Cey. J. Sci. (Bio. Sci.) 38 (1): 31

Cey. J. Sci. (Bio. Sci.) 38 (1): 31-34, 2009
FIRST REPORT OF COLLETOTRICHUM ACUTATUM ON MANGIFERA INDICA IN SRI LANKA
C.K. Jayasinghe* and T. H. P. S. Fernando
Rubber Research Institute of Sri Lanka, Dartonfield, Agalawatta, Sri Lanka Accepted June 05 2009
ABSTRACT
Colletotrichum acutatum is known to have a wide host range and has become an increasingly important pathogen on many economic crops worldwide. This is the first report of Colletotrichum acutatum on mango in Sri Lanka. Colletotrichum gloeosporiodes together with C. acutatum are considered as causal agents of this disease. Colletotrichum acutatum was characterized by fusiform conidia and white to orange colonies with slight shades of light mouse grey aerial mycelia. Colletotrichum gloeosporioides produced grey colonies with a dark mouse grey centre and conidia were cylindrical. The other differences between the mango isolate of C. acutatum and C. gloeosporioides were the slower growth rate and extremely high tolerance of C. acutatum to the fungicide carbendazim.
Key words: Colletotrichum gloeosporioides, Hevea brasiliensis, carbendazim
INTRODUCTION
Colletotrichum acutatum (Simmonds ex Simmonds) is pathogenic on a number of economically important fruit and tree crops worldwide. The pathogen is declared as a quarantine pest in member countries of the European community (EC) and has now become an increasingly important plant pathogenic fungus.
Mangoes are an important export fruit for many tropical and sub-tropical countries. Anthracnose is one of the most widespread and common diseases, which causes premature fruit drop and direct reduction in quality of ripe fruits shortening the storage lifetime (Dodd et al., 1992). During epidemics it affects young leaves resulting severe spots and blackening of tips (Fig. 1a). Affected flowers fall off causing lowered fruit set. The most conspicuous symptom of the disease is the circular, dark, sunken anthracnose lesions on ripe fruits (Fig. 1b).
The anthracnose spreads throughout Sri Lanka during monsoons resulting in a considerable economic loss in many crops. With the discovery of C. acutatum as the main cause of rubber anthracnose in Sri Lanka (Jayasinghe et al., 1997), an island-wide survey was conducted to re-investigate the pathogens responsible for anthracnose diseases of crops
cultivated in and around the rubber plantations. The present study was undertaken to confirm the identity of C. acutatum on mangoes.
MATERIALS AND METHODS
Isolation of the pathogen The pathogen was isolated from symptomatic mango leaves collected from several locations in the Kalutara district after surface sterilization with 70% ethanol. Pure cultures were obtained and single spore isolates were maintained on potato dextrose agar (PDA).
Koch’s postulates were proved using tender mango leaves and fruits. Drops (0.02ml) of an aqueous conidial suspension (1X105 spores/ml) prepared from 7-day old cultures were used for inoculations. They were incubated at room temperature (RT) 28±2°C in humid chambers (Rh- 100% approx).
Identification of Colletotrichum spp. The two species were identified based on criteria described by Jayasinghe and Fernando (1998) and the identify of one of the isolates was confirmed as C. acutatum by CABI, UK.
Culture morphology (colony colour), growth rate and the conidial morphology were observed using 6-day-old cultures grown on PDA which were incubated at RT under continuous
__________________________________________ *Corresponding Author’s email: [e-mail]
C.K. Jayasinghe and T.H.P.S. Fernando
32
fluorescent light. Sensitivity of the isolates to different concentrations of carbendazim (Bullet 50% a i., Agroessea, Spain) to distinguish the two species (Jayasinghe and Wijesundera, 1995; Jayasinghe and Fernando, 1998).
