Add 1 ng in vitro transcribed RNA (

Add 1 ng in vitro transcribed RNA (human gene H2, GeneBank Accession #: AA418251) to the
RNA sample (500 ng – 1000 ng)
2. Add DEPC H2O to the RNA sample to 29.5 μl
3. Add 0.5 μl 1μg/ul random hexamer and 1 μg/ul poly dT respectively
4. Incubate the mixture at 65°C for 10 min and then put on ice immediately for 5 min. Let it stand
at room temperature for 10 min.
5. Add 18.5 μl pre-mixture, which contains 2.5 μl 10mM dNTP mix, 10 μl 5 x 1st strand buffer, 5
μl 0.1M DTT and 1 μl RNase OUT.
6. Mix and spin, stand at room temperature for 2 min.
7. Add 1 μl Superscript II RT and mix gently.
8. Spin down and let it stand at room temperature for 10 min.
9. Incubate at 42°C for 50 min, followed by heat inactivating at 70°C for 15 min.
10. Add 1 μl RNase H, mix gently and spin down.
11. Block at 37°C for 30 min.

Kết quả (Việt) 1:

Thêm 1 ng trong ống nghiệm phiên âm RNA (gen của con người H2, GeneBank nhập #: AA418251) để cácRNA mẫu (500 ng-1000 ng)2. Thêm DEPC H2O vào mẫu RNA để 29,5 μl3. Thêm cách 0.5 μl 1μg/ul ngẫu nhiên hexamer và 1 μg/ul poly dT tương ứng4. ấp cho nở vào hỗn hợp ở 65° C trong 10 phút và sau đó đưa vào nước đá ngay lập tức cho 5 phút. Để cho nó đứngở nhiệt độ phòng cho 10 phút.5. thêm 18,5 μl trước hỗn hợp, có chứa 2.5 μl 10 mM dNTP mix, 10 μl 5 x 1st strand đệm, 5ΜL 0.1M DTT và 1 μl RNase RA.6. trộn và quay, đứng ở nhiệt độ phòng cho 2 phút.7. thêm 1 μl Superscript II RT và trộn nhẹ nhàng.8. quay xuống và để cho nó đứng ở nhiệt độ phòng cho 10 phút.9. ấp cho nở tại 42° C cho phút 50, theo sau là nhiệt inactivating tại 70° C trong 15 phút.10. thêm 1 μl RNase H, trộn nhẹ nhàng và quay xuống.11. khối ở 37° C trong 30 phút.

Kết quả (Việt) 2:

Thêm 1 ng in vitro chép RNA (H2 gen của con người, ngân hàng gen nhập #: AA418251) để các
mẫu RNA (500 ng - 1000 ng)
2. Thêm DEPC H2O cho các mẫu RNA đến 29,5 ml
3. Thêm 0,5 ml 1μg / ul hexame ngẫu nhiên và 1 mg / ul nhiều dT tương ứng
4. Ủ hỗn hợp ở 65 ° C trong 10 phút và sau đó đặt trên băng ngay trong 5 phút. Hãy để nó đứng
ở nhiệt độ phòng trong 10 phút.
5. Thêm 18,5 ml trước hỗn hợp, trong đó có chứa 2,5 ml 10mM dNTP sẽ kết hợp, 10 ml 5 x 1 sợi đệm, 5
ml 0,1M DTT 1 ml RNase OUT.
6. Trộn và spin, đứng ở nhiệt độ phòng trong 2 phút.
7. Thêm 1 ml Nằm ở trên II RT và trộn nhẹ nhàng.
8. Quay xuống và để cho nó yên ở nhiệt độ phòng trong 10 phút.
9. Ủ ở 42 ° C trong 50 phút, sau đó nhiệt bất hoạt ở 70 ° C trong 15 phút.
10. Thêm 1 ml RNase H, trộn nhẹ nhàng và quay xuống.
11. Khối ở 37 ° C trong 30 phút.