Antiproliferative assay. Cells were

Antiproliferative assay. Cells were plated in 96-well flat bottom plates at 5000–10 000 cell/well. The difference in cell numbers plated adjusts for differences in the growth rates of the various cell lines. Cells were allowed to adhere to the wells overnight, then the herbal
extracts were added to triplicate wells in serial 3-fold dilutions. Water was added to the control wells at a 1:10 dilution in medium. These plates were incubated at 37 °C, 5% CO2 for 3 days, then assayed fro growth inhibition using a sulforhodamine B (SRB) assay (Skehan et al., 1990). The cells were fixed by the addition of cold 50% trichloroacetic acid to a final concentration of 10%. After a 1 h incubation at 4 °C, the cells were washed five times with deionized water. The cells were then stained with 0.4% SRB (Sigma) dissolved in 1% acetic acid for 15–30 min and subsequently washed five times with 1% acetic acid to remove unbound stain.
After the plates had air dried at room temperature, the bound dye was solubilized with 10 mm Tris base and the plates were analysed on a microplate reader (Molecular Devices) at 595 nm. The percent growth inhibition was calculated as: (ave. OD control wells – ave. OD herbal extract wells)/(ave OD control wells).
RESULTS AND DISCUSSION
Twelve crude aqueous herbal extracts were screened against a panel of human and murine cancer cell lines representing different histological types (breast, lung, pancreas and prostate). These herbs (Table 1) were selected based on our previous studies demonstrating their antiproliferative activity against a panel of breast cancer cell lines (Campbell et al., 2002). As shown in Table 2, these crude aqueous extracts exhibited growth inhibitory activity against a variety of cancer cell lines.The extracts were initially tested for growth inhibitory activity at a 1:10 dilution. Full dose response curves were then obtained for those extracts that emonstrated greater than 50% inhibition in the initial screen.IC50 values were determined from these dose response curves.
Comparing the sensitivity of the different cell lines to these extracts, the murine cell lines (LLC, Panc02 and MCNeuA) were noted to be more sensitive than the human cell lines (A549, Panc-1, LNCaP, PC-3 and MCF-7). Examining only the human cell lines, two herbs (G. sinensis and S. barbata) show some degree of specificity for the breast cancer cell line (MCF-7). The IC50 value for G. sinensis on MCF-7 was 486 µg/mL. In contrast, IC50 values were not achieved on the other
human cell lines. Similarly, the IC50 value for S. barbata on MCF-7 was 818 µg/mL, while the IC50 values on the other human cancer cell lines were all >1000 µg/mL. Eleven of these aqueous herb extracts were also tested against cultured normal human mammary epithelial cells
(huMEC). As shown in Table 2, nine of these extracts failed to achieve an IC50 value on the huMEC, indicating that these herbs are relatively inactive on normal cells. One of the herbs (A. argyi) that demonstrated activity against huMEC had an IC50 value of 669 µg/mL which was 2–7 times greater than the IC50 values obtained with the cancer cell lines, again suggesting some
specificity for the cancer cells versus normal cells. In contrast, V. segetalis was as active on the normal huMEC as it was on some of the cancer cell lines

Kết quả (Việt) 1:

Antiproliferative khảo nghiệm. Tế bào đã được mạ trong tấm lát đáy phẳng 96-cũng tại 5000-10 000 di động/tốt. Sự khác biệt trong số điện thoại di động mạ điều chỉnh cho sự khác biệt trong tỷ lệ tăng trưởng của các dòng tế bào khác nhau. Tế bào đã được cho phép để tuân thủ các giếng qua đêm, sau đó thảo dượcchất chiết xuất từ được thêm vào để triplicate wells trong nối tiếp 3-fold dilutions. Nước đã được bổ sung để kiểm soát wells lúc 1:10 pha loãng trong môi trường. Các mảng được ủ tại 37 ° C, 5% co 2 trong 3 ngày, sau đó assayed fro ức chế sự phát triển bằng cách sử dụng một khảo nghiệm B (SRB) sulforhodamine (Skehan và ctv., 1990). Các tế bào đã được cố định bằng cách bổ sung lạnh Axit tricloaxetic 50% nồng độ cuối cùng của 10%. Sau khi một ấp 1 h 4 ° C, các tế bào đã được rửa sạch năm lần với deionized nước. Các tế bào sau đó đã được nhuộm màu với 0,4% SRB (Sigma) hòa tan trong 1% axit axetic trong 15-30 phút và sau đó rửa sạch năm lần với 1% axit axetic để loại bỏ vết toạc.Sau khi các tấm có máy sấy khô ở nhiệt độ phòng, thuốc nhuộm ràng buộc solubilized với 10 mm Tris cơ sở và các mảng được phân tích trên một độc giả microplate (phân tử thiết bị) tại 595 nm. Ức chế phần trăm tăng trưởng đã được tính toán như: (ave. OD điều khiển wells-chiết xuất ave. OD thảo dược wells) / (ave OD điều khiển wells).KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬNMười hai thô dung dịch nước chiết xuất thảo dược đã được kiểm tra đối với một bảng điều khiển của tế bào ung thư của con người và các dòng đại diện cho loại mô học khác nhau (vú, phổi, tuyến tụy và tuyến tiền liệt). Các loại thảo mộc (bảng 1) đã được lựa chọn dựa trên chúng tôi nghiên cứu trước đây thể hiện mức độ hoạt động antiproliferative của họ đối với một bảng điều khiển của dòng tế bào ung thư vú (Campbell et al., 2002). Như thể hiện trong bảng 2, các chất chiết xuất từ dung dịch nước thô trưng bày tăng trưởng ức chế hoạt động chống lại một loạt các dòng tế bào ung thư. Các chất chiết xuất ban đầu đã được thử nghiệm cho sự tăng trưởng ức chế hoạt động lúc 1:10 pha loãng. Đầy đủ liều phản ứng đường cong sau đó đã thu được cho những chất chiết xuất từ đó emonstrated lớn hơn 50% sự ức chế trong màn hình đầu tiên. IC50 giá trị được xác định từ những đường cong phản ứng liều.So sánh sự nhạy cảm của dòng tế bào khác nhau để các chất chiết xuất từ, các tế bào tuyến (LLC, Panc02 và MCNeuA) được ghi nhận là nhạy cảm hơn so với các dòng tế bào của con người (A549, Panc-1, LNCaP, PC-3 và MCF-7). Kiểm tra chỉ có dòng tế bào của con người, hai loại thảo mộc (G. sinensis và S. barbata) Hiển thị một số mức độ của đặc trưng cho các dòng tế bào ung thư vú (MCF-7). Giá trị IC50 cho G. sinensis ngày MCF-7 là 486 μg/mL. Ngược lại, IC50 giá trị đã không đạt được ngày khácdòng tế bào của con người. Tương tự, IC50, đáng S. barbata ngày MCF-7 là 818 μg/mL, trong khi các giá trị IC50 vào bệnh ung thư của con người khác cho di động đường đều > 1000 μg/mL. Mười một các chất chiết xuất từ thảo mộc dung dịch nước cũng đã được thử nghiệm đối với văn hóa của con người vú biểu mô tế bào bình thường(huMEC). Như thể hiện trong bảng 2, chín trong số các chất chiết xuất từ thất bại để đạt được một giá trị IC50 trên huMEC, chỉ ra rằng các loại thảo mộc là tương đối không hoạt động trên tế bào bình thường. Một trong các loại thảo mộc (A. argyi) chứng minh các hoạt động chống lại huMEC có một giá trị IC50 669 μg/ml được 2-7 lần lớn hơn các giá trị IC50 thu được với các dòng tế bào ung thư, một lần nữa cho thấy một sốđặc trưng cho các tế bào ung thư so với tế bào bình thường. Ngược lại, V. segetalis hoạt động trên huMEC bình thường, như nó đã trên một số dòng tế bào ung thư

Kết quả (Việt) 2:

Khảo nghiệm Antiproliferative. Các tế bào được cấy trong 96 giếng tấm phẳng đáy tại 5000-10 000 tế bào / giếng. Sự khác biệt về số lượng tế bào mạ điều chỉnh cho sự khác biệt về tốc độ tăng trưởng của các dòng tế bào khác nhau. Các tế bào được cho phép để tuân thủ các giếng qua đêm, sau đó các thảo dược
chiết xuất đã được thêm vào xấp ba giếng trong nối tiếp pha loãng gấp 3 lần. Nước được thêm vào các giếng kiểm soát ở độ pha loãng 1:10 trong môi trường. Những tấm được ủ ở 37 ° C, 5% CO2 trong 3 ngày, sau đó khảo nghiệm fro ức chế sự tăng trưởng bằng cách sử dụng một sulforhodamine B (SRB) khảo nghiệm (Skehan et al., 1990). Các tế bào được cố định bằng cách cho thêm lạnh 50% axit tricloaxetic đến nồng độ cuối cùng 10%. Sau một ủ trong 1 giờ ở nhiệt độ 4 ° C, các tế bào được rửa năm lần với nước cất. Các tế bào này sau đó được nhuộm bằng 0,4% SRB (Sigma) hòa tan trong 1% acid acetic trong 15-30 phút và sau đó rửa năm lần với 1% axit acetic để loại bỏ vết bẩn chưa cam kết.
Sau khi các tấm đã sấy khô không khí ở nhiệt độ phòng, các ràng buộc thuốc nhuộm được hòa tan với 10 mm cơ sở Tris và các tấm được phân tích trên một đầu đọc microplate (Molecular Devices) tại 595 nm. Sự ức chế sự tăng trưởng phần trăm được tính như sau: (ave OD giếng kiểm soát - giếng chiết xuất thảo dược OD ave..) / (Ave giếng kiểm soát OD).
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
thô Twelve chiết xuất thảo dược dung dịch nước đã được sàng lọc đối với một bảng điều khiển của con người và các dòng tế bào ung thư ở chuột đại diện cho các loại mô học khác nhau (vú, phổi, tuyến tụy và tuyến tiền liệt). Những loại thảo mộc (Bảng 1) được lựa chọn dựa trên các nghiên cứu trước đây của chúng tôi chứng minh hoạt động kháng sinh của họ chống lại một bảng điều khiển của các dòng tế bào ung thư vú (Campbell et al., 2002). Như thể hiện trong Bảng 2, các chất chiết xuất từ dung dịch nước thô trưng bày hoạt động ức chế sự tăng trưởng chống lại một loạt các chất chiết xuất lines.The tế bào ung thư ban đầu đã được thử nghiệm cho hoạt động ức chế sự tăng trưởng ở độ pha loãng 1:10. Đường cong đáp ứng đủ liều sau đó thu được đối với những chiết xuất emonstrated lớn hơn 50% ức chế trong các giá trị screen.IC50 ban đầu được xác định từ những đường cong liều phản ứng.
So sánh độ nhạy của các dòng tế bào khác nhau để các chất chiết xuất, các dòng tế bào chuột (LLC , Panc02 và MCNeuA) được ghi nhận là nhạy hơn các dòng tế bào của con người (A549, Panc-1, LNCaP, PC-3 và MCF-7). Chỉ kiểm tra các dòng tế bào của con người, hai loại thảo mộc (G. sinensis và S. Barbata) cho thấy một số mức độ chuyên biệt cho các dòng tế bào ung thư vú (MCF-7). Giá trị IC50 cho G. sinensis trên MCF-7 là 486 mg / mL. Ngược lại, giá trị IC50 đã không đạt được trên các
dòng tế bào của con người. Tương tự như vậy, giá trị IC50 cho S. Barbata trên MCF-7 là 818 mg / ml, trong khi giá trị IC50 trên dòng tế bào ung thư của người khác đều là> 1000 mg / mL. Mười một trong những loại thảo dược chiết xuất dung dịch nước cũng đã được thử nghiệm chống lại các tế bào nuôi cấy bình thường của con người vú biểu mô
(huMEC). Như thể hiện trong Bảng 2, chín trong số các chất chiết xuất thất bại trong việc đạt được một giá trị IC50 trên huMEC, chỉ ra rằng các loại thảo mộc khá thụ động trên các tế bào bình thường. Một trong những loại thảo mộc (A. argyi) đã chứng minh hoạt tính chống huMEC có một giá trị IC50 của 669 mg / mL mà là lớn hơn 2-7 lần so với giá trị IC50 thu được với các dòng tế bào ung thư, một lần nữa cho thấy một số
đặc trưng cho các tế bào ung thư so với các tế bào bình thường. Ngược lại, V. segetalis đã hoạt động tích cực trên huMEC bình thường như nó đã được trên một số dòng tế bào ung thư