Pathogenicity tests Pathogenicity of the two Colletotricum spp. (MA 1, MA 2, & MG 1, MG 2) was tested on young mango leaves. Drops (0.02ml) of an aqueous conidial suspension (1X105 spores ml -1) prepared from 7-day-old cultures of each isolate were placed on copper brown leaves and six
leaves were inoculated with each isolate. Later cross infection ability of the two isolates was tested on young detached leaves of Hevea rubber (clone RRIC 121). Six drops of conidial suspension (0.02 ml, 1X105 spores ml -1 prepared from 7-day-old cultures) were placed on either side of the midrib on the lower surface of each leaf. Inoculated leaves were incubated at 28±20C (RT) in humid chambers. Specimens inoculated with sterile distilled water drops served as controls.

Figure 1. (a) Mango leaves affected with Colletotrichum leaf disease showing spots and blackening of tips, (b) Circular, dark sunken anthracnose lesions on ripen fruits, (c) Conidia of Colletotrichum acutatum fusiform – tapered to a point in both ends and (d) Conidia of Colletotrichum gloeosporioides cylindrical with rounded ends.
Colletotrichum acutatum on Mangifera indica 33
RESULTS
Isolates obtained from the affected leaves of mango, consistently produced two types of colonies. Colletotrichum gloeosporioides produced dark grey colonies and formed typically cylindrical conidia with rounded ends (Fig. 1d). The other colonies were white to orange in colour, with slight shades of pink and light mouse grey aerial mycelium. On the reverse side, the centre was dark orange to pink and the conidia produced were fusiform (Fig. 1d) (tapered to a point in both ends). C. acutatum from both hosts showed significantly slower growth rate of the colonies compared to C. gloeosporioides isolates.
Observations on the sensitivity of the two species to fungicides in vitro showed that C. gloeosporioides (both mango and rubber isolates) were extremely sensitive to carbendazim whereas more than a 1000 fold increase of fungicide concentration was needed to obtain 90-100% growth inhibition (EC 90-100) in C. acutatum (Table 1). One of the isolates identified as C. acutatum was sent to CABI, UK and authenticated as C. acutatum (IMI 391758). The specimen has been deposited in the IMI culture collection.
Table 1. Concentrations (ppm) of carbendazim required to inhibit 90 – 100% mycelial growth in C. acutatum and C. gloeosporioides isolates.
Isolate Concentration of fungicide required to obtain EC 90-100 (ppm) RA 1 > 4000 RA 2 > 4000 MA 1 > 4000 MA 2 > 4000 RG 1 < 25 RG 2 < 25 MG 1 < 25 MG 2 < 25 RA 1 & RA 2 – Rubber isolates of C. acutatum MA 1 & MA 2 – Mango isolate of C. acutatum RG 1 & RG 2 – Rubber isolates of C. gloeosporioides MG1 & MG 2 – Mango isolates of C. gloeosporioides
All mango leaves inoculated with either C. gloeosporioides or C. acutatum developed typical anthracnose lesions. In cross inoculation studies, rubber isolates (RA 1, RA 2, & RGI, RG 2) produced lesions on both rubber and mango leaves. Mango isolates (MA 1, MA 2 & MG 1,
MG 2) too produced lesions on both mango and rubber but the size of the lesions on rubber was comparatively smaller.
DISCUSSION
This is the first report of C. acutatum causing anthracnose of mango in Sri Lanka (CMI, 19651988 & CAB PEST CD, 1989-2007). Colletotrichum gloeosporioides was believed to be the only cause of mango anthracnose in Sri Lanka. (Alahakoon & Brown, 1994),
The culture and reproductive characteristics that have been previously utilized by various workers have been employed to distinguish between the two species (Adeskaveg & Hartin, 1997; Jayasinghe et al., 1997). The insensitivity of C. acutatum isolates against carbendazim has been utilized by the same authors to distinguish isolates of C. acutatum from C. gloeosporioides from rubber and Flacourtia inermis (Jayasinghe & Fernando, 1998; 2004). Further; high tolerance of C. acutatum to this group of fungicides compared to C. gloeosporioides has been shown by various workers for strawberry, peach, almond, apple, pecan and citrus isolates (Adaskaveg & Hartin, 1997; Bernstein et al, 1995; Sonada & Pelosi, 1988). Our observations confirm that insensitivity to carbendazim, slower growth rate, fusiform conidia are reliable characteristics to distinguish mango isolate of Colletotrichum acutatum from C. gloeosporioides.
Based on our findings, we propose that both C. acutatum and C. gloeosporioides should be considered as causal agents of mango anthracnose. Therefore we also recommend reinvestigation of anthracnose pathogens already reported as C. gloeosporioides on all fruits in Sri Lanka as the species C. acutatum has been shown to be an increasingly important pathogen of fruits worldwide.
ACKNOWLEDGEMENTS We are grateful to Dr. Wasana Wijesuriya and the staff of the Biometry Section for statistical analysis. Mr. W. Amarathunga & Mr. P. Pieris are thanked for photography and Miss. Imalka for word processing.
C.K. Jayasinghe and T.H.P.S. Fernando
34
REFERENCES
Adaskaveg, J.E. and Hartin, R.J. (1997). Characterization of Colletotrichum acutatum isolate causing anthracnose of almond and peach in California. Phytopathology 87: 979–987.
Alahakoon, P.W. and Brown, A.E. (1994). Host range of Colletotrichum gloeosporioides on tropical fruit crops in Sri Lanka. International Journal of Pest Management 40: 23–26.
Bernstein, B., Zehr, E.I., Dean, R.A. and Shabi E. (1995). Characteristics of Colletotrichum from peach, apple, pecan and other hosts. Plant Disease 79: 478–482.
CAB PEST CD (1989-2004 March) Silver Platters Information, CAB International, U.K.
CMI. Review of plant pathology 1965–1988. CAB International, UK.
Dodd, J.C., Estrada, A. and Jeger, M.J. (1992). Epidemiology of Colletotrichum gloeosporioides in tropics. In: J.A. bailey and M.J. Jeger (Eds) Colletotrichum: biology, pathology and control Pp. 308–325.
Jayasinghe, C.K. and Fernando, T.H.P.S. (1998). Growth at different temperatures and on fungicide amended media: Two characteristics to di

Kết quả (Việt) 2:

Cey. J. Sci. (. Bio Sci.) 38 (1): 31-34, 2009
ĐẦU BÁO CÁO CỦA Colletotrichum acutatum ON Mangifera indica IN SRI LANKA
CK Jayasinghe * và THPS Fernando
Cao su Viện nghiên cứu của Sri Lanka, Dartonfield, Agalawatta, Sri Lanka được chấp nhận ngày 05 tháng 6 năm 2009
TÓM TẮT
Colletotrichum acutatum được biết là có phổ ký chủ rộng và đã trở thành một tác nhân gây bệnh ngày càng quan trọng trên nhiều loại cây trồng kinh tế trên toàn thế giới. Đây là báo cáo đầu tiên của Colletotrichum acutatum trên xoài ở Sri Lanka. Colletotrichum gloeosporiodes cùng với C. acutatum được coi là đại lý nhân quả của căn bệnh này. Colletotrichum acutatum được đặc trưng bởi fusiform bào tử và trắng khuẩn lạc màu cam với sắc thái nhẹ của chuột đèn sợi nấm trên không xám. Gloeosporioides Colletotrichum sản xuất thuộc địa màu xám với trung tâm màu xám chuột đậm và bào tử là hình trụ. Sự khác biệt khác giữa các chủng xoài của C. acutatum và C. gloeosporioides là tốc độ tăng trưởng chậm hơn và khoan dung cực kỳ cao của C. acutatum với carbendazim loại thuốc diệt nấm.
Từ khóa: Colletotrichum gloeosporioides, Hevea brasiliensis, carbendazim
GIỚI THIỆU
Colletotrichum acutatum (Simmonds ex Simmonds ) là gây bệnh trên một số cây ăn quả và cây quan trọng về kinh tế trên toàn thế giới. Các tác nhân gây bệnh được khai báo là một dịch hại kiểm dịch ở các nước thành viên của cộng đồng châu Âu (EC) và bây giờ đã trở thành một cây nấm gây bệnh ngày càng quan trọng.
Những quả xoài là một loại quả xuất khẩu quan trọng đối với nhiều nước nhiệt đới và cận nhiệt đới. Bệnh thán thư là một trong những bệnh phổ biến nhất và phổ biến, gây sinh non rụng quả và giảm trực tiếp vào chất lượng của trái cây chín rút ngắn tuổi thọ lưu trữ (Dodd et al., 1992). Trong vụ dịch, ảnh hưởng đến lá non quả điểm nghiêm trọng và làm đen của lời khuyên (Fig. 1a). Hoa bị ảnh hưởng rơi ra gây hạ xuống đậu trái. Triệu chứng dễ thấy nhất của bệnh là tròn, đen tối, các tổn thương bệnh thán thư bị chìm trên quả chín (Fig. 1b).
Các bệnh thán thư lây lan khắp Sri Lanka trong gió mùa gây thiệt hại kinh tế đáng kể trong nhiều loại cây trồng. Với sự khám phá của C. acutatum là nguyên nhân chính của bệnh thán thư cao su ở Sri Lanka (Jayasinghe et al., 1997), một cuộc khảo sát đảo rộng đã được tiến hành để tái điều tra các tác nhân gây bệnh có trách nhiệm đối với các bệnh thán thư của cây
trồng trong và xung quanh các đồn điền cao su. Các nghiên cứu này đã được thực hiện để xác nhận danh tính của C. acutatum trên xoài.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Phân lập mầm bệnh Tác nhân gây bệnh được phân lập từ lá xoài có triệu chứng thu thập được từ một số địa điểm ở quận Kalutara sau khi khử trùng bề mặt với 70% ethanol. Nền văn hóa thuần túy đã thu được và phân lập đơn bào tử được duy trì trên môi trường thạch đường khoai tây (PDA).
Quy tắc Koch đã được chứng minh bằng cách sử dụng lá xoài thầu và trái cây. Giọt (0.02ml) của một hệ thống treo bào tử vô dịch nước (1X105 bào tử / ml) điều chế từ các nền văn hóa cũ 7 ngày đã được sử dụng để tiêm chủng. Họ được ủ ở nhiệt độ phòng (RT) 28 ± 2 ° C trong ẩm (Rh- 100% xấp xỉ).
Xác định Colletotrichum spp. Hai loài đã được xác định dựa trên các tiêu chí mô tả bởi Jayasinghe và Fernando (1998) và xác định của một trong các mẫu phân lập được khẳng định là C. acutatum bởi CABI,. Anh
Văn hoá hình thái (màu thuộc địa), tốc độ tăng trưởng và hình thái bào tử vô tính đã được quan sát sử dụng các nền văn hóa 6 ngày tuổi trồng trên PDA đã được ủ ở RT dưới liên tục
__________________________________________ * tương ứng của tác giả email: [e-mail]
CK Jayasinghe và THPS Fernando
32
ánh sáng huỳnh quang. Độ nhạy của các phân lập với nồng độ khác nhau của carbendazim (. Bullet 50% a i, Agroessea, Tây Ban Nha) để phân biệt hai loài (Jayasinghe và Wijesundera, 1995; Jayasinghe và Fernando, 1998).
Việc lây bệnh bệnh nhân tạo của hai Colletotricum spp. (MA 1, MA 2, & MG 1, MG 2) đã được thử nghiệm trên lá xoài non. Giọt (0.02ml) của một hệ thống treo bào tử vô dịch nước (1X105 bào tử ml -1) được chuẩn bị từ các nền văn hóa 7 ngày tuổi của từng cô lập được đặt trên đồng lá màu nâu và sáu
lá được tiêm mỗi cô lập. Khả năng lây nhiễm chéo sau của hai phân lập được thử nghiệm trên lá tách rời trẻ của Hevea cao su (clone RRIC 121). Sáu giọt treo bào tử vô tính (0,02 ml, 1X105 bào tử ml -1 chuẩn bị từ các nền văn hóa 7 ngày tuổi) được đặt ở hai bên của gân trên bề mặt dưới của mỗi lá. Lá cấy được ủ ở 28 ± 20C (RT) trong buồng ẩm. Mẫu vật được cấy giọt nước cất vô trùng phục vụ như điều khiển. Hình 1. (a) Mango lá bị ảnh hưởng với bệnh lá Colletotrichum thấy đốm và làm đen của lời khuyên, (b) Thông tư, tối tổn thương bệnh thán thư bị chìm trên trái cây chín, (c) Bào tử đính của Colletotrichum acutatum fusiform - giảm dần đến một điểm trong cả hai đầu và (d) Bào tử đính của Colletotrichum gloeosporioides hình trụ với đầu tròn. Colletotrichum acutatum trên Mangifera indica 33 KẾT QUẢ phân lập được từ các lá bị ảnh hưởng của xoài, liên tục sản xuất hai loại thuộc địa. Gloeosporioides Colletotrichum sản xuất thuộc địa màu xám đen và hình thành bào tử thường hình trụ với đầu tròn (Hình. 1d). Các thuộc địa khác là người da trắng đến màu cam, với sắc thái nhẹ của hồng và chuột ánh sáng màu xám sợi nấm trên không. Trên mặt sau, trung tâm là tối màu da cam sang màu hồng và các bào tử được sản xuất là hình thoi (Hình 1d.) (Giảm dần đến một điểm trong cả hai đầu). C. acutatum từ cả hai máy chủ cho thấy tốc độ tăng trưởng chậm hơn đáng kể của các thuộc địa so với C. gloeosporioides phân lập. Quan sát về sự nhạy cảm của hai loài thuốc diệt nấm trong ống nghiệm cho thấy C. gloeosporioides (cả xoài và cao su phân lập) là cực kỳ nhạy cảm với carbendazim trong khi đó hơn một năm 1000 tăng gấp của nồng độ thuốc trừ nấm là cần thiết để có được 90-100% ức chế tăng trưởng (EC 90-100) trong C. acutatum (Bảng 1). Một trong những phân lập xác định là C. acutatum đã được gửi đến CABI, Vương quốc Anh và xác thực như C. acutatum (IMI 391.758). Các mẫu này được nộp trong bộ sưu tập văn hóa IMI. Bảng 1. Nồng độ (ppm) của carbendazim cần thiết để ức chế 90-100% tăng trưởng sợi nấm trong C. acutatum và C. gloeosporioides phân lập. Cô lập Nồng độ thuốc trừ nấm cần thiết để có được EC 90-100 (ppm) RA 1> 4000 RA 2> 4000 MA 1> 4000 MA 2> 4000 RG 1 <25 RG 2 <25 MG 1 <25 MG 2 <25 RA 1 & RA 2 - Cao su chủng C. acutatum MA 1 & MA 2 - Mango cô lập của C. acutatum RG 1 & 2 RG - Cao su chủng C. gloeosporioides MG1 & MG 2 - Mango chủng C. gloeosporioides Tất cả các lá xoài tiêm hoặc C. gloeosporioides hoặc C. acutatum phát triển các tổn thương bệnh thán thư điển hình. Trong các nghiên cứu cấy chéo, phân lập cao su (1 RA, RA 2, & RGI, RG 2) sản xuất các tổn thương trên cả cao su và xoài lá. Phân lập Mango (MA 1, 2 & MA MG 1, MG 2) tổn thương quá sản xuất trên cả xoài và cao su nhưng kích thước của tổn thương trên cao su là tương đối nhỏ. THẢO LUẬN Đây là báo cáo đầu tiên của C. acutatum gây bệnh thán thư xoài ở Sri Lanka (CMI, 19.651.988 & CAB PEST CD, 1989-2007). Gloeosporioides Colletotrichum được cho là nguyên nhân duy nhất của xoài thán thư ở Sri Lanka. (Alahakoon & Brown, 1994), Văn hóa và đặc điểm sinh sản đã được sử dụng trước đó bởi nhân khác nhau đã được sử dụng để phân biệt giữa hai loài (Adeskaveg & Hartin, 1997; Jayasinghe et al., 1997). Các sự vô cảm của C. acutatum chủng chống lại carbendazim đã được sử dụng bởi các tác giả cùng để phân biệt chủng C. acutatum từ C. gloeosporioides từ cao su và Flacourtia inermis (Jayasinghe & Fernando, 1998; 2004). Hơn nữa; khoan dung cao của C. acutatum này nhóm thuốc diệt nấm so với C. gloeosporioides đã được thể hiện bởi các công nhân khác nhau cho dâu tây, đào, hạnh nhân, táo, hồ đào và cam quýt phân lập (Adaskaveg & Hartin, 1997; Bernstein et al, 1995; Sonada & Pelosi, 1988). Quan sát của chúng tôi xác nhận rằng không có sinh khí để carbendazim, tốc độ tăng trưởng chậm hơn, bào tử hình thoi là đặc điểm đáng tin cậy để phân biệt xoài cô lập của Colletotrichum acutatum từ C. gloeosporioides. Dựa trên những phát hiện của chúng tôi, chúng tôi đề xuất rằng cả hai C. acutatum và C. gloeosporioides nên được coi là quan hệ nhân quả đại lý của xoài bệnh thán thư. Do đó, chúng tôi cũng khuyên bạn nên tra lại các tác nhân gây bệnh thán thư đã được báo cáo là C. gloeosporioides trên tất cả các loại trái cây ở Sri Lanka là loài C. acutatum đã được chứng minh là một tác nhân gây bệnh ngày càng quan trọng của các loại trái cây trên toàn thế giới. LỜI CẢM ƠN Chúng tôi xin cảm ơn Tiến sĩ Wasana Wijesuriya và nhân viên của Sinh Trắc Học Phần phân tích thống kê. Ông W. Amarathunga & Ông P. Pieris đang bắt đầu để chụp ảnh và Hoa hậu. Imalka cho xử lý văn bản. CK Jayasinghe và THPS Fernando 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Adaskaveg, JE và Hartin, RJ (1997). Đặc tính của Colletotrichum acutatum cô lập gây bệnh thán thư của hạnh nhân và đào ở California. Phytopathology 87:. 979-987 Alahakoon, PW và Brown, AE (1994). Phổ ký chủ của nấm Colletotrichum gloeosporioides trên cây ăn quả nhiệt đới tại Sri Lanka. Tạp chí quốc tế về quản lý dịch hại 40:. 23-26 Bernstein, B., Zehr, EI, Dean, RA và Shabi E. (1995). Đặc điểm của Colletotrichum từ đào, táo, hồ đào và các host khác. Bệnh thực vật 79:. 478-482 CAB PEST CD (1989-2004 March) Silver Platters Thông tin, CAB International, Anh CMI. Xem xét các cây bệnh học 1965-1988. CAB International, Vương quốc Anh. Dodd, JC, Estrada, A. và Jeger, MJ (1992). Dịch tễ học của Colletotrichum gloeosporioides ở vùng nhiệt đới. Trong: JA bailey và MJ Jeger (Eds) Colletotrichum: sinh học, bệnh lý và kiểm soát Pp. 308-325. Jayasinghe, CK và Fernando, THPS (1998). Tăng trưởng ở nhiệt độ khác nhau và trên loại thuốc diệt nấm sửa đổi phương tiện truyền thông: Hai đặc điểm để di