Effect of pHTen ml of 5.0% lactose

Effect of pH
Ten ml of 5.0% lactose in 50 mM phosphate buffer at various pH levels (6.0, 6.5, 7.0, 7.5 and 8.0)was added to 10 ml crude enzyme from L. pentosus var. plantarum BFP32 to obtain final enzyme
concentration of 5 U/ml. The reaction mixture was incubated by shaking in a water bath at 50°C for 48 hours. The enzyme was inactivated by heating at 95°C for 15 minutes and the sugar and GOS were analyzed by HPLC.
Enzyme kinetics on lactose
For lactose used as substrate, the reaction mixture consisted of 10 ml lactose at various concentrations (2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 12.5, 15.0, 17.5, and 20.0%) in 50 mM phosphate buffer (pH 7.0) were prepared. The final enzyme concentration at 5 U/ml was obtained.The reaction mixture was incubated by shaking in a water bath at 50°C for 48 hours, and the enzyme was inactivated by heating at 95°C for 15 minutes. The sugars and GOS were analyzed by HPLC.
Determination of sugar composition and degree of polymerization
Mono-, di- and oligosaccharide were analyzed by HPLC. A sample was filtered through a 0.2 µm membrane and 5 µl samples were injected into a Rezex RNM column (7.8×300 mm, 5 µm). The mobile phase was HPLC-grade water and the flow rate was 0.4 ml/min. A refractive index (RI) detector was used and the column temperature was controlled at 80ᴏC. Glucose and galactose was used as the monosaccharide standards and lactose was used as the disaccharide standard. The qualitative analysis of sugar in the sample was determined by comparison to the retention time of standard sugar. The concentration of sugar in the sample was calculated by comparing the peak areas of the standard curves of the respective sugars. Degree of polymerization (DP) of oligosaccharide was calculated regarding to their respective retention time. The molecular weight distribution of the mixed oligosaccharides after removal of the low molecular weight sugars by nanofiltration or bacterial and yeast fermentation was determined by comparing the sample retention time to those of the standard curve (Mountzouris et al., 1999). The oligosaccharides yield was calculated by the summary of the percentage area of the oligosaccharide fraction (Wichienchot et al., 2010).

Kết quả (Việt) 1:

Ảnh hưởng của pH10 ml 5,0% lactose trong 50 mM phosphat đệm ở các cấp độ pH (6.0, 6.5, 7,0, 7,5 và 8,0) đã được thêm vào 10 ml dầu thô enzyme từ L. pentosus var. plantarum BFP32 để có được loại enzyme cuối cùngnồng độ 5 U/ml. Hỗn hợp phản ứng đã được ủ bằng cách lắc trong một bồn tắm nước tại 50° C trong 48 giờ. Enzyme được gan bằng tại 95° C trong 15 phút và đường và GOS by HPLC phân tích.Enzyme kinetics trên đường sữa lactozaCho đường lactose được sử dụng như là chất nền, phản ứng hỗn hợp gồm 10 ml đường lactose ở nồng độ khác nhau (2,5, 5.0, 7,5, 10,0, 12,5, 15.0, 17,5 và 20.0%) trong 50 mM phosphat đệm (pH 7,0) đã được chuẩn bị. Nồng độ enzym cuối cùng lúc 5 U/ml được. Hỗn hợp phản ứng đã được ủ bằng cách lắc trong một bồn tắm nước tại 50° C trong 48 giờ, và enzym gan bằng tại 95° C trong 15 phút. Các loại đường và GOS by HPLC phân tích. Xác định thành phần đường và mức độ trùng hợp Mono-, di - và oligosacarit by HPLC phân tích. Một mẫu đã được lọc qua một màng cách 0.2 μm và 5 ml mẫu đã được tiêm vào cột Rezex RNM (7.8 × 300 mm, 5 μm). Giai đoạn di động là HPLC cấp nước và tốc độ dòng chảy là cách 0.4 ml/phút. Detector chỉ số khúc xạ (RI) được sử dụng và nhiệt độ cột được kiểm soát tại 80ᴏC. Glucose và galactose được sử dụng như là tiêu chuẩn monosacarit và lactose đã được sử dụng như disacarit tiêu chuẩn. Phân tích chất lượng đường trong các mẫu đã được xác định bằng cách so sánh thời gian lưu giữ của đường tiêu chuẩn. Nồng độ đường trong các mẫu đã được tính toán bằng cách so sánh các khu vực cao điểm của các đường cong chuẩn của các loại đường tương ứng. Mức độ trùng hợp (DP) của oligosacarit đã được tính toán liên quan đến thời gian lưu giữ tương ứng của họ. Phân phối trọng lượng phân tử oligosaccharide hỗn hợp sau khi loại bỏ trọng lượng phân tử thấp đường bởi nanofiltration hoặc lên men vi khuẩn và nấm men được xác định bằng cách so sánh thời gian lưu giữ mẫu để những người của các đường cong chuẩn (Mountzouris và ctv., 1999). Năng suất oligosaccharide đã được tính toán bởi phần tóm tắt của tỷ lệ phần trăm, tích phần oligosacarit (Wichienchot và ctv., 2010).

