- Văn bản
- Lịch sử
Journal of Agricultural Technology
Journal of Agricultural Technology 2012, Vol. 8(1): 233-240
In vitro evaluation of biological control agents against
Rhizoctonia solani
M. Seema
1
2
1
AND N.S. Devaki
2*
Department of Microbiology, JSS College, B.N.Road, Mysore, Karnataka, India
Department of Molecular Biology, Yuvaraja’s College, Universit y of Mysore, Mysore,
Karnataka, India
M. Seema
and N.S. Devaki
(2012) In vitro evaluation of biological control agents agains t
Rhizoctonia solani. Journal of Agricultural Technology 8(1): 233-240.
The efficacy of four fungal and one bacterial bioagents viz, Trichoderma viride, Trichoderma
harzianum, Aspergillus niger, Penicillium spp. and Bacillus subtilis were evaluated in vitro
condition against the tobacco sore shin pathogen, Rhizoctonia solani. In the dual culture assay,
the percentage inhibition of growth by T. viride, T. harzianum, , A. niger, B. subtilis and
Penicillium spp. on R. solani were 70%, 67%, 57%, 50% and 44% respectively. All the
antagonists suppressed the formation of sclerotia. The volatile metabolite studies revealed that
T. viride and T. harzianum showed 50% and 40% inhibition in mycelial growth respectively.
Microscopic observations of the dual cultures revealed the inhibitory effect was caused by the
hyphal interaction between the biocontrol agent and the pathogen causing lysis of pathogen
hyphae. This resulted in the reduction of the mycelial growth of the R. solani. The results
implied that the extent of inhibition by T. viride and T. harzianum provides the use of excellent
potential antagonists capable of controlling the pathogenicit y of R. solani on tobacco seedlings.
Key words: T. viride, T. harzianum, Rhizoctonia solani, bacterial bioagents
Introduction
Rhizoctonia solani Kuhn is the causal agent of sore shin disease, the most
important seedling disease of tobacco worldwide (Lucas, 1975). This disease
was recorded for the first time in Karnataka Light soil (KLS) nurseries during
the nursery survey conducted in 2005 (Anonymous, 2006). In KLS losses were
upto 10%. As a result the farmers suffer from transplant shortages for taking up
timely planting in the zone. The pathogen is known to be soil borne and
sclerotia are often found in the soil. Yet, limited information is available on its
sustainable management and is generally treated by chemical applications.
Overuse of the chemical may result in environmental, human health and pest
resistance problem. The increasing awareness of fungicide-related hazards has
*
Journal of Agricultural Technology 2012 Vol. 8(1): 233-240
Corresponding author: Devaki N.S.; devakins@yahoo.co.in
Available online http://www.ijat-aatsea.com
233
ISSN 1686-9141
emphasized the need for adopting biological methods as an alternative disease
control method, which is also ecofriendly (Khare et al., 2010). Biological
control appears to be the best solution for long term sustainability and effective
management of soil borne disease which can considerably minimize the disease
(Howell, 2003). Successful management of R. solani on various crops by
bioagents has been previously reported (Meena et al., 2003; Atef, 2008;
Hajieghrari et al., 2008). In view of the increasing importance of sore shin
disease and the growing environmental concerns, the present in vitro study was
carried out to control the R. solani on tobacco by T. viride, T. harzianum, , A.
niger, B. subtilis and Penicillium spp.
Material and methods
Isolation of the pathogen: Isolation was done using diseased root pieces
collected from different nurseries. Root pieces were washed under tap water for
about 5 minutes to remove soil particles. The root pieces were dipped in 70%
ethyl alcohol for 2 minutes and then transferred to sterile distilled water for 2-3
minutes twice. The treated root pieces were blot dried and then transferred to
petri plates containing sterilized potato dextrose agar (PDA) medium with five
pieces per plate. All plates were kept at 25 ± 2°C for 7 days and from these
plates pure cultures of R. solani isolates were maintained. For confirmation the
isolates were sent to IARI, New Delhi, India. The fungus was then sub cultured
whenever needed during the present study.
Isolation and Maintenance of Biocontrol agents : The fungal antagonists
T. viride and T. harzianum used in present investigation were obtained from
Division of Plant pathology, GKVK, Bengaluru and A. niger, B. subtilis and
Penicillium spp. were isolated from the native rhizosphere soils collected
around the healthy tobacco seedlings following the method of Lodha and
Webster (1990). Tobacco seedlings with roots and adhering soil were carefully
uprooted, placed in polythene bag, labeled and brought to the laboratory. Roots
were separated from the seedlings and air dried in shade. Rhizosphere soil was
collected from them by gentle scraping the roots with a fine scalpel. The
isolation was done by serial dilution method (Aneja, 2005). By this method
cultures of A. niger, B. subtilis and Penicillium spp. were recovered. The
cultures of T. harzianum, T. viride, A. niger and Penicillium spp. were
maintained on PDA and Bacillus subtilis on Nutrient Agar.
Dual culture method: In vitro antagonistic activity of T. viride, T.
harzianum, A. niger and Penicillium spp. against Rhizoctonia solani was
studied in dual culture technique by following the method by Kucuk and
Kivanc (2003). Petridishes (90 mm) containing 20 ml of sterile PDA were
inoculated with a 5mm diameter plug of 7- day- old pure culture of antagonistic
234
Journal of Agricultural Technology 2012, Vol. 8(1): 233-240
fungi and pathogens. One mycelial disc of each fungus was placed on opposite
poles of PDA plates and incubated at 25°C in incubator and radial growth of
pathogen was measured at 24 h intervals. In case of B. subtilis, parallel
streaking was done on one side of the agar plate and incubated at 37°C for 24 h.
After the incubation period a 5 mm diameter mycelia plug of actively growing
R. solani was placed on the opposite pole and incubated at 25°C for 7 days.
Control petri dishes were inoculated with pathogens and a sterile agar
plug. Three replications were maintained for each treatment. Percentage
inhibition of pathogen was calculated by the following formula (Fokkema,
1973). R1-R2/R1x100, where R2 denotes the radial growth of the pathogen
towards the opponent antagonist and R1 denotes the radial growth of the
pathogen towards opposite side. The experiment was repeated thrice.
Slide culture method: For each pathogen - Trichoderma interaction, a
clean slide was placed in 9 cm diameter plates and sterilized. Then a small
amount of autoclaved melted PDA was spread over the slide to make a thin
PDA film on the slide. The 5 mm diameter mycelia plug of one week old R.
solani culture is cut from the margin and T. harzianum and T. viride were
placed on opposite sides of the slides separately at 3 cm apart on PDA surface.
Then 1 ml of double distilled water was added to the plate to prevent drying and
then incubated at 25±1°C for 7 days. After incubation period the meeting area
of pathogen-Trichoderma hyphae was observed under a light microscope.
Effect of volatile substance produced by T. viride and T. harzianum on
growth of the pathogen: The method described by Dennis and Webster (1971)
was adopted. Petriplates containing 20 ml of PDA were inoculated separately
with 5 mm disc of antagonists and incubated for 5 hours. After this lid of each
plate was replaced by a bottom containing PDA previously inoculated with the
disc of the pathogen and sealed together with paraffin film. The control sets did
not contain the antagonist. The cultures were incubated at 25°C.The studies
were conducted in three replicates. Radial growth was measured at 24 hours
intervals and percent inhibition was determined using the formula:
Percent inhibition =
C2 − C1
C2
× 100
Where, C
means growth of R. solani in control and C1 means growth of R.
solani in treatment.
2
Results and discussion
Differential biocontrol ability among the antagonists was noticed against
R. solani (Fig.1). Results showed that among the 5 potential antagonists, T.
235
viride and T. harzianum proved to be the most potent bioagents against R.
solani. Growth inhibition in the pathogen differed significantly. 7 days of
incubation showed different degrees of mycelial growth inhibition of R. solani
(Fig.2). Initially very less sclerotia were observed near the intermingled contact
zone of R. solani and Trichoderma. However, after 4 days of incubation there
was suppression of growth and sclerotia formation on antagonized portion of
hyphae. T. harzianum and T. viride completely overgrew the pathogen with
percentage inhibition of 67 % and 70 % respectively. T. viride was most potent
in reducing growth of the pathogen than T. harzianum. Saikia et al., (1995) also
reported T. viride as more effective than T. harzianum in reducing mycelial
growth of R. solani causing Cauliflower stem rot. According to Papavizas and
Lumsden (1982); Devaki et al. (1992), the mechanisms involved in the control
of pathogens by Trichoderma spp. are probably due to antibiosis, lysis,
competition and mycoparasitism. The mode of mycoparasitism was observed to
be entirely different between T. viride and R. solani (Pandey et al., 2005). The
growth of T. viride hyphae was observed inside host mycelium. Due to this,
shrinkage and coagulation of cytoplasm of the pathogen was observed (Fig. 3).
T. harzianum hyphae coiled around the pathogen. Later on pegging
started and knob like haustoria formed inside the hyphae of R. solani. The
cytoplasmic contents may be taken through the haustoria and only cell wall was
clearly visible without cytoplasm. Baker and Cook (1979) have reported that
the enzymes may be produced that digest the mycelial walls and septal walls or
antibiotics may be formed tha
In vitro evaluation of biological control agents against
Rhizoctonia solani
M. Seema
1
2
1
AND N.S. Devaki
2*
Department of Microbiology, JSS College, B.N.Road, Mysore, Karnataka, India
Department of Molecular Biology, Yuvaraja’s College, Universit y of Mysore, Mysore,
Karnataka, India
M. Seema
and N.S. Devaki
(2012) In vitro evaluation of biological control agents agains t
Rhizoctonia solani. Journal of Agricultural Technology 8(1): 233-240.
The efficacy of four fungal and one bacterial bioagents viz, Trichoderma viride, Trichoderma
harzianum, Aspergillus niger, Penicillium spp. and Bacillus subtilis were evaluated in vitro
condition against the tobacco sore shin pathogen, Rhizoctonia solani. In the dual culture assay,
the percentage inhibition of growth by T. viride, T. harzianum, , A. niger, B. subtilis and
Penicillium spp. on R. solani were 70%, 67%, 57%, 50% and 44% respectively. All the
antagonists suppressed the formation of sclerotia. The volatile metabolite studies revealed that
T. viride and T. harzianum showed 50% and 40% inhibition in mycelial growth respectively.
Microscopic observations of the dual cultures revealed the inhibitory effect was caused by the
hyphal interaction between the biocontrol agent and the pathogen causing lysis of pathogen
hyphae. This resulted in the reduction of the mycelial growth of the R. solani. The results
implied that the extent of inhibition by T. viride and T. harzianum provides the use of excellent
potential antagonists capable of controlling the pathogenicit y of R. solani on tobacco seedlings.
Key words: T. viride, T. harzianum, Rhizoctonia solani, bacterial bioagents
Introduction
Rhizoctonia solani Kuhn is the causal agent of sore shin disease, the most
important seedling disease of tobacco worldwide (Lucas, 1975). This disease
was recorded for the first time in Karnataka Light soil (KLS) nurseries during
the nursery survey conducted in 2005 (Anonymous, 2006). In KLS losses were
upto 10%. As a result the farmers suffer from transplant shortages for taking up
timely planting in the zone. The pathogen is known to be soil borne and
sclerotia are often found in the soil. Yet, limited information is available on its
sustainable management and is generally treated by chemical applications.
Overuse of the chemical may result in environmental, human health and pest
resistance problem. The increasing awareness of fungicide-related hazards has
*
Journal of Agricultural Technology 2012 Vol. 8(1): 233-240
Corresponding author: Devaki N.S.; devakins@yahoo.co.in
Available online http://www.ijat-aatsea.com
233
ISSN 1686-9141
emphasized the need for adopting biological methods as an alternative disease
control method, which is also ecofriendly (Khare et al., 2010). Biological
control appears to be the best solution for long term sustainability and effective
management of soil borne disease which can considerably minimize the disease
(Howell, 2003). Successful management of R. solani on various crops by
bioagents has been previously reported (Meena et al., 2003; Atef, 2008;
Hajieghrari et al., 2008). In view of the increasing importance of sore shin
disease and the growing environmental concerns, the present in vitro study was
carried out to control the R. solani on tobacco by T. viride, T. harzianum, , A.
niger, B. subtilis and Penicillium spp.
Material and methods
Isolation of the pathogen: Isolation was done using diseased root pieces
collected from different nurseries. Root pieces were washed under tap water for
about 5 minutes to remove soil particles. The root pieces were dipped in 70%
ethyl alcohol for 2 minutes and then transferred to sterile distilled water for 2-3
minutes twice. The treated root pieces were blot dried and then transferred to
petri plates containing sterilized potato dextrose agar (PDA) medium with five
pieces per plate. All plates were kept at 25 ± 2°C for 7 days and from these
plates pure cultures of R. solani isolates were maintained. For confirmation the
isolates were sent to IARI, New Delhi, India. The fungus was then sub cultured
whenever needed during the present study.
Isolation and Maintenance of Biocontrol agents : The fungal antagonists
T. viride and T. harzianum used in present investigation were obtained from
Division of Plant pathology, GKVK, Bengaluru and A. niger, B. subtilis and
Penicillium spp. were isolated from the native rhizosphere soils collected
around the healthy tobacco seedlings following the method of Lodha and
Webster (1990). Tobacco seedlings with roots and adhering soil were carefully
uprooted, placed in polythene bag, labeled and brought to the laboratory. Roots
were separated from the seedlings and air dried in shade. Rhizosphere soil was
collected from them by gentle scraping the roots with a fine scalpel. The
isolation was done by serial dilution method (Aneja, 2005). By this method
cultures of A. niger, B. subtilis and Penicillium spp. were recovered. The
cultures of T. harzianum, T. viride, A. niger and Penicillium spp. were
maintained on PDA and Bacillus subtilis on Nutrient Agar.
Dual culture method: In vitro antagonistic activity of T. viride, T.
harzianum, A. niger and Penicillium spp. against Rhizoctonia solani was
studied in dual culture technique by following the method by Kucuk and
Kivanc (2003). Petridishes (90 mm) containing 20 ml of sterile PDA were
inoculated with a 5mm diameter plug of 7- day- old pure culture of antagonistic
234
Journal of Agricultural Technology 2012, Vol. 8(1): 233-240
fungi and pathogens. One mycelial disc of each fungus was placed on opposite
poles of PDA plates and incubated at 25°C in incubator and radial growth of
pathogen was measured at 24 h intervals. In case of B. subtilis, parallel
streaking was done on one side of the agar plate and incubated at 37°C for 24 h.
After the incubation period a 5 mm diameter mycelia plug of actively growing
R. solani was placed on the opposite pole and incubated at 25°C for 7 days.
Control petri dishes were inoculated with pathogens and a sterile agar
plug. Three replications were maintained for each treatment. Percentage
inhibition of pathogen was calculated by the following formula (Fokkema,
1973). R1-R2/R1x100, where R2 denotes the radial growth of the pathogen
towards the opponent antagonist and R1 denotes the radial growth of the
pathogen towards opposite side. The experiment was repeated thrice.
Slide culture method: For each pathogen - Trichoderma interaction, a
clean slide was placed in 9 cm diameter plates and sterilized. Then a small
amount of autoclaved melted PDA was spread over the slide to make a thin
PDA film on the slide. The 5 mm diameter mycelia plug of one week old R.
solani culture is cut from the margin and T. harzianum and T. viride were
placed on opposite sides of the slides separately at 3 cm apart on PDA surface.
Then 1 ml of double distilled water was added to the plate to prevent drying and
then incubated at 25±1°C for 7 days. After incubation period the meeting area
of pathogen-Trichoderma hyphae was observed under a light microscope.
Effect of volatile substance produced by T. viride and T. harzianum on
growth of the pathogen: The method described by Dennis and Webster (1971)
was adopted. Petriplates containing 20 ml of PDA were inoculated separately
with 5 mm disc of antagonists and incubated for 5 hours. After this lid of each
plate was replaced by a bottom containing PDA previously inoculated with the
disc of the pathogen and sealed together with paraffin film. The control sets did
not contain the antagonist. The cultures were incubated at 25°C.The studies
were conducted in three replicates. Radial growth was measured at 24 hours
intervals and percent inhibition was determined using the formula:
Percent inhibition =
C2 − C1
C2
× 100
Where, C
means growth of R. solani in control and C1 means growth of R.
solani in treatment.
2
Results and discussion
Differential biocontrol ability among the antagonists was noticed against
R. solani (Fig.1). Results showed that among the 5 potential antagonists, T.
235
viride and T. harzianum proved to be the most potent bioagents against R.
solani. Growth inhibition in the pathogen differed significantly. 7 days of
incubation showed different degrees of mycelial growth inhibition of R. solani
(Fig.2). Initially very less sclerotia were observed near the intermingled contact
zone of R. solani and Trichoderma. However, after 4 days of incubation there
was suppression of growth and sclerotia formation on antagonized portion of
hyphae. T. harzianum and T. viride completely overgrew the pathogen with
percentage inhibition of 67 % and 70 % respectively. T. viride was most potent
in reducing growth of the pathogen than T. harzianum. Saikia et al., (1995) also
reported T. viride as more effective than T. harzianum in reducing mycelial
growth of R. solani causing Cauliflower stem rot. According to Papavizas and
Lumsden (1982); Devaki et al. (1992), the mechanisms involved in the control
of pathogens by Trichoderma spp. are probably due to antibiosis, lysis,
competition and mycoparasitism. The mode of mycoparasitism was observed to
be entirely different between T. viride and R. solani (Pandey et al., 2005). The
growth of T. viride hyphae was observed inside host mycelium. Due to this,
shrinkage and coagulation of cytoplasm of the pathogen was observed (Fig. 3).
