt nứt đã được thực hiện cho mỗi lần điều trị. Hạt giống được trộn đều trong bùn (hỗn hợp của dịch khuẩn trong than bùn) và gieo trong túi bầu (đường kính 15 cm ht, 8 cm; đất 950 g, một hạt giống cho mỗi chiếc túi). Các số liệu về sự sống còn và phát triển của cây con đã được ghi lại sau sáu tháng gieo hạt và phân tích thống kê (Snedecor & Cochran 1967).