A phytase expression plasmid contai

A phytase expression plasmid containing the DSM 7 phyC coding region together with its original ribosomal binding site was constructed based on the expression-shuttle vector pWLQ2 (Liebl et al., 1992), and the resulting plasmid pWLQ2::phyC was introduced into the lysine-overproducing C. glutamicum strain ATCC 21253. The production and localization of PhyC were analyzed in the ATCC 21253 strains carrying pWLQ2::phyC or pWLQ2 as a control (Fig. 1). PhyC expression in C. glutamicum was confirmed by the presence of a 46kDa protein band in the crude cell extract and an approximately 43kDa band in the culture supernatant of the strain carrying pWLQ2::phyC, which was absent in the control strain(Fig.1a).Thesizedifferenceofabout3kDabetweentheintracellular (PhyC) and the secreted (PhyC) proteins is in agreement with the predicted removal of an N-terminal 26 amino acid signal peptide during export. An additional less intensive and slightly smaller band observed in the extracellular protein fraction of the phyC-bearing strain could be the result of alternative processing of the PhyC protein. Significant cell-bound and extracellular phytase activities were measured in the cells harboring the pWLQ2::phyC plasmid (0.586 and 0.134U, respectively; Fig. 1b) compared to total lack of activity in the control cells (0.002 and 0.003U, respectively; Fig. 1b). This confirmed the effective expression and excretion of active PhyC enzyme from the phyC transformed cells.

Kết quả (Việt) 1:

Một plasmid biểu hiện phytase có phyC DSM 7 mã vùng cùng với trang web ribosome ràng buộc ban đầu của nó được xây dựng dựa trên biểu hiện-đưa đón vector pWLQ2 (Liebl et al., 1992), và kết quả plasmid pWLQ2::phyC đã được giới thiệu vào lysine-overproducing glutamicum C. căng ATCC 21253. Sản xuất và nội địa hóa của PhyC được phân tích trong các chủng ATCC 21253 chuyên chở pWLQ2::phyC hoặc pWLQ2 một điều khiển (hình 1). PhyC biểu hiện trong C. glutamicum đã được xác nhận bởi sự hiện diện của một ban nhạc protein 46kDa trong các chiết xuất dầu thô di động và một khoảng 43kDa band tại supernatant văn hóa của sự căng thẳng mang pWLQ2::phyC, mà không có mặt trong strain(Fig.1a) điều khiển. Thesizedifferenceofabout3kDabetweentheintracellular (PhyC) và các protein (PhyC) tiết ra là trong thỏa thuận với dự đoán bỏ một N-ga 26 acid amin tín hiệu peptide trong xuất khẩu. Một bổ sung ít chuyên sâu và hơi nhỏ hơn ban nhạc quan sát thấy ở phần ngoại bào protein của sự căng thẳng phyC-vòng bi có thể là kết quả của các xử lý thay thế của PhyC protein. Hoạt động đáng kể di động-ràng buộc và ngoại bào phytase được đo bằng các tế bào chứa chấp pWLQ2::phyC plasmid (0.586 và 0.134U, tương ứng; Hình 1b) so với tất cả các thiếu hoạt động trong các tế bào kiểm soát (0,002 và 0.003U, tương ứng; Hình 1b). Điều này xác nhận biểu hiện hiệu quả và bài tiết hoạt động PhyC enzyme từ các tế bào phyC chuyển.

Kết quả (Việt) 2:

Một plasmid biểu hiện phytase có chứa các khu vực DSM 7 phyC mã hóa cùng với ribosome gốc ràng buộc site của nó được xây dựng dựa trên các vector biểu hiện đưa đón pWLQ2 (Liebl et al., 1992), và kết quả là plasmid pWLQ2 :: phyC đã được giới thiệu vào lysine -overproducing C. căng glutamicum ATCC 21253. Việc sản xuất và nội địa hóa của PhyC được phân tích trong ATCC 21.253 chủng mang pWLQ2 :: phyC hoặc pWLQ2 như một điều khiển (Fig. 1). Biểu PhyC trong C. glutamicum đã được khẳng định bởi sự hiện diện của một ban nhạc protein 46kDa trong chiết xuất tế bào thô và một ban nhạc khoảng 43kDa trong gạn văn hóa của các chủng mang pWLQ2 :: phyC, mà đã vắng mặt trong các dòng điều khiển (Fig.1a ) .Thesizedifferenceofabout3kDabetweentheintracellular (PhyC) và (PhyC) protein được tiết ra là trong thỏa thuận với việc loại bỏ dự đoán của một N-terminal 26 amino axit tín hiệu peptide trong xuất khẩu. Thêm ít chuyên sâu và hơi nhỏ hơn một ban nhạc quan sát thấy trong các phần protein ngoại bào của chủng phyC chịu có thể là kết quả của chế biến thay thế của các protein PhyC. Hoạt động tế bào-ràng buộc và phytase ngoại bào quan trọng đã được đo trong các tế bào chứa chấp các pWLQ2 :: phyC plasmid (0,586 và 0.134U, tương ứng; hình 1b.) So với tổng số thiếu hoạt động trong các tế bào kiểm soát (0,002 và 0.003U, tương ứng; vả. 1b). Điều này khẳng định sự biểu hiện hiệu quả và bài tiết enzyme PhyC tích cực từ các tế bào phyC chuyển.