T. harzianum hyphae coiled around the pathogen. Later on pegging
started and knob like haustoria formed inside the hyphae of R. solani. The
cytoplasmic contents may be taken through the haustoria and only cell wall was
clearly visible without cytoplasm. Baker and Cook (1979) have reported that
the enzymes may be produced that digest the mycelial walls and septal walls or
antibiotics may be formed tha
0/5000
Tạp chí nông nghiệp công nghệ 2012, Vol. 8(1): 233-240
trong ống nghiệm đánh giá về kiểm soát sinh học đại lý chống lại
Rhizoctonia solani
M. Seema
1
2
1
và N.S. Devaki
2 *
vùng vi sinh vật học, trường đại học JSS, B.N.Road, Mysore, Karnataka, Ấn Độ
khoa sinh học phân tử, đại học của Yuvaraja, Universit y của Mysore, Mysore,
Karnataka, Ấn Độ
M. Seema
và N.S. Devaki
Đánh giá trong ống nghiệm (2012) của kiểm soát sinh học đại lý chống t
Rhizoctonia solani. Tạp chí nông nghiệp công nghệ 8(1): 233-240.
Hiệu quả của bốn nấm và một vi khuẩn bioagents viz, Trichoderma viride, Trichoderma
harzianum, Aspergillus niger, Penicillium spp. và Bacillus subtilis được đánh giá trong ống nghiệm
điều kiện chống lại các mầm bệnh đau shin thuốc lá, Rhizoctonia solani. Trong khảo nghiệm văn hóa kép,
ức chế tỷ lệ phần trăm tăng trưởng của T. viride, T. harzianum, A. niger, B. subtilis và
Penicillium spp. trên R. solani là 70%, 67%, 57%, 50% và 44% tương ứng. Tất cả các
đối kháng đàn áp sự hình thành của sclerotia. Các nghiên cứu dễ bay hơi chất chuyển hóa tiết lộ rằng
T. viride và T. harzianum cho thấy 50% và 40% sự ức chế trong sự phát triển mycelial tương ứng.
Vi quan sát của các nền văn hóa kép cho thấy tác dụng ức chế được gây ra bởi các
che tương tác giữa các đại lý biocontrol và các mầm bệnh gây ra lysis của mầm bệnh
hyphae. Điều này dẫn đến việc giảm sự tăng trưởng mycelial của R. solani. Kết quả
ngụ ý rằng mức độ ức chế bởi T. viride và T. harzianum cung cấp việc sử dụng tuyệt vời
tiềm năng đối kháng có khả năng kiểm soát y pathogenicit của R. solani vào thuốc lá cây giống.
Từ khóa: T. viride, T. harzianum, Rhizoctonia solani, vi khuẩn bioagents
giới thiệu
Rhizoctonia solani Kuhn là các đại lý nguyên nhân của bệnh đau shin, nhất
cây giống quan trọng bệnh của thuốc lá trên toàn thế giới (Lucas, 1975). Bệnh này
được thu âm lần đầu tiên trong đất (KLS) Karnataka ánh sáng cho trẻ em trong
khảo sát vườn ươm thực hiện năm 2005 (chưa xác định người, 2006). Ở KLS thiệt hại là
tối đa 10%. Kết quả là người nông dân bị ghép thiếu cho chiếm
kịp thời trồng trong khu vực. Các mầm bệnh được biết đến là đất mọc và
sclerotia thường được tìm thấy trong đất. Tuy vậy, thông tin hạn chế có sẵn trên của nó
quản lý bền vững và thường được điều trị bằng hóa học ứng dụng.
Lạm dụng hóa chất có thể dẫn đến sức khỏe môi trường, con người và dịch hại
vấn đề kháng. Nhận thức ngày càng tăng về mối nguy hiểm liên quan đến loại thuốc diệt nấm có
*
tạp chí của nông nghiệp công nghệ 2012 Vol. 8(1): 233-240
Corresponding tác giả: Devaki N.S.; devakins@Yahoo.co.in
có sẵn trực tuyến http://www.ijat-aatsea.com
233
ISSN 1686-9141
nhấn mạnh sự cần thiết cho việc áp dụng phương pháp sinh học như là một bệnh khác
kiểm soát phương pháp, cũng là ecofriendly (Khare và ctv., 2010). Sinh học
kiểm soát dường như là giải pháp tốt nhất cho dài hạn tính bền vững và hiệu quả
quản lý đất borne bệnh mà có thể đáng kể giảm thiểu bệnh
(Howell, 2003). Các quản lý thành công của R. solani trên các cây trồng khác nhau bởi
bioagents đã là báo cáo trước đó (Meena et al., 2003; Atef, 2008;
Hajieghrari et al., 2008). Theo quan điểm của tầm quan trọng ngày càng tăng của đau shin
bệnh và các vấn đề môi trường ngày càng tăng, nghiên cứu trong ống nghiệm hiện nay là
thực hiện để kiểm soát solani R. vào thuốc lá bởi T. viride, T. harzianum, A.
niger, B. subtilis và Penicillium spp.
Vật liệu và phương pháp
sự cô lập của các mầm bệnh: cô lập đã được thực hiện bằng cách sử dụng bệnh gốc miếng
thu thập từ khác nhau cho trẻ em. Gốc phần được rửa dưới vòi nước cho
khoảng 5 phút để loại bỏ các đất hạt. Phần gốc được nhúng trong 70%
ethyl rượu cho 2 phút và sau đó chuyển đến vô trùng nước cất cho 2-3
phút hai lần. Các mảnh được điều trị gốc là blot khô và sau đó chuyển đến
petri tấm chứa tiệt trùng khoai tây dextrose agar (PDA) vừa với năm
miếng cho một mảng. Tất cả các tấm được giữ tại 25 ± 2° C cho 7 ngày và từ những
tấm nền văn hóa tinh khiết của R. solani chủng được duy trì. Để xác nhận các
chủng trang bị cho IARI, New Delhi, Ấn Độ. Các loại nấm sau đó là con nuôi cấy
bất cứ khi nào cần thiết trong việc nghiên cứu hiện nay.
Cô lập và bảo trì của Biocontrol đại lý: đối kháng nấm
T. viride và T. harzianum được sử dụng trong điều tra hiện nay đã thu được từ
bệnh lý bộ phận thực vật, GKVK, Bengaluru và A. niger, B. subtilis và
Penicillium spp. bị cô lập từ bản xứ rhizosphere đất thu thập
Quanh cây thuốc lá lành mạnh theo phương pháp của Lodha và
Webster (1990). Thuốc lá cây với rễ và tôn trọng đất đã cẩn thận
uprooted, được đặt trong túi polythene, có nhãn và mang đến cho phòng thí nghiệm. Rễ
đã được tách ra từ cây giống và máy sấy khô trong bóng râm. Rhizosphere đất là
thu thập từ chúng bằng cách nhẹ nhàng cào rễ với một dao tốt. Các
cô lập đã được thực hiện bằng phương pháp pha loãng nối tiếp (Aneja, 2005). Bằng phương pháp này
Nền văn hóa của A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. đã được phục hồi. Các
nền văn hóa của T. harzianum, T. viride, A. niger và Penicillium spp.
duy trì trên PDA và Bacillus subtilis trên chất dinh dưỡng Agar.
Dual văn hóa phương pháp: trong ống nghiệm đối nghịch hoạt động của T. viride, T.
harzianum, A. niger và Penicillium spp. chống lại Rhizoctonia solani
nghiên cứu trong kép văn hóa kỹ thuật bằng cách làm theo phương pháp bởi Kucuk và
Kivanc (2003). Petridishes (90 mm) có chứa 20 ml vô trùng PDA
tiêm chủng với một plug đường kính 5mm của nền văn hóa tinh khiết 7 ngày tuổi của đối nghịch
234
tạp chí của nông nghiệp công nghệ 2012, Vol. 8(1): 233-240
nấm và tác nhân gây bệnh. Một đĩa mycelial mỗi nấm được đặt trên đối diện
cực của PDA tấm và ủ ở 25° C trong vườn ươm và bố trí hình tròn sự phát triển của
mầm bệnh đã được đo tại khoảng thời gian 24 h. Trong trường hợp sinh subtilis, song song
streaking được thực hiện ở một bên của tấm thạch và ủ tại 37 ° C cho 24 h.
sau thời gian ủ bệnh một 5 mm đường kính mycelia cắm của tích cực phát triển
R. solani đã được đặt trên cực đối diện và ủ ở 25° C cho 7 ngày.
Kiểm soát petri món ăn đã được tiêm chủng với tác nhân gây bệnh và một agar vô trùng
cắm. Ba replications được duy trì cho mỗi lần chữa trị. Tỷ lệ phần trăm
sự ức chế của mầm bệnh đã được tính toán theo công thức (Fokkema,
1973). R1-R2/R1x100, nơi R2 biểu thị sự phát triển xuyên tâm của các mầm bệnh
Đối với các nhân vật đối kháng đối thủ và R1 biểu thị sự phát triển xuyên tâm của các
mầm bệnh về phía bên kia. Các thử nghiệm được lặp đi lặp lại ba lần.
Trượt văn hóa phương pháp: cho mỗi mầm bệnh - Trichoderma tương tác, một
sạch trượt đã được đặt trong 9 cm đường kính tấm và khử trùng. Sau đó một nhỏ
số autoclaved tan chảy PDA được lan truyền trên nắp trượt để thực hiện một mỏng
PDA phim trên nắp trượt. Mycelia đường kính 5 mm cắm của một tuần tuổi R.
solani văn hóa được cắt từ rìa và T. harzianum và T. viride
đặt trên các cạnh đối diện của các trang trình bày một cách riêng biệt ở 3 cm ngoài trên PDA bề mặt.
Sau đó 1 ml nước cất đôi đã được thêm vào các tấm để tránh làm khô và
sau đó ủ ở 25±1 ° C cho 7 ngày. Sau khi thời kỳ ủ bệnh khu vực họp
của hyphae Trichoderma mầm bệnh đã được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng.
Tác dụng của dễ bay hơi chất được sản xuất bởi T. viride và T. harzianum trên
sự phát triển của các mầm bệnh: phương pháp mô tả bởi Dennis và Webster (1971)
đã được thông qua. Petriplates có 20 ml PDA đã được tiêm chủng riêng biệt
với 5 mm đĩa của nhân vật và ủ trong 5 giờ. Sau đợt này nắp của mỗi
Tấm đã được thay thế bởi một đáy có PDA tiêm chủng trước đó với các
đĩa của các mầm bệnh và niêm phong cùng với parafin phim. Bộ điều khiển đã
chứa nhân vật đối kháng. Các nền văn hóa đã được ủ ở 25° C.Các nghiên cứu
đã được tiến hành trong ba sao chép. Tốc độ tăng trưởng xuyên tâm được đo tại 24 giờ
ức chế khoảng thời gian và phần trăm đã được xác định bằng cách sử dụng công thức:
Phần trăm ức chế =
C2 − C1
C2
× 100
nơi, C
có nghĩa là sự phát triển của R. solani trong kiểm soát và C1 có nghĩa là sự phát triển của R.
solani trong điều trị.
2
kết quả và thảo luận
vi sai biocontrol khả năng trong số các nhân vật được nhận thấy chống lại
R. solani (Fig.1). Kết quả cho thấy rằng trong số các nhân vật tiềm năng 5, T.
235
viride và T. harzianum đã chứng tỏ là mạnh nhất bioagents chống lại R.
solani. Ức chế sự tăng trưởng trong các mầm bệnh khác biệt đáng kể. 7 ngày kể từ
ấp trứng cho thấy mức độ khác nhau của mycelial tăng trưởng ức chế của R. solani
(Fig.2). Sclerotia ban đầu rất ít được quan sát thấy gần soá lieân laïc intermingled
khu R. solani và Trichoderma. Tuy nhiên, sau 4 ngày ấp có
là ức chế sự tăng trưởng và sclerotia hình thành phần antagonized của
hyphae. T. harzianum và T. viride hoàn toàn overgrew các mầm bệnh với
tỷ lệ phần trăm sự ức chế của 67% và 70% tương ứng. T. viride là mạnh nhất
trong việc giảm sự tăng trưởng của các mầm bệnh hơn T. harzianum. Saikia et al., (1995) cũng
báo cáo T. viride như là hiệu quả hơn T. harzianum trong việc giảm mycelial
sự phát triển của R. solani gây ra súp lơ gốc thối. Theo Papavizas và
Lumsden (1982); Devaki et al. (1992), các cơ chế liên quan đến việc kiểm soát
của tác nhân gây bệnh bởi Trichoderma spp. có lẽ do antibiosis, lysis,
cạnh tranh và mycoparasitism. Các chế độ của mycoparasitism được quan sát thấy
hoàn toàn khác nhau giữa T. viride và R. solani (Pandey và ctv., 2005). Các
sự phát triển của T. viride hyphae được quan sát thấy trong khuẩn ty thể máy chủ lưu trữ. Do đó,
co rút và đông máu của tế bào chất của các mầm bệnh đã được quan sát (hình 3).
T. harzianum hyphae cuộn xung quanh các mầm bệnh. Sau này pegging
bắt đầu và nhô lên giống như haustoria được hình thành bên trong hyphae của R. solani. Các
tế bào chất nội dung có thể được thực hiện thông qua các haustoria và chỉ tế bào là
rõ ràng mà không có tế bào chất. Baker và Cook (1979) đã thông báo rằng
các enzym có thể được sản xuất mà tiêu hóa mycelial bức tường và vách ngăn bức tường hoặc
thuốc kháng sinh có thể được hình thành tha
trong ống nghiệm đánh giá về kiểm soát sinh học đại lý chống lại
Rhizoctonia solani
M. Seema
1
2
1
và N.S. Devaki
2 *
vùng vi sinh vật học, trường đại học JSS, B.N.Road, Mysore, Karnataka, Ấn Độ
khoa sinh học phân tử, đại học của Yuvaraja, Universit y của Mysore, Mysore,
Karnataka, Ấn Độ
M. Seema
và N.S. Devaki
Đánh giá trong ống nghiệm (2012) của kiểm soát sinh học đại lý chống t
Rhizoctonia solani. Tạp chí nông nghiệp công nghệ 8(1): 233-240.
Hiệu quả của bốn nấm và một vi khuẩn bioagents viz, Trichoderma viride, Trichoderma
harzianum, Aspergillus niger, Penicillium spp. và Bacillus subtilis được đánh giá trong ống nghiệm
điều kiện chống lại các mầm bệnh đau shin thuốc lá, Rhizoctonia solani. Trong khảo nghiệm văn hóa kép,
ức chế tỷ lệ phần trăm tăng trưởng của T. viride, T. harzianum, A. niger, B. subtilis và
Penicillium spp. trên R. solani là 70%, 67%, 57%, 50% và 44% tương ứng. Tất cả các
đối kháng đàn áp sự hình thành của sclerotia. Các nghiên cứu dễ bay hơi chất chuyển hóa tiết lộ rằng
T. viride và T. harzianum cho thấy 50% và 40% sự ức chế trong sự phát triển mycelial tương ứng.
Vi quan sát của các nền văn hóa kép cho thấy tác dụng ức chế được gây ra bởi các
che tương tác giữa các đại lý biocontrol và các mầm bệnh gây ra lysis của mầm bệnh
hyphae. Điều này dẫn đến việc giảm sự tăng trưởng mycelial của R. solani. Kết quả
ngụ ý rằng mức độ ức chế bởi T. viride và T. harzianum cung cấp việc sử dụng tuyệt vời
tiềm năng đối kháng có khả năng kiểm soát y pathogenicit của R. solani vào thuốc lá cây giống.
Từ khóa: T. viride, T. harzianum, Rhizoctonia solani, vi khuẩn bioagents
giới thiệu
Rhizoctonia solani Kuhn là các đại lý nguyên nhân của bệnh đau shin, nhất
cây giống quan trọng bệnh của thuốc lá trên toàn thế giới (Lucas, 1975). Bệnh này
được thu âm lần đầu tiên trong đất (KLS) Karnataka ánh sáng cho trẻ em trong
khảo sát vườn ươm thực hiện năm 2005 (chưa xác định người, 2006). Ở KLS thiệt hại là
tối đa 10%. Kết quả là người nông dân bị ghép thiếu cho chiếm
kịp thời trồng trong khu vực. Các mầm bệnh được biết đến là đất mọc và
sclerotia thường được tìm thấy trong đất. Tuy vậy, thông tin hạn chế có sẵn trên của nó
quản lý bền vững và thường được điều trị bằng hóa học ứng dụng.
Lạm dụng hóa chất có thể dẫn đến sức khỏe môi trường, con người và dịch hại
vấn đề kháng. Nhận thức ngày càng tăng về mối nguy hiểm liên quan đến loại thuốc diệt nấm có
*
tạp chí của nông nghiệp công nghệ 2012 Vol. 8(1): 233-240
Corresponding tác giả: Devaki N.S.; devakins@Yahoo.co.in
có sẵn trực tuyến http://www.ijat-aatsea.com
233
ISSN 1686-9141
nhấn mạnh sự cần thiết cho việc áp dụng phương pháp sinh học như là một bệnh khác
kiểm soát phương pháp, cũng là ecofriendly (Khare và ctv., 2010). Sinh học
kiểm soát dường như là giải pháp tốt nhất cho dài hạn tính bền vững và hiệu quả
quản lý đất borne bệnh mà có thể đáng kể giảm thiểu bệnh
(Howell, 2003). Các quản lý thành công của R. solani trên các cây trồng khác nhau bởi
bioagents đã là báo cáo trước đó (Meena et al., 2003; Atef, 2008;
Hajieghrari et al., 2008). Theo quan điểm của tầm quan trọng ngày càng tăng của đau shin
bệnh và các vấn đề môi trường ngày càng tăng, nghiên cứu trong ống nghiệm hiện nay là
thực hiện để kiểm soát solani R. vào thuốc lá bởi T. viride, T. harzianum, A.
niger, B. subtilis và Penicillium spp.
Vật liệu và phương pháp
sự cô lập của các mầm bệnh: cô lập đã được thực hiện bằng cách sử dụng bệnh gốc miếng
thu thập từ khác nhau cho trẻ em. Gốc phần được rửa dưới vòi nước cho
khoảng 5 phút để loại bỏ các đất hạt. Phần gốc được nhúng trong 70%
ethyl rượu cho 2 phút và sau đó chuyển đến vô trùng nước cất cho 2-3
phút hai lần. Các mảnh được điều trị gốc là blot khô và sau đó chuyển đến
petri tấm chứa tiệt trùng khoai tây dextrose agar (PDA) vừa với năm
miếng cho một mảng. Tất cả các tấm được giữ tại 25 ± 2° C cho 7 ngày và từ những
tấm nền văn hóa tinh khiết của R. solani chủng được duy trì. Để xác nhận các
chủng trang bị cho IARI, New Delhi, Ấn Độ. Các loại nấm sau đó là con nuôi cấy
bất cứ khi nào cần thiết trong việc nghiên cứu hiện nay.
Cô lập và bảo trì của Biocontrol đại lý: đối kháng nấm
T. viride và T. harzianum được sử dụng trong điều tra hiện nay đã thu được từ
bệnh lý bộ phận thực vật, GKVK, Bengaluru và A. niger, B. subtilis và
Penicillium spp. bị cô lập từ bản xứ rhizosphere đất thu thập
Quanh cây thuốc lá lành mạnh theo phương pháp của Lodha và
Webster (1990). Thuốc lá cây với rễ và tôn trọng đất đã cẩn thận
uprooted, được đặt trong túi polythene, có nhãn và mang đến cho phòng thí nghiệm. Rễ
đã được tách ra từ cây giống và máy sấy khô trong bóng râm. Rhizosphere đất là
thu thập từ chúng bằng cách nhẹ nhàng cào rễ với một dao tốt. Các
cô lập đã được thực hiện bằng phương pháp pha loãng nối tiếp (Aneja, 2005). Bằng phương pháp này
Nền văn hóa của A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. đã được phục hồi. Các
nền văn hóa của T. harzianum, T. viride, A. niger và Penicillium spp.
duy trì trên PDA và Bacillus subtilis trên chất dinh dưỡng Agar.
Dual văn hóa phương pháp: trong ống nghiệm đối nghịch hoạt động của T. viride, T.
harzianum, A. niger và Penicillium spp. chống lại Rhizoctonia solani
nghiên cứu trong kép văn hóa kỹ thuật bằng cách làm theo phương pháp bởi Kucuk và
Kivanc (2003). Petridishes (90 mm) có chứa 20 ml vô trùng PDA
tiêm chủng với một plug đường kính 5mm của nền văn hóa tinh khiết 7 ngày tuổi của đối nghịch
234
tạp chí của nông nghiệp công nghệ 2012, Vol. 8(1): 233-240
nấm và tác nhân gây bệnh. Một đĩa mycelial mỗi nấm được đặt trên đối diện
cực của PDA tấm và ủ ở 25° C trong vườn ươm và bố trí hình tròn sự phát triển của
mầm bệnh đã được đo tại khoảng thời gian 24 h. Trong trường hợp sinh subtilis, song song
streaking được thực hiện ở một bên của tấm thạch và ủ tại 37 ° C cho 24 h.
sau thời gian ủ bệnh một 5 mm đường kính mycelia cắm của tích cực phát triển
R. solani đã được đặt trên cực đối diện và ủ ở 25° C cho 7 ngày.
Kiểm soát petri món ăn đã được tiêm chủng với tác nhân gây bệnh và một agar vô trùng
cắm. Ba replications được duy trì cho mỗi lần chữa trị. Tỷ lệ phần trăm
sự ức chế của mầm bệnh đã được tính toán theo công thức (Fokkema,
1973). R1-R2/R1x100, nơi R2 biểu thị sự phát triển xuyên tâm của các mầm bệnh
Đối với các nhân vật đối kháng đối thủ và R1 biểu thị sự phát triển xuyên tâm của các
mầm bệnh về phía bên kia. Các thử nghiệm được lặp đi lặp lại ba lần.
Trượt văn hóa phương pháp: cho mỗi mầm bệnh - Trichoderma tương tác, một
sạch trượt đã được đặt trong 9 cm đường kính tấm và khử trùng. Sau đó một nhỏ
số autoclaved tan chảy PDA được lan truyền trên nắp trượt để thực hiện một mỏng
PDA phim trên nắp trượt. Mycelia đường kính 5 mm cắm của một tuần tuổi R.
solani văn hóa được cắt từ rìa và T. harzianum và T. viride
đặt trên các cạnh đối diện của các trang trình bày một cách riêng biệt ở 3 cm ngoài trên PDA bề mặt.
Sau đó 1 ml nước cất đôi đã được thêm vào các tấm để tránh làm khô và
sau đó ủ ở 25±1 ° C cho 7 ngày. Sau khi thời kỳ ủ bệnh khu vực họp
của hyphae Trichoderma mầm bệnh đã được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng.
Tác dụng của dễ bay hơi chất được sản xuất bởi T. viride và T. harzianum trên
sự phát triển của các mầm bệnh: phương pháp mô tả bởi Dennis và Webster (1971)
đã được thông qua. Petriplates có 20 ml PDA đã được tiêm chủng riêng biệt
với 5 mm đĩa của nhân vật và ủ trong 5 giờ. Sau đợt này nắp của mỗi
Tấm đã được thay thế bởi một đáy có PDA tiêm chủng trước đó với các
đĩa của các mầm bệnh và niêm phong cùng với parafin phim. Bộ điều khiển đã
chứa nhân vật đối kháng. Các nền văn hóa đã được ủ ở 25° C.Các nghiên cứu
đã được tiến hành trong ba sao chép. Tốc độ tăng trưởng xuyên tâm được đo tại 24 giờ
ức chế khoảng thời gian và phần trăm đã được xác định bằng cách sử dụng công thức:
Phần trăm ức chế =
C2 − C1
C2
× 100
nơi, C
có nghĩa là sự phát triển của R. solani trong kiểm soát và C1 có nghĩa là sự phát triển của R.
solani trong điều trị.
2
kết quả và thảo luận
vi sai biocontrol khả năng trong số các nhân vật được nhận thấy chống lại
R. solani (Fig.1). Kết quả cho thấy rằng trong số các nhân vật tiềm năng 5, T.
235
viride và T. harzianum đã chứng tỏ là mạnh nhất bioagents chống lại R.
solani. Ức chế sự tăng trưởng trong các mầm bệnh khác biệt đáng kể. 7 ngày kể từ
ấp trứng cho thấy mức độ khác nhau của mycelial tăng trưởng ức chế của R. solani
(Fig.2). Sclerotia ban đầu rất ít được quan sát thấy gần soá lieân laïc intermingled
khu R. solani và Trichoderma. Tuy nhiên, sau 4 ngày ấp có
là ức chế sự tăng trưởng và sclerotia hình thành phần antagonized của
hyphae. T. harzianum và T. viride hoàn toàn overgrew các mầm bệnh với
tỷ lệ phần trăm sự ức chế của 67% và 70% tương ứng. T. viride là mạnh nhất
trong việc giảm sự tăng trưởng của các mầm bệnh hơn T. harzianum. Saikia et al., (1995) cũng
báo cáo T. viride như là hiệu quả hơn T. harzianum trong việc giảm mycelial
sự phát triển của R. solani gây ra súp lơ gốc thối. Theo Papavizas và
Lumsden (1982); Devaki et al. (1992), các cơ chế liên quan đến việc kiểm soát
của tác nhân gây bệnh bởi Trichoderma spp. có lẽ do antibiosis, lysis,
cạnh tranh và mycoparasitism. Các chế độ của mycoparasitism được quan sát thấy
hoàn toàn khác nhau giữa T. viride và R. solani (Pandey và ctv., 2005). Các
sự phát triển của T. viride hyphae được quan sát thấy trong khuẩn ty thể máy chủ lưu trữ. Do đó,
co rút và đông máu của tế bào chất của các mầm bệnh đã được quan sát (hình 3).
T. harzianum hyphae cuộn xung quanh các mầm bệnh. Sau này pegging
bắt đầu và nhô lên giống như haustoria được hình thành bên trong hyphae của R. solani. Các
tế bào chất nội dung có thể được thực hiện thông qua các haustoria và chỉ tế bào là
rõ ràng mà không có tế bào chất. Baker và Cook (1979) đã thông báo rằng
các enzym có thể được sản xuất mà tiêu hóa mycelial bức tường và vách ngăn bức tường hoặc
thuốc kháng sinh có thể được hình thành tha
đang được dịch, vui lòng đợi..
Tạp chí công nghệ nông nghiệp năm 2012, Vol. 8 (1): 233-240
trong ống nghiệm đánh giá các đại lý kiểm soát sinh học đối với
Rhizoctonia solani M. Seema 1 2 1 VÀ NS Devaki 2 * Sở Vi sinh vật, JSS College, BNRoad, Mysore, Karnataka, Ấn Độ Khoa Sinh học phân tử, Đại học Yuvaraja của, Universit y của Mysore, Mysore, Karnataka, Ấn Độ M. Seema và NS Devaki (2012) trong ống nghiệm đánh giá của các đại lý kiểm soát sinh học agains t Rhizoctonia solani. Tạp chí công nghệ nông nghiệp 8 (1):. 233-240 Hiệu quả của bốn nấm và vi khuẩn một bioagents tức, Trichoderma viride, Trichoderma harzianum, Aspergillus niger, Penicillium spp. và Bacillus subtilis đã được đánh giá trong ống nghiệm điều kiện đối với thuốc lá mầm bệnh đau cẳng chân, Rhizoctonia solani. Trong khảo nghiệm văn hóa kép, sự ức chế tỷ lệ tăng trưởng của T. viride, T. harzianum,, A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. trên R. solani là 70%, 67%, 57%, 50% và 44% tương ứng. Tất cả các thuốc đối kháng bị đàn áp sự hình thành của hạch nấm. Các nghiên cứu cho thấy chất chuyển hóa dễ bay hơi T. viride và T. harzianum cho thấy 50% và 40% ức chế sự tăng trưởng của sợi nấm tương ứng. quan sát dưới kính hiển vi của các nền văn hóa kép cho thấy tác dụng ức chế được gây ra bởi sự tương tác giữa các sợi nấm các đại lý kiểm soát sinh học và các tác nhân gây ly giải của tác nhân gây bệnh sợi nấm. Điều này dẫn đến việc giảm tốc độ tăng trưởng của sợi nấm R. solani. Kết quả ngụ ý rằng mức độ ức chế của T. viride và T. harzianum cung cấp việc sử dụng tuyệt vời đối kháng tiềm năng có khả năng kiểm soát y pathogenicit của R. solani trên cây thuốc lá. Từ khóa: T. viride, T. harzianum, Rhizoctonia solani , bioagents vi khuẩn Giới thiệu Rhizoctonia solani Kuhn là tác nhân gây bệnh ống chân đau, nhất bệnh giống quan trọng của thuốc lá trên toàn thế giới (Lucas, 1975). Căn bệnh này được ghi nhận lần đầu tiên trong đất Karnataka Light (KLS) vườn ươm trong vườn ươm tiến hành cuộc khảo sát năm 2005 (Anonymous, 2006). Trong KLS thiệt hại ước tính lên đến 10%. Kết quả là người nông dân bị thiếu cấy ghép để chiếm trồng kịp thời trong khu vực. Các tác nhân gây bệnh được biết đến là đất phát sinh và hạch nấm thường được tìm thấy trong đất. Tuy nhiên, thông tin hạn chế có sẵn của nó quản lý bền vững và thường được xử lý bởi các ứng dụng hóa học. Lạm dụng hóa chất này có thể dẫn đến sức khỏe con người và gây hại môi trường, vấn đề kháng. Nhận thức ngày càng tăng của các mối nguy hiểm liên quan đến loại thuốc diệt nấm đã * Tạp chí Công nghệ Nông nghiệp 2012 Vol. 8 (1): 233-240 tác giả tương ứng: Devaki NS; devakins@yahoo.co.in có sẵn trực tuyến http://www.ijat-aatsea.com 233 ISSN 1686-9141 nhấn mạnh sự cần thiết phải áp dụng phương pháp sinh học là một bệnh thay thế phương pháp kiểm soát, cũng là ecofriendly (Khare et al., 2010 ). Sinh học kiểm soát dường như là giải pháp tốt nhất cho sự bền vững lâu dài và hiệu quả quản lý đất sinh ra bệnh đó đáng kể có thể giảm thiểu bệnh (Howell, 2003). Quản lý thành công của R. solani trên cây trồng khác nhau bằng cách bioagents đã được báo cáo trước đây (Meena et al 2003,;. Atef, 2008; Hajieghrari et al, 2008.). Theo quan điểm về tầm quan trọng ngày càng tăng của ống chân đau bệnh tật và các vấn đề môi trường ngày càng tăng, hiện nghiên cứu trong ống nghiệm đã được thực hiện để kiểm soát R. solani vào thuốc lá của T. viride, T. harzianum,, A. niger, B. subtilis và . Penicillium spp Vật liệu và phương pháp phân lập tác nhân gây bệnh: cách ly được thực hiện bằng cách sử dụng phần rễ bị bệnh được thu thập từ các vườn ươm khác nhau. Phần gốc đã được rửa sạch dưới vòi nước cho khoảng 5 phút để loại bỏ các hạt đất. Những mảnh gốc đã được nhúng trong 70% cồn etylic trong 2 phút và sau đó chuyển giao cho nước cất vô trùng trong 2-3 phút, hai lần. Những mảnh gốc điều trị đã được xóa khô và sau đó chuyển giao cho tấm petri có chứa đường khoai tây khử trùng môi trường thạch (PDA) trung bình có năm miếng mỗi tấm. Tất cả tấm được giữ ở 25 ± 2 ° C trong 7 ngày và từ những tấm nền văn hóa thuần khiết của R. solani phân lập được giữ vững. Để xác nhận các phân lập đã được gửi đến IARI, New Delhi, Ấn Độ. Nấm là sau đó phụ nuôi bất cứ khi nào cần thiết trong nghiên cứu này. cách ly và bảo trì các đại lý kiểm soát sinh học: Các thuốc đối kháng nấm T. viride và T. harzianum được sử dụng trong điều tra này được lấy từ Phòng bệnh lý thực vật, GKVK, Bengaluru và A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. được phân lập từ đất vùng rễ bản địa thu thập xung quanh cây thuốc lá khỏe mạnh sau khi các phương pháp Lodha và Webster (1990). Cây thuốc lá với rễ cây và đất đã được tôn trọng một cách cẩn thận bật gốc, được đặt trong túi nilon, dán nhãn và đưa đến phòng thí nghiệm. Rễ được tách ra khỏi cây và không khí khô trong bóng râm. Đất vùng rễ được thu thập từ chúng bằng cách nhẹ nhàng cạo rễ bằng một con dao tốt. Các cô lập đã được thực hiện bằng phương pháp pha loãng (Aneja, 2005). Theo phương pháp này các nền văn hóa của A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. đã được thu hồi. Các nền văn hóa của T. harzianum, T. viride, A. niger và Penicillium spp. được duy trì trên PDA và Bacillus subtilis về dinh dưỡng Agar. phương pháp nuôi cấy kép: Trong ống nghiệm hoạt động đối kháng của T. viride, T. harzianum, A. niger và Penicillium spp. chống lại Rhizoctonia solani được nghiên cứu trong kỹ thuật nuôi kép bằng cách làm theo các phương pháp do Kucuk và Kivanc (2003). Petridishes (90 mm) có chứa 20 ml PDA vô trùng được tiêm có đường kính 5mm cắm của 7- Day-văn hóa tinh khiết cũ của đối kháng 234 Tạp chí công nghệ nông nghiệp năm 2012, Vol. 8 (1): 233-240 nấm và tác nhân gây bệnh. Một đĩa sợi nấm của mỗi loại nấm đã được đặt vào đối diện cực của tấm PDA và ủ ở 25 ° C trong lồng ấp và tăng trưởng xuyên tâm của tác nhân gây bệnh được xác định trong khoảng thời gian 24 giờ. Trong trường hợp của B. subtilis, song song streaking đã được thực hiện ở một bên của tấm thạch và ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Sau thời gian ủ bệnh 5 mm cắm đường kính sợi nấm phát triển tích cực của R. solani được đặt trên cực đối diện và ủ ở 25 ° C trong 7 ngày. Kiểm soát đĩa petri được tiêm mầm bệnh và một môi trường thạch vô trùng cắm. Ba lần nhắc lại được duy trì cho mỗi lần điều trị. Tỷ lệ ức chế tác nhân gây bệnh đã được tính toán theo công thức sau (Fokkema, 1973). R1-R2 / R1x100, nơi R2 biểu thị sự tăng trưởng xuyên tâm của tác nhân gây bệnh đối với các nhân vật phản diện đối thủ và R1 biểu thị sự tăng trưởng xuyên tâm của các tác nhân gây bệnh đối với phía đối diện. Thí nghiệm được lặp đi lặp lại ba lần. phương pháp nuôi cấy Slide: Đối với mỗi tác nhân gây bệnh - tương tác Trichoderma, một trượt sạch đã được đặt trong đĩa đường kính 9 cm và tiệt trùng. Sau đó, một nhỏ lượng hấp PDA tan chảy đã được lan truyền trên slide để tạo ra một mỏng phim PDA trên slide. 5 mm cắm đường kính sợi nấm của một tuần tuổi R. solani văn hóa được cắt từ lề và T. harzianum và T. viride được đặt trên mặt đối diện của các trang trình bày riêng tại 3 cm trên bề mặt ngoài PDA. Sau đó 1 ml đôi chưng cất nước đã được thêm vào đĩa để tránh làm khô và sau đó ủ ở 25 ± 1 ° C trong 7 ngày. Sau thời gian ủ bệnh khu vực họp của tác nhân gây bệnh sợi nấm Trichoderma đã được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng. Ảnh hưởng của chất dễ bay hơi được sản xuất bởi T. viride và T. harzianum vào sự phát triển của tác nhân gây bệnh: Phương pháp mô tả bởi Dennis và Webster (1971) đã được thông qua. Petriplates có chứa 20 ml PDA được tiêm riêng rẽ với 5 mm đĩa của thuốc đối kháng và ủ trong 5 giờ. Sau khi nắp này của mỗi tấm đã được thay thế bằng một đáy có chứa PDA trước đây lây bệnh với những đĩa của mầm bệnh và gắn bó với nhau với bộ phim parafin. Các bộ kiểm soát đã không có nhân vật phản diện. Các nền văn hóa được ủ ở 25 ° C.The nghiên cứu đã được tiến hành trong ba lần nhắc lại. Phát triển xuyên được đo lúc 24 giờ khoảng thời gian và ức chế phần trăm được xác định bằng công thức: Tỷ lệ phần trăm ức chế = C2 - C1 C2 x 100 ở đâu, C có nghĩa là tăng trưởng của R. solani trong việc kiểm soát và C1 có nghĩa là tăng trưởng của R. solani trong điều trị. 2 Kết quả và thảo luận phân biệt khả năng kiểm soát sinh học giữa các thuốc đối kháng được chú ý đối với R. solani (Hình 1). Kết quả cho thấy trong số 5 đối kháng tiềm năng, T. 235 viride và T. harzianum chứng minh là bioagents mạnh nhất chống lại R. solani. Ức chế sự tăng trưởng trong các tác nhân gây bệnh khác nhau đáng kể. 7 ngày sau khi ủ bệnh cho thấy mức độ khác nhau của sự ức chế sự tăng trưởng của sợi nấm R. solani (Hình 2). Ban đầu rất hạch nấm ít được quan sát gần tiếp xúc xen kẽ vùng R. solani và Trichoderma. Tuy nhiên, sau 4 ngày ủ có là ức chế sự phát triển và hình thành hạch nấm trên phần đối kháng của sợi nấm. T. harzianum và T. viride hoàn toàn overgrew các tác nhân gây bệnh với tỷ lệ ức chế 67% và 70% tương ứng. T. viride là mạnh nhất trong việc làm giảm sự phát triển của mầm bệnh hơn so với T. harzianum. Saikia et al., (1995) cũng báo cáo T. viride như hiệu quả hơn trong việc giảm T. harzianum sợi nấm phát triển của R. solani gây Súp lơ thối. Theo Papavizas và Lumsden (1982); Devaki et al. (1992), các cơ chế liên quan trong việc kiểm soát các tác nhân gây bệnh của Trichoderma spp. có lẽ do kháng sinh, ly giải, cạnh tranh và mycoparasitism. Phương thức mycoparasitism được quan sát là hoàn toàn khác nhau giữa T. viride và R. solani (Pandey et al., 2005). Các tăng trưởng của sợi nấm T. viride được quan sát thấy bên trong máy chủ sợi nấm. Do đó, co ngót và đông máu của tế bào chất của các tác nhân gây bệnh đã được quan sát (Hình. 3). T. harzianum sợi nấm cuộn xung quanh các tác nhân gây bệnh. Sau đó tỷ giá đã bắt đầu và núm như giác mút hình thành bên trong các sợi nấm R. solani. Các tế bào chất nội dung có thể được thực hiện thông qua các giác mút và chỉ có thành tế bào đã nhìn thấy rõ ràng mà không có tế bào chất. Baker và Cook (1979) đã báo cáo rằng các enzym có thể được sản xuất mà tiêu hóa các bức tường và các bức tường vách ngăn sợi nấm hoặc kháng sinh có thể được hình thành tha
trong ống nghiệm đánh giá các đại lý kiểm soát sinh học đối với
Rhizoctonia solani M. Seema 1 2 1 VÀ NS Devaki 2 * Sở Vi sinh vật, JSS College, BNRoad, Mysore, Karnataka, Ấn Độ Khoa Sinh học phân tử, Đại học Yuvaraja của, Universit y của Mysore, Mysore, Karnataka, Ấn Độ M. Seema và NS Devaki (2012) trong ống nghiệm đánh giá của các đại lý kiểm soát sinh học agains t Rhizoctonia solani. Tạp chí công nghệ nông nghiệp 8 (1):. 233-240 Hiệu quả của bốn nấm và vi khuẩn một bioagents tức, Trichoderma viride, Trichoderma harzianum, Aspergillus niger, Penicillium spp. và Bacillus subtilis đã được đánh giá trong ống nghiệm điều kiện đối với thuốc lá mầm bệnh đau cẳng chân, Rhizoctonia solani. Trong khảo nghiệm văn hóa kép, sự ức chế tỷ lệ tăng trưởng của T. viride, T. harzianum,, A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. trên R. solani là 70%, 67%, 57%, 50% và 44% tương ứng. Tất cả các thuốc đối kháng bị đàn áp sự hình thành của hạch nấm. Các nghiên cứu cho thấy chất chuyển hóa dễ bay hơi T. viride và T. harzianum cho thấy 50% và 40% ức chế sự tăng trưởng của sợi nấm tương ứng. quan sát dưới kính hiển vi của các nền văn hóa kép cho thấy tác dụng ức chế được gây ra bởi sự tương tác giữa các sợi nấm các đại lý kiểm soát sinh học và các tác nhân gây ly giải của tác nhân gây bệnh sợi nấm. Điều này dẫn đến việc giảm tốc độ tăng trưởng của sợi nấm R. solani. Kết quả ngụ ý rằng mức độ ức chế của T. viride và T. harzianum cung cấp việc sử dụng tuyệt vời đối kháng tiềm năng có khả năng kiểm soát y pathogenicit của R. solani trên cây thuốc lá. Từ khóa: T. viride, T. harzianum, Rhizoctonia solani , bioagents vi khuẩn Giới thiệu Rhizoctonia solani Kuhn là tác nhân gây bệnh ống chân đau, nhất bệnh giống quan trọng của thuốc lá trên toàn thế giới (Lucas, 1975). Căn bệnh này được ghi nhận lần đầu tiên trong đất Karnataka Light (KLS) vườn ươm trong vườn ươm tiến hành cuộc khảo sát năm 2005 (Anonymous, 2006). Trong KLS thiệt hại ước tính lên đến 10%. Kết quả là người nông dân bị thiếu cấy ghép để chiếm trồng kịp thời trong khu vực. Các tác nhân gây bệnh được biết đến là đất phát sinh và hạch nấm thường được tìm thấy trong đất. Tuy nhiên, thông tin hạn chế có sẵn của nó quản lý bền vững và thường được xử lý bởi các ứng dụng hóa học. Lạm dụng hóa chất này có thể dẫn đến sức khỏe con người và gây hại môi trường, vấn đề kháng. Nhận thức ngày càng tăng của các mối nguy hiểm liên quan đến loại thuốc diệt nấm đã * Tạp chí Công nghệ Nông nghiệp 2012 Vol. 8 (1): 233-240 tác giả tương ứng: Devaki NS; devakins@yahoo.co.in có sẵn trực tuyến http://www.ijat-aatsea.com 233 ISSN 1686-9141 nhấn mạnh sự cần thiết phải áp dụng phương pháp sinh học là một bệnh thay thế phương pháp kiểm soát, cũng là ecofriendly (Khare et al., 2010 ). Sinh học kiểm soát dường như là giải pháp tốt nhất cho sự bền vững lâu dài và hiệu quả quản lý đất sinh ra bệnh đó đáng kể có thể giảm thiểu bệnh (Howell, 2003). Quản lý thành công của R. solani trên cây trồng khác nhau bằng cách bioagents đã được báo cáo trước đây (Meena et al 2003,;. Atef, 2008; Hajieghrari et al, 2008.). Theo quan điểm về tầm quan trọng ngày càng tăng của ống chân đau bệnh tật và các vấn đề môi trường ngày càng tăng, hiện nghiên cứu trong ống nghiệm đã được thực hiện để kiểm soát R. solani vào thuốc lá của T. viride, T. harzianum,, A. niger, B. subtilis và . Penicillium spp Vật liệu và phương pháp phân lập tác nhân gây bệnh: cách ly được thực hiện bằng cách sử dụng phần rễ bị bệnh được thu thập từ các vườn ươm khác nhau. Phần gốc đã được rửa sạch dưới vòi nước cho khoảng 5 phút để loại bỏ các hạt đất. Những mảnh gốc đã được nhúng trong 70% cồn etylic trong 2 phút và sau đó chuyển giao cho nước cất vô trùng trong 2-3 phút, hai lần. Những mảnh gốc điều trị đã được xóa khô và sau đó chuyển giao cho tấm petri có chứa đường khoai tây khử trùng môi trường thạch (PDA) trung bình có năm miếng mỗi tấm. Tất cả tấm được giữ ở 25 ± 2 ° C trong 7 ngày và từ những tấm nền văn hóa thuần khiết của R. solani phân lập được giữ vững. Để xác nhận các phân lập đã được gửi đến IARI, New Delhi, Ấn Độ. Nấm là sau đó phụ nuôi bất cứ khi nào cần thiết trong nghiên cứu này. cách ly và bảo trì các đại lý kiểm soát sinh học: Các thuốc đối kháng nấm T. viride và T. harzianum được sử dụng trong điều tra này được lấy từ Phòng bệnh lý thực vật, GKVK, Bengaluru và A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. được phân lập từ đất vùng rễ bản địa thu thập xung quanh cây thuốc lá khỏe mạnh sau khi các phương pháp Lodha và Webster (1990). Cây thuốc lá với rễ cây và đất đã được tôn trọng một cách cẩn thận bật gốc, được đặt trong túi nilon, dán nhãn và đưa đến phòng thí nghiệm. Rễ được tách ra khỏi cây và không khí khô trong bóng râm. Đất vùng rễ được thu thập từ chúng bằng cách nhẹ nhàng cạo rễ bằng một con dao tốt. Các cô lập đã được thực hiện bằng phương pháp pha loãng (Aneja, 2005). Theo phương pháp này các nền văn hóa của A. niger, B. subtilis và Penicillium spp. đã được thu hồi. Các nền văn hóa của T. harzianum, T. viride, A. niger và Penicillium spp. được duy trì trên PDA và Bacillus subtilis về dinh dưỡng Agar. phương pháp nuôi cấy kép: Trong ống nghiệm hoạt động đối kháng của T. viride, T. harzianum, A. niger và Penicillium spp. chống lại Rhizoctonia solani được nghiên cứu trong kỹ thuật nuôi kép bằng cách làm theo các phương pháp do Kucuk và Kivanc (2003). Petridishes (90 mm) có chứa 20 ml PDA vô trùng được tiêm có đường kính 5mm cắm của 7- Day-văn hóa tinh khiết cũ của đối kháng 234 Tạp chí công nghệ nông nghiệp năm 2012, Vol. 8 (1): 233-240 nấm và tác nhân gây bệnh. Một đĩa sợi nấm của mỗi loại nấm đã được đặt vào đối diện cực của tấm PDA và ủ ở 25 ° C trong lồng ấp và tăng trưởng xuyên tâm của tác nhân gây bệnh được xác định trong khoảng thời gian 24 giờ. Trong trường hợp của B. subtilis, song song streaking đã được thực hiện ở một bên của tấm thạch và ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Sau thời gian ủ bệnh 5 mm cắm đường kính sợi nấm phát triển tích cực của R. solani được đặt trên cực đối diện và ủ ở 25 ° C trong 7 ngày. Kiểm soát đĩa petri được tiêm mầm bệnh và một môi trường thạch vô trùng cắm. Ba lần nhắc lại được duy trì cho mỗi lần điều trị. Tỷ lệ ức chế tác nhân gây bệnh đã được tính toán theo công thức sau (Fokkema, 1973). R1-R2 / R1x100, nơi R2 biểu thị sự tăng trưởng xuyên tâm của tác nhân gây bệnh đối với các nhân vật phản diện đối thủ và R1 biểu thị sự tăng trưởng xuyên tâm của các tác nhân gây bệnh đối với phía đối diện. Thí nghiệm được lặp đi lặp lại ba lần. phương pháp nuôi cấy Slide: Đối với mỗi tác nhân gây bệnh - tương tác Trichoderma, một trượt sạch đã được đặt trong đĩa đường kính 9 cm và tiệt trùng. Sau đó, một nhỏ lượng hấp PDA tan chảy đã được lan truyền trên slide để tạo ra một mỏng phim PDA trên slide. 5 mm cắm đường kính sợi nấm của một tuần tuổi R. solani văn hóa được cắt từ lề và T. harzianum và T. viride được đặt trên mặt đối diện của các trang trình bày riêng tại 3 cm trên bề mặt ngoài PDA. Sau đó 1 ml đôi chưng cất nước đã được thêm vào đĩa để tránh làm khô và sau đó ủ ở 25 ± 1 ° C trong 7 ngày. Sau thời gian ủ bệnh khu vực họp của tác nhân gây bệnh sợi nấm Trichoderma đã được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng. Ảnh hưởng của chất dễ bay hơi được sản xuất bởi T. viride và T. harzianum vào sự phát triển của tác nhân gây bệnh: Phương pháp mô tả bởi Dennis và Webster (1971) đã được thông qua. Petriplates có chứa 20 ml PDA được tiêm riêng rẽ với 5 mm đĩa của thuốc đối kháng và ủ trong 5 giờ. Sau khi nắp này của mỗi tấm đã được thay thế bằng một đáy có chứa PDA trước đây lây bệnh với những đĩa của mầm bệnh và gắn bó với nhau với bộ phim parafin. Các bộ kiểm soát đã không có nhân vật phản diện. Các nền văn hóa được ủ ở 25 ° C.The nghiên cứu đã được tiến hành trong ba lần nhắc lại. Phát triển xuyên được đo lúc 24 giờ khoảng thời gian và ức chế phần trăm được xác định bằng công thức: Tỷ lệ phần trăm ức chế = C2 - C1 C2 x 100 ở đâu, C có nghĩa là tăng trưởng của R. solani trong việc kiểm soát và C1 có nghĩa là tăng trưởng của R. solani trong điều trị. 2 Kết quả và thảo luận phân biệt khả năng kiểm soát sinh học giữa các thuốc đối kháng được chú ý đối với R. solani (Hình 1). Kết quả cho thấy trong số 5 đối kháng tiềm năng, T. 235 viride và T. harzianum chứng minh là bioagents mạnh nhất chống lại R. solani. Ức chế sự tăng trưởng trong các tác nhân gây bệnh khác nhau đáng kể. 7 ngày sau khi ủ bệnh cho thấy mức độ khác nhau của sự ức chế sự tăng trưởng của sợi nấm R. solani (Hình 2). Ban đầu rất hạch nấm ít được quan sát gần tiếp xúc xen kẽ vùng R. solani và Trichoderma. Tuy nhiên, sau 4 ngày ủ có là ức chế sự phát triển và hình thành hạch nấm trên phần đối kháng của sợi nấm. T. harzianum và T. viride hoàn toàn overgrew các tác nhân gây bệnh với tỷ lệ ức chế 67% và 70% tương ứng. T. viride là mạnh nhất trong việc làm giảm sự phát triển của mầm bệnh hơn so với T. harzianum. Saikia et al., (1995) cũng báo cáo T. viride như hiệu quả hơn trong việc giảm T. harzianum sợi nấm phát triển của R. solani gây Súp lơ thối. Theo Papavizas và Lumsden (1982); Devaki et al. (1992), các cơ chế liên quan trong việc kiểm soát các tác nhân gây bệnh của Trichoderma spp. có lẽ do kháng sinh, ly giải, cạnh tranh và mycoparasitism. Phương thức mycoparasitism được quan sát là hoàn toàn khác nhau giữa T. viride và R. solani (Pandey et al., 2005). Các tăng trưởng của sợi nấm T. viride được quan sát thấy bên trong máy chủ sợi nấm. Do đó, co ngót và đông máu của tế bào chất của các tác nhân gây bệnh đã được quan sát (Hình. 3). T. harzianum sợi nấm cuộn xung quanh các tác nhân gây bệnh. Sau đó tỷ giá đã bắt đầu và núm như giác mút hình thành bên trong các sợi nấm R. solani. Các tế bào chất nội dung có thể được thực hiện thông qua các giác mút và chỉ có thành tế bào đã nhìn thấy rõ ràng mà không có tế bào chất. Baker và Cook (1979) đã báo cáo rằng các enzym có thể được sản xuất mà tiêu hóa các bức tường và các bức tường vách ngăn sợi nấm hoặc kháng sinh có thể được hình thành tha
đang được dịch, vui lòng đợi..
Các ngôn ngữ khác
Hỗ trợ công cụ dịch thuật: Albania, Amharic, Anh, Armenia, Azerbaijan, Ba Lan, Ba Tư, Bantu, Basque, Belarus, Bengal, Bosnia, Bulgaria, Bồ Đào Nha, Catalan, Cebuano, Chichewa, Corsi, Creole (Haiti), Croatia, Do Thái, Estonia, Filipino, Frisia, Gael Scotland, Galicia, George, Gujarat, Hausa, Hawaii, Hindi, Hmong, Hungary, Hy Lạp, Hà Lan, Hà Lan (Nam Phi), Hàn, Iceland, Igbo, Ireland, Java, Kannada, Kazakh, Khmer, Kinyarwanda, Klingon, Kurd, Kyrgyz, Latinh, Latvia, Litva, Luxembourg, Lào, Macedonia, Malagasy, Malayalam, Malta, Maori, Marathi, Myanmar, Mã Lai, Mông Cổ, Na Uy, Nepal, Nga, Nhật, Odia (Oriya), Pashto, Pháp, Phát hiện ngôn ngữ, Phần Lan, Punjab, Quốc tế ngữ, Rumani, Samoa, Serbia, Sesotho, Shona, Sindhi, Sinhala, Slovak, Slovenia, Somali, Sunda, Swahili, Séc, Tajik, Tamil, Tatar, Telugu, Thái, Thổ Nhĩ Kỳ, Thụy Điển, Tiếng Indonesia, Tiếng Ý, Trung, Trung (Phồn thể), Turkmen, Tây Ban Nha, Ukraina, Urdu, Uyghur, Uzbek, Việt, Xứ Wales, Yiddish, Yoruba, Zulu, Đan Mạch, Đức, Ả Rập, dịch ngôn ngữ.
- trò chơi này vừa ra phiên bản mới
- i'd love to
- the road as if it was alive
- mất bao lâu để đến chỗ làm?
- Cảm ơn thông tin của bạn
- từ điển điện tử của bạn yêu cầu cập nhập
- what were the jobs of Howard's neighbors
- mobile phones are very fashionable with
- bạn đi làm hết bao lâu?
- We will be an inseparable pair
- everything
- would you like to meet her?
- bạn mất bao lâu để đến chỗ làm?
- Tôi làm việc về rồi. Hôn anh
- nó làm bạn rụng tóc
- Russia has continued to increase its mil
- Pet tom for 13 seconds
- what is this
- what were the jobs of Howard's neighbors
- mobile phones are very fashionable with
- everything was moving
- từ điện điện tử của bạn yêu cầu cập nhập
- - Analysis product, program selling of c
- Mọi người sẽ học được cách sống tự lập k