Kết quả (Việt) 2:

Ảnh hưởng của pH
Mười ml 5,0% lactose trong 50 mM đệm phosphate ở mức pH khác nhau (6.0, 6.5, 7.0, 7.5 và 8.0) đã được thêm vào 10 ml enzyme thô từ L. pentosus var. plantarum BFP32 để có được enzyme thức
nồng độ 5 U / ml. Hỗn hợp phản ứng được ủ bằng cách lắc trong một cốc nước ở 50 ° C trong 48 giờ. Các enzyme đã được bất hoạt bằng cách nung nóng ở 95 ° C trong 15 phút và đường và GOS được phân tích bằng HPLC.
Động học Enzyme trên lactose
Đối với lactose sử dụng như là chất nền, hỗn hợp phản ứng gồm 10 ml lactose ở các nồng độ khác nhau (2.5, 5.0, 7.5 , 10.0, 12.5, 15.0, 17.5, và 20.0%) trong 50 mM đệm phosphat (pH 7.0) đã được chuẩn bị. Nồng độ enzyme thức lúc 5 U / ml là hỗn hợp phản ứng obtained.The được ủ bằng cách lắc trong một cốc nước ở 50 ° C trong 48 giờ, và enzyme đã được bất hoạt bằng cách nung nóng ở 95 ° C trong 15 phút. Các loại đường và GOS được phân tích bằng HPLC.
Xác định thành phần đường và mức độ trùng hợp
Mono, di- và oligosaccharide được phân tích bằng HPLC. Một mẫu được lọc qua một màng 0,2 mm và 5 mẫu ml đã được tiêm vào một cột Rezex RNM (7,8 × 300 mm, 5 micron). Pha động là nước HPLC cấp và tốc độ dòng chảy là 0,4 ml / phút. Một máy dò chỉ số khúc xạ (RI) được sử dụng và nhiệt độ cột được kiểm soát ở 80ᴏC. Glucose và galactose được sử dụng làm tiêu chuẩn monosaccharide và lactose đã được sử dụng như là tiêu chuẩn disaccharide. Các phân tích định lượng đường trong mẫu được xác định bằng cách so sánh với thời gian lưu của đường chuẩn. Nồng độ đường trong mẫu đã được tính toán bằng cách so sánh các vùng đỉnh của đường cong chuẩn của các loại đường tương ứng. Mức độ trùng hợp (DP) của oligosaccharide đã được tính toán liên quan đến thời gian lưu tương ứng của họ. Sự phân bố trọng lượng phân tử của các oligosaccharides hỗn hợp sau khi loại bỏ các đường phân tử lượng thấp bằng cách lọc nano hoặc lên men vi khuẩn và nấm men đã được xác định bằng cách so sánh thời gian lưu mẫu để những đường cong chuẩn (Mountzouris et al., 1999). Năng suất oligosaccharides đã được tính toán bằng cách tóm tắt các tỷ lệ diện tích phần oligosaccharide (Wichienchot et al., 2010).