Phytochemicals Industrial Crops and

Phytochemicals

Industrial
Crops and Products 67 (2015) 192–200
Contents lists available at ScienceDirect
Industrial Crops and Products
jo u r n al homep age: www.elsevier.com/locate/indcrop
and
antioxidant capacity of Xao tam phan
(Paramignya

trimera)
root as affected by various solvents and
extraction
methods
Van Tang Nguyen
a,b,∗
, Michael C. Bowyer
a
, Quan Van Vuong
a
, Ian A.Van Altena
,
Christopher

a
b
J.

Scarlett
a,∗∗
School of Environmental and Life Sciences, Faculty of Science and Information Technology, University of Newcastle, Ourimbah, NSW 2258, Australia
Department of Food Technology, Faculty of Food Technology, Nha Trang University, No. 2 Nguyen Dinh Chieu, Nha Trang, Khanh Hoa 8458, Viet Nam
a r t i c l e i n f o
Article history:
Received
22 November 2014
Received
in

revised

form
22 January 2015
Accepted
26 January 2015
Keywords:
Xao
tam phan
Paramignya
trimera
Phytochemicals
Antioxidant
Solvent
Extraction
method
1. Introduction
a b s t r a c t
a
Xao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) is a Vietnamese traditionally medicinal plant used
in
the treatment of numerous cancers. The preparation of Xao tam phan extracts including solvent type
and
extraction method have significant effects on extraction efficiency, phytochemical profile and biological


activity. This study aimed to investigate the effects of five various solvents (water, acetonitrile,
methanol,
ethyl acetate and hexane) and three different extraction methods (conventional, ultrasoundassisted


and microwave-assisted) on phytochemical yield and antioxidant capacity of P. trimera root
from
Vietnam. The results indicate that methanol extracted the maximal yield of phytochemicals from
P.
trimera and exhibited the greatest antioxidant capacity, with eleven compounds were identified and
quantified.
Microwave-assisted extraction produced the maximal phytochemical yields (except for total
flavonoids)
and antioxidant capacity, when compared to conventional and ultrasound-assisted extractions.


These data reveal that the use of methanol and microwave-assisted extraction are recommended for
extraction
of biologically active phytochemicals from P. trimera root for application in the nutraceutical
and/or
pharmaceutical industries.
Xao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) has a synonym


of Atalantia trimera Oliv., which belongs to the Paramignya
genus
of Citrus family (Rutaceae) and is well known as a medicinal


plant in Thailand and Vietnam (Nguyen et al., 2013). Recent
studies
on the P. trimera have revealed hepatoprotective and cytotoxic


activity from a crude methanolic extract (Nguyen et al.,
2013
). Importantly, methanolic extract, n-hexane fraction and an
individual
compound isolated from P. trimera, named ostruthin
(6-(3,7-dimethyl-2,6-octadienyl)
7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2one)


demonstrated cytotoxic activity against five cancer cell lines
in
vitro, especially, the partitioned n-hexane fraction and ostruthin
∗
Corresponding
author. School of Environmental and Life Sciences, Faculty of Sci-
ence
and Information Technology, University of Newcastle, Brush Road, Ourimbah,
NSW
2258, Australia. Tel.: [phone]; fax: [phone].
∗∗
Corresponding
author. Tel.: [phone]; fax: [phone].
E-mail
addresses: [e-mail] (V.T. Nguyen),
[e-mail] (C.J. Scarlett).
http://dx.doi.org/10.1016/j.indcrop.2015.01.051
0926-6690/©
2015 Elsevier B.V. All rights reserved.
©

2015
Elsevier B.V. All rights reserved.
from the methanolic extract displayed activity against hepatocellular


carcinoma
(Hep-G2) and human epithelial cervical carcinoma
(Hela)
cell lines with IC
values of 39.61 and 5.36 g/ml, respectively.


Pham et al. (2013) also isolated and quantitatively analysed
ostruthin
to be a major compound in the P. trimera roots and stems,
while
Li et al. (2012) showed that ostruthin displayed potent activity


against pancreatic cancer cell lines. These studies indicate that P.
trimera
contains key biologically active phytochemicals, however
it
is imperative to optimize extraction conditions to maximize the
50
yield
of phytochemicals extracted for potential medicinal exploita-
tion.
Solvent
type and extraction method directly affects the extrac-
tion
efficiency and relates to production costs such as extraction
time,
solvent volume, energy costs as well as the effect on humans
and
the environment (Dai and Mumper, 2010; Azmir et al., 2013;
Kalia
et al., 2008). In recent years, advanced extraction techniques
have
been developed and applied to optimize the extraction of
phenolics
from plant materials. For example, ultrasound-assisted
extraction
(UAE), microwave-assisted extraction (MAE) and techniques


using compressed fluids such as subcritical water extraction
(SWE),
supercritical fluid extraction (SFE), pressurized fluid
V.T. Nguyen et al. / Industrial Crops and Products 67 (2015) 192–200 193
extraction (PFE) or accelerated solvent extraction (ASE) (Tiwari
et
al., 2011; Doughari, 2012) have proven to significantly reduce
extraction
time as well as gaining improved extraction efficiency.
For
this reason, careful consideration for the selection of solvent
type
and extraction method is a crucial step in the preparation of
extracts
from plant materials.
Very
few studies have reported the physicochemical properties


and biological activity of P. trimera extracts and none have
focused
on selection of solvent and extraction method. With this
in
mind, our study investigated the effects of various solvent types
and
extraction methods on the phytochemical yield and antioxidant


capacity of P. trimera root extracts. Our data reveal the optimal
conditions
for solvent type and extraction method for the preparation


of crude P. trimera root extracts for potential application in the
nutraceutical
and/or pharmaceutical industries.
2. Materials and methods
2.1. Plant materials
P. trimera root was collected from Ninh Hoa district, Khanh Hoa
province,
Vietnam in January 2014 and identified by the National
Institute
of Medicinal Materials, Ministry of Health, Vietnam. After
collection,
the fresh samples were rinsed in deionized water to
remove
sand and soil, drained and left to dry under the sun
(34.5
± 1
◦
C) to constant weight, and then packed in vacuum sealed
polyamide
(PA) bags and stored at −18
◦
C until used. The resid-
ual
moisture of the dried samples was determined according to the
AOAC
official methods of analysis (AOAC, 1998) using a hot-air oven
(Anax
Pty Ltd., NSW, Australia) at 120
2.2. Analytical chemicals
◦
C for 5 h.
All chemicals used were of analytical grade. 2,2
-azino-bis3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic


acid (ABTS), 1,1-diphenyl2-picryl-hydrazil


(DPPH), Folin-Ciocalteu, trolox, neocuproine,
2,4,6-tripyridyl-s-triazine
(TPTZ), iron (III) chloride and standard
compounds
including gallic acid, p-coumaric acid, caffeic acid,
5,7-dimethoxycoumarin,
quercetin, kaempferol, rutin, syringic
acid,
chlorogenic acid, escin, (+)-catechin, (−)-epicatechin, (±)naringenin,


myricetin, luteolin, apigenin, (−)-epigallocatechin
gallate,

-sitosterol--D-glucoside,
gemcitabine, -sitosterol, and
ascorbic
acid were purchased from Sigma–Aldrich Pty Ltd. (NSW,
Australia).
Vanillin, potassium persulfate, methanol and ethanol
were
obtained from Merck (Darmstadt, Germany). Copper (II)
chloride
was purchased from Standard Laboratories (Victoria,
Australia).
Sodium acetate trihydrate was obtained from Government


Stores Department (Australia). Ammonium acetate was
purchased
from BDH Chemicals (Victoria, Australia). Aluminium
chloride
(anhydrous) was obtained from Acros (New Jersey,
USA).
Sodium hydroxide was purchased from Ajax chemicals
(NSW,
Australia). Sodium carbonate anhydrous was purchased
from
Chem-supply (Gillman, South Australia). Sulfuric acid and
hydrochloric
acid were purchased from Ajax Finechemicals (NSW,
Australia),
and acetic acid was obtained from BDH Laboratory Supplies


(Poole, England).
2.3.

Preparation
of extracts
To

select
the best solvent for further study, five various solvents
were
evaluated including water (WT), acetonitrile (AT), methanol
(MT),

ethyl
acetate (EA) and hexane (HX). Then, three different
extraction
methods were applied with selected solvent, i.e. conventional


extraction (CE), ultrasound-assisted extraction (UAE) and
microwave-assisted
extraction (MAE). The extracts of P. trimera
root
were prepared according to the method described by Nguyen

et al. (2011) with some modifications. The extraction procedures
were
as follows:
For
effect of solvents: 0.2 g of dried sample was extracted with
20
mL of various solvents applying UAE using an ultrasonic cleaner
Soniclean
1000HD (Soniclean Pty Ltd., South Australia) at a power
of
150 W and 45
C for 60 min.
For
effect of extraction methods: 0.2 g of dried sample was
◦
extracted
with 20 mL of selected solvent, the extraction process
included
two stages: the first stage was set at room temperature
(20
± 1
C) for 20 min, and the second stage was extracted using the
various
methods for 60 min. CE was carried out using a waterbath
(Buchi,
Flawil, Switzerland) at 45
◦
C, UAE was performed using an
ultrasonic
cleaner Soniclean 1000HD at a power of 150 W and 45
◦
C,
and
MAE was carried out using a microwave oven (Sharp Carousel,
Sharp
Corporation, Thailand) at a power of 360 W, with the initial


irradiation time of 15 s, then 5 s for each further 5 min (total
irradiation
time was applied to be 70 s).
After
extraction,

the
extracts were rapidly cooled to room temperature


by ice water and then filtered through qualitative no. 1
filter

papers
(Bacto Laboratories Pty Ltd., NSW, Australia) to obtain
extracts
for further analysis. To determine the extraction yield, 2 mL
of

extract
was dried in a hot-air oven (Anax Pty Ltd., NSW, Australia)
at
100
C for 4 h to a constant weigh

Kết quả (Việt) 1:

Chất phytochemical Công nghiệp Cây trồng và các sản phẩm 67 (2015) 192-200Nội dung danh sách có sẵn tại ScienceDirectCác cây công nghiệp và sản phẩmJo mày n al homep tuổi: www.elsevier.com/ xác định vị trí/indcropvà chất chống oxy hoá năng lực của Xao tam phan(Paramignya trimera) gốc khi bị ảnh hưởng bởi các dung môi vàkhai thác phương phápVan đường Nguyễna, b, ∗, Michael C. Bowyermột, Quận Van Vuongmột, Ian A.Van Altena,Christopher mộtbJ. Scarletta, ∗∗Các trường học của môi trường và khoa học đời sống, khoa khoa học và công nghệ thông tin, đại học Newcastle, Penrith, NSW 2258, ÚcBộ công nghệ, khoa học công nghệ thực phẩm, trường đại học Nha Trang, số 2 Nguyễn Đình Chiểu, Nha Trang, tỉnh Khánh Hòa 8458, Việt Namr t tôi c l e tôi n f oBài viết lịch sử:Nhận được 22 tháng 11 năm 2014Nhận được ở Sửa đổi hình thức 22 tháng 1 năm 2015Chấp nhận 26 tháng 1 năm 2015Từ khoá:Xao Tam phanParamignya trimeraChất phytochemicalChất chống oxy hoáDung môiKhai thác phương pháp1. giới thiệumột b s t r một t cmộtXao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) là một nhà máy dược liệu truyền thống Việt Nam sử dụngở điều trị nhiều bệnh ung thư. Việc chuẩn bị các chất chiết xuất từ Xao tam phan bao gồm cả loại dung môivà phương pháp khai thác có tác dụng significant khai thác efficiency, phytochemical profile và sinh họchoạt động. Nghiên cứu này nhằm mục đích để điều tra ảnh hưởng của five dung môi khác nhau (nước, acetonitrile,methanol, axetat etyl và hexan) và ba phương pháp khác nhau khai thác (thông thường, ultrasoundassistedvà với sự hỗ trợ lò vi sóng) trên phytochemical công suất sản lượng và chất chống oxy hoá của P. trimera gốctừ Việt Nam. Kết quả chỉ ra rằng hỗn hợp methanol chiết xuất sản lượng tối đa của các chất phytochemical từP. trimera và trưng bày khả năng chống oxi hóa lớn nhất, với mười một hợp chất đã là identified vàquantified. Lò vi sóng hỗ trợ khai thác sản xuất sản lượng phytochemical tối đa (ngoại trừ tổng sốflavonoids) và khả năng chống oxi hóa, khi so sánh với thông thường và hỗ trợ thiết bị siêu âm nhổ.Những dữ liệu này cho thấy rằng việc sử dụng methanol và lò vi sóng hỗ trợ khai thác được đề nghị chokhai thác của hoạt tính sinh học chất phytochemical từ P. trimera gốc cho các ứng dụng trong nutraceuticalvà/hoặc ngành công nghiệp dược phẩm.Xao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) có một từ đồng nghĩacủa Atalantia trimera Oliv., mà thuộc về Paramignyachi của cam chanh (Rutaceae) và cũng được biết đến như là một dượcnhà máy ở Thái Lan và Việt Nam (Nguyễn và ctv., 2013). Tạinghiên cứu trên các P. trimera đã tiết lộ hepatoprotective và độc tế bàoCác hoạt động từ một chiết xuất methanolic thô (Nguyễn et al.,2013). Quan trọng, methanolic trích, n-hexane phần nhỏ và mộtcá nhân hợp chất bị cô lập từ P. trimera, được đặt tên theo ostruthin(6-(3,7-dimethyl-2,6-octadienyl) 7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2one)chứng minh các hoạt động độc tế bào chống lại five ung thư tế bào dòngở ống nghiệm, đặc biệt là, partitioned n-hexane phần nhỏ và ostruthin∗Tương ứng tác giả. Các trường học của môi trường và khoa học đời sống, khoa học khoa học-ence và thông tin công nghệ, đại học Newcastle, Bàn chải Road, Penrith,MS4 2258, Úc. Điện thoại: + 61 434238842; Fax: + 61 243484145.∗∗Tương ứng tác giả. Điện thoại: + 61 243484680; Fax: + 61 243484145.Thư điện tử địa chỉ: [e-mail] (V.T. Nguyễn),[e-mail] (CJ Scarlett).http://DX.Doi.org/10.1016/j.indcrop.2015.01.0510926-6690 / © 2015 Elsevier B.V Tất cả các quyền.© 2015 Elsevier B.V Tất cả các quyền.từ các chiết xuất methanolic Hiển thị các hoạt động chống lại các tế bào ganung thư biểu mô (Hep G2) và con người ung thư biểu mô cổ tử cung(Hela) di động dây chuyền bằnggiá trị của 39.61 và 5.36 g/ml, tương ứng.Phạm et al. (2013) cũng bị cô lập nhất và theo phân tíchostruthin là một hợp chất chính trong P. trimera rễ và thân cây,trong khi Li et al. (2012) cho thấy rằng ostruthin Hiển thị mạnh hoạt độngĐối với dòng tế bào ung thư tuyến tụy. Các nghiên cứu chỉ ra rằng P.trimera chứa chất phytochemical hoạt tính sinh học quan trọng, Tuy nhiênnó là bắt buộc để tối ưu hóa khai thác điều kiện để tối đa hóa các50năng suất của phytochemicals chiết xuất cho tiềm năng y học exploita-tion.Dung môi kiểu và khai thác phương pháp trực tiếp ảnh hưởng đến extrac-tion efficiency và liên quan đến chi phí sản xuất như khai thácthời gian, khối lượng dung môi, chi phí năng lượng cũng như hiệu quả về con ngườivà môi trường (Dai và Mumper, 2010; Azmir et al., 2013;Kalia et al., 2008). Những năm gần đây, nâng cao kỹ thuật khai tháccó được phát triển và áp dụng để tối ưu hóa việc khai thácphenolics từ nguyên liệu thực vật. Ví dụ, siêu âm, hỗ trợkhai thác (UAE), khai thác hỗ trợ lò vi sóng (MAE) và kỹ thuậtbằng cách sử dụng nén fluids chẳng hạn như khai thác nước subcritical(SWE), siêu tới hạn fluid khai thác (SFE), áp lực fluidV.T. Nguyen et al. / công nghiệp cây trồng và các sản phẩm 67 (2015) 192-200 193khai thác (PFE) hoặc tăng tốc chiết dung môi (ASE) (Tiwariet và những người khác, năm 2011; Doughari, 2012) đã chứng minh để significantly giảmkhai thác thời gian cũng như đạt được cải thiện khai thác efficiency.Cho lý do này, xem xét cẩn thận để lựa chọn của dung môiloại phương pháp khai thác là một bước rất quan trọng trong việc chuẩn bịchất chiết xuất từ từ nguyên liệu thực vật.Rất vài nghiên cứu đã báo cáo các thuộc tính hóa lývà các hoạt động sinh học của chất chiết xuất từ P. trimera và không cótập trung vào lựa chọn của phương pháp dung môi và khai thác. Với điều nàyở nhớ, nghiên cứu của chúng tôi điều tra tác động của nhiều loại dung môivà phương pháp khai thác trên phytochemical năng suất và chất chống oxy hoánăng lực của các chất chiết xuất từ gốc P. trimera. Dữ liệu của chúng tôi tiết lộ các tối ưuđiều kiện dung môi loại và khai thác phương pháp cho việc chuẩn bịcủa thô P. trimera gốc chất chiết xuất từ cho các ứng dụng tiềm năng trong cácnutraceutical và/hoặc ngành công nghiệp dược phẩm.2. tài liệu và phương pháp2.1. nhà máy vật liệuP. trimera gốc được thu thập từ huyện Ninh Hòa, Khánh Hòatỉnh, Việt Nam vào tháng 1 năm 2014 và identified bởi quốc giaViện y học vật liệu, bộ y tế, Việt Nam. Sau khibộ sưu tập, Các mẫu tươi đã được rửa trong nước deionized đểloại bỏ cát và đất, để ráo nước và trái để khô dưới ánh mặt trời(34,5 ± 1◦C) để trọng lượng liên tục, và sau đó đóng gói trong niêm phong chân khôngpolyamide (PA) túi và được lưu trữ tại −18◦C cho đến khi được sử dụng. Resid-ual độ ẩm của mẫu khô đã được xác định theo cácAOAC lần phương pháp phân tích (AOAC, 1998) bằng cách sử dụng một lò khí(Anax Pty Ltd, NSW, Úc) tại 1202.2. phân tích hóa chất◦C cho 5 h.Tất cả các hóa chất sử dụng là phân tích lớp. 2,2-azino-bis3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonicaxit (ABTS), 1,1-diphenyl2-picryl-hydrazil(DPPH), Folin-Ciocalteu, trolox, neocuproine,2,4,6-tripyridyl-s-triazine (TPTZ), sắt (III) clorua và tiêu chuẩnhợp chất bao gồm cả gallic acid, p-coumaric axit, axit caffeic,5,7-dimethoxycoumarin, Quercetin, kaempferol, rutin, syringicaxit, chlorogenic axit, escin, (+)-catechin, (−)-epicatechin, naringin (±),myricetin, luteolin, apigenin, (−)-epigallocatechingallate, -D-- sitosterol - glucoside, gemcitabine,-sitosterol, vàascorbic axit đã được mua từ Sigma-Aldrich Pty Ltd (NSW,Úc). Vanillin, kali persulfate, methanol và ethanolđược thu được từ Merck (Darmstadt, Đức). Đồng (II)clorua đã được mua từ tiêu chuẩn phòng thí nghiệm (Victoria,Úc). Natri axetat trihydrat nhận được từ chính phủMua sắm các bộ phận (Úc). Amoni axetatMua từ BDH các hóa chất (Victoria, Úc). Nhômclorua (Khan) thu được từ Acros (New Jersey,HOA KỲ). Natri hydroxit được mua từ Ajax hóa chất(NSW, Úc). Natri cacbonat Khan đã được muatừ Chem-cung cấp (Gillman, Nam Úc). Axít sulfuric vàclohiđric axit đã được mua từ Ajax Finechemicals (NSW,Úc), và axit axetic được thu được từ các nguồn cung cấp phòng thí nghiệm BDH(Poole, Anh).2.3. Chuẩn bị của chiết xuấtĐể chọn dung môi tốt nhất cho tiếp tục nghiên cứu, five các dung môiđược đánh giá bao gồm cả nước (WT), acetonitrile (AT), methanol(MT), etyl axetat (EA) và hexan (HX). Sau đó, có ba khác nhaukhai thác phương pháp được áp dụng với dung môi đã chọn, tức là thông thườngkhai thác (CE), siêu âm hỗ trợ khai thác (UAE) vàhỗ trợ lò vi sóng khai thác (MAE). Các chất chiết xuất của P. trimeragốc đã được chuẩn bị theo phương pháp mô tả bởi Nguyenet al. (2011) với một số modifications. Các thủ tục khai thácđược như sau:Cho tác dụng của dung môi: cách 0.2 g khô mẫu được chiết xuất với20 mL dung môi khác nhau áp dụng bằng cách sử dụng một rửa siêu âm dùng UAESoniclean 1000HD (Soniclean Pty Ltd, South Australia) ở một quyền lựccủa 150 W và 45C trong 60 phút.Cho hiệu quả của phương pháp khai thác: cách 0.2 g khô mẫu là◦chiết xuất với 20 mL dung môi đã chọn, quá trình khai thácbao gồm hai giai đoạn: giai đoạn chính đã được thiết lập ở nhiệt độ phòng(20 ± 1C) cho 20 phút, và thứ hai giai đoạn được chiết xuất bằng cách sử dụng cáckhác nhau phương pháp cho 60 min. CE được thực hiện bằng cách sử dụng một waterbath(Buchi, Flawil, Thuỵ Sỹ) tại 45◦C, UAE đã được thực hiện bằng cách sử dụng mộtsiêu âm sạch hơn Soniclean 1000HD tại một sức mạnh của 150 W và 45◦C,và MAE được tiến hành bằng cách sử dụng một lò nướng lò vi sóng (sắc nét Carousel,Sắc nét Công ty cổ phần, Thái Lan) tại một sức mạnh của 360 W, với ban đầu của bạnthời gian chiếu xạ 15 s, sau đó 5 s cho mỗi thêm 5 phút (tổng cộngbức xạ thời gian đã được áp dụng để là 70 s).Sau khi khai thác, Các chất chiết xuất từ nhanh chóng làm mát bằng đến nhiệt độ phòngbởi nước đá và sau đó filtered thông qua chất lượng số 1filter giấy tờ (Bacto phòng thí nghiệm Pty Ltd, NSW, Úc) để có đượcchất chiết xuất từ để tiếp tục phân tích. Để xác định sản lượng khai thác, 2 mLcủa giải nén khô trong một lò khí (Anax Pty Ltd, NSW, Úc)tại 100C cho 4 h đến một hằng số cân nhắc

Kết quả (Việt) 2:

Phytochemicals nghiệp Cây trồng và các sản phẩm 67 (2015) 192-200 Nội dung danh sách có sẵn tại ScienceDirect cây công nghiệp và các sản phẩm jo urn al homep tuổi: www.elsevier.com/locate/indcrop và khả năng chống oxy hóa của Xao tam phan (Paramignya trimera) gốc là bị ảnh hưởng bởi dung môi khác nhau và khai thác phương pháp Van Tang Nguyen a, b, * , Michael C. Bowyer một , Quan Van Vuong một , Ian A.Van Altena , Christopher một b J. Scarlett một, ** Trường Khoa học Môi trường và cuộc sống, khoa Khoa học và Công nghệ Thông tin, Đại học Newcastle, Ourimbah, NSW 2258, Australia Cục Công nghệ Thực phẩm, Khoa Công nghệ Thực phẩm, Đại học Nha Trang, số 2 Nguyễn Đình Chiểu, Nha Trang, Khánh Hòa 8458, Việt Nam một rticleinfo lịch sử Điều : Nhận ngày 22 tháng 11 năm 2014 đã nhận trong sửa đổi hình thức 22 tháng một năm 2015 chấp nhận ngày 26 tháng một năm 2015 Từ khóa: Xao tam phan Paramignya trimera Phytochemicals Antioxidant Solvent Extraction phương pháp 1. Giới thiệu một bstract một Xao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) là một nhà máy truyền thống Việt thuốc dùng trong điều trị nhiều loại ung thư. Sự chuẩn bị của các chất chiết xuất Xao tam phan bao gồm dung môi loại và phương pháp khai thác có hiệu ứng fi không thể trọng yếu trên ef chiết fi ciency, phytochemical pro fi le và sinh học hoạt động. Nghiên cứu này nhằm tìm hiểu ảnh hưởng của fi ve dung môi khác nhau (nước, acetonitrile, methanol, ethyl acetate và hexane) và ba phương pháp chiết xuất khác nhau (thông thường, ultrasoundassisted và lò vi sóng trợ giúp của) về sản lượng phytochemical và năng chống oxy hóa của P. trimera gốc từ Việt Nam . Kết quả chỉ ra rằng methanol chiết xuất năng suất tối đa của chất phytochemical từ P. trimera và trưng bày các khả năng chống oxy hóa cao nhất, với mười một hợp chất là identi ed fi và quanti fi ed. khai thác lò vi sóng hỗ trợ sản xuất các sản lượng tối đa phytochemical (trừ tổng avonoids fl) và khả năng chống oxy hóa, khi so với nhổ răng thông thường và siêu âm hỗ trợ. Những dữ liệu này cho thấy rằng việc sử dụng methanol và khai thác lò vi sóng được hỗ trợ được đề nghị cho khai thác các phytochemicals hoạt tính sinh học từ P. trimera gốc cho ứng dụng trong dinh dưỡng và / hoặc các ngành công nghiệp dược phẩm. Xao tam phan ( Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) có một từ đồng nghĩa của Atalantia trimera Oliv., thuộc các Paramignya chi Citrus của gia đình (Rutaceae) và cũng được biết đến như một dược liệu nhà máy ở Thái Lan và Việt Nam (Nguyen et al., 2013). Gần đây các nghiên cứu trên P. trimera đã tiết lộ hepatoprotective và độc tế bào hoạt động từ một methanol thô (Nguyen et al,. 2013 ). Quan trọng hơn, methanol, phần n-hexane và một cá nhân hợp chất cô lập từ P. trimera, ostruthin tên (6- (3,7-dimethyl-2,6-octadienyl) 7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2one) chứng minh Hoạt động gây độc tế bào chống lại fi ve dòng tế bào ung thư trong ống nghiệm, đặc biệt là, các phân vùng n-hexane và ostruthin * Tương ứng với tác giả. Trường môi trường và khoa học đời sống, Khoa Khoa Khoa học khoa Công nghệ Thông tin, Đại học Newcastle, Brush Road, Ourimbah, NSW 2258, Australia. Tel .: [phone]; fax: [phone]. ** Tương ứng với tác giả. Tel .: [phone]; fax: [phone]. E-mail địa chỉ: [e-mail] (VT Nguyễn), [e-mail] (CJ Scarlett). http://dx.doi.org/10.1016 /j.indcrop.2015.01.051 0926-6690 / © 2015 Elsevier BV Tất cả quyền được bảo lưu. © 2015 Elsevier BV Tất cả quyền được bảo lưu. từ chiết xuất hoạt động hiển thị methanol chống lại tế bào gan ung thư biểu mô (Hep-G2) và ung thư cổ tử cung biểu mô của con người (Hela) dòng tế bào với IC giá trị 39,61 và 5,36? g / ml, tương ứng. Pham et al. (2013) cũng được phân lập và định lượng phân tích ostruthin là một hợp chất chính trong rễ trimera P. và thân cây, trong khi Li et al. (2012) cho thấy rằng ostruthin hiển thị hoạt động mạnh so với các dòng tế bào ung thư tuyến tụy. Những nghiên cứu này chỉ ra rằng P. trimera chứa phytochemicals hoạt tính sinh học quan trọng, tuy nhiên nó là bắt buộc để tối ưu hóa các điều kiện khai thác tối đa hóa 50 năng suất của chất phytochemical trích cho tiềm năng exploita- thuốc tion. Solvent loại và phương pháp chiết xuất trực tiếp ảnh hưởng đến extrac- sự ef fi ciency và liên quan chi phí sản xuất như: khai thác thời gian, khối lượng dung môi, chi phí năng lượng cũng như các tác động đối với con người và môi trường (Đại và Mumper, 2010; Azmir et al 2013,;. Kalia et al, 2008.). Trong những năm gần đây, kỹ thuật chiết xuất tiên tiến đã được phát triển và áp dụng để tối ưu hóa việc khai thác các phenolics từ nguyên liệu thực vật. Ví dụ, siêu âm hỗ trợ khai thác (UAE), khai thác lò vi sóng hỗ trợ (MAE) và kỹ thuật sử dụng nén fl uids như: khai thác nước dưới tới hạn (SWE), siêu fl uid khai thác (SFE), áp lực fl uid VT Nguyen et al. / Cây công nghiệp và các sản phẩm 67 (2015) 192-200 193 khai thác (PFE) hoặc tăng tốc chiết dung môi (ASE) (Tiwari et al, 2011;. Doughari, 2012) đã chứng minh là đáng trong yếu giảm khai thác thời gian cũng như có được cải thiện chiết ef fi ciency . Đối với lý do này, xem xét cẩn thận để lựa chọn các dung môi loại và phương pháp khai thác là một bước quan trọng trong việc chuẩn bị của các chất chiết xuất từ nguyên liệu thực vật. Rất ít nghiên cứu đã báo cáo các tính chất hóa lý và hoạt động sinh học của P. chiết xuất trimera và không ai đã tập trung vào lựa chọn các phương pháp dung môi và khai thác. Với điều này trong tâm trí, nghiên cứu của chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của các loại dung môi khác nhau và phương pháp khai thác trên năng suất và chất chống oxy hóa phytochemical suất P. chiết xuất rễ trimera. Dữ liệu của chúng tôi cho thấy sự tối ưu điều kiện cho loại dung môi và phương pháp khai thác cho việc chuẩn bị của các chất chiết xuất từ rễ thô P. trimera cho ứng dụng tiềm năng trong dinh dưỡng và / hoặc các ngành công nghiệp dược phẩm. 2. Vật liệu và phương pháp 2.1. Nguyên liệu thực vật P. trimera gốc được thu thập từ các huyện Ninh Hòa, Khánh Hòa tỉnh, Việt Nam vào tháng Giêng năm 2014 và identi fi ed Quốc Viện Dược liệu, Bộ Y tế, Việt Nam. Sau khi thu thập, các mẫu tươi được rửa lại bằng nước khử ion để loại bỏ cát và đất, để ráo nước và để khô dưới ánh mặt trời (34,5 ± 1 ◦ C) đến khối lượng không đổi, và sau đó đóng gói trong chân không niêm phong polyamide (PA) Túi và bảo quản ở -18 ◦ C cho đến khi sử dụng. Các resid- ual độ ẩm của mẫu khô được xác định theo AOAC của fi phương pháp tài phân tích (AOAC, 1998) sử dụng một lò nóng không khí (Anax Pty Ltd., NSW, Australia) tại 120 2.2. Hóa chất phân tích ◦ C trong 5 giờ. Tất cả các hóa chất được sử dụng là loại phân tích. 2,2 -azino-bis3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS), 1,1-diphenyl2-picryl-hydrazil (DPPH), Folin-Ciocalteu, trolox, neocuproine, 2,4,6-tripyridyl-s-triazin (TPTZ), sắt (III) clorua và tiêu chuẩn các hợp chất như axit galic, axit p-coumaric, axit caffeic, 5,7-dimethoxycoumarin, quercetin, kaempferol, rutin, syringic acid, axit chlorogenic, escin, (+) - catechin, (-) - epicatechin, (±) naringenin, myricetin, luteolin, apigenin, (-) - epigallocatechin gallate, -sitosterol? -? - D-glucoside, ? gemcitabine, -sitosterol, và ascorbic acid được mua từ Sigma-Aldrich Pty Ltd (NSW, Australia). Vanillin, potassium persulfate, methanol và ethanol được lấy từ Merck (Darmstadt, Đức). Đồng (II) clorua đã được mua từ Standard Laboratories (Victoria, Australia). Sodium acetate trihydrat được thu thập từ Chính phủ Sở Cửa hàng (Australia). Ammonium acetate được mua từ BDH Hóa chất (Victoria, Australia). Nhôm clorua (khan) thu được từ Acros (New Jersey, Mỹ). Sodium hydroxide được mua từ các hóa chất Ajax (NSW, Australia). Sodium carbonate khan đã được mua từ Chem-cung (Gillman, South Australia). Axit sulfuric và hydrochloric acid được mua từ Ajax Finechemicals (NSW, Australia), và acid acetic được thu thập từ BDH Phòng thí nghiệm Vật tư (Poole, Anh). 2.3. Chuẩn bị của chất chiết xuất Để chọn các dung môi tốt nhất để nghiên cứu thêm, fi ve dung môi khác nhau đã được đánh giá kể cả nước (WT), acetonitrile (AT), methanol (MT), ethyl acetate (EA) và hexane (HX). Sau đó, ba khác nhau khai thác các phương pháp đã được áp dụng với dung môi được lựa chọn, ví dụ thông thường khai thác (CE), chiết xuất siêu âm hỗ trợ (UAE) và lò vi sóng hỗ trợ khai thác (MAE). Các chất chiết xuất của P. trimera gốc đã được chuẩn bị theo phương pháp mô tả bởi Nguyễn ? et al. (2011) với một số cation Modi fi. Các thủ tục khai thác là như sau: Đối với ảnh hưởng của dung môi: 0,2 g mẫu khô được chiết xuất với 20 ml dung môi khác nhau áp dụng UAE sử dụng một trình dọn dẹp siêu âm Soniclean 1000HD (Soniclean Pty Ltd., South Australia) với mức công suất của 150 W và 45 C trong 60 phút. Đối với ảnh hưởng của các phương pháp khai thác: 0,2 g mẫu khô được ◦ chiết xuất với 20 ml dung môi, quá trình chiết xuất được lựa chọn bao gồm hai giai đoạn: giai đoạn đầu tiên kinh được đặt ở nhiệt độ phòng (20 ± 1 C) trong 20 phút , và giai đoạn thứ hai được trích xuất bằng nhiều phương pháp trong 60 phút. CE đã được thực hiện bằng cách sử dụng một waterbath (Buchi, Flawil, Thụy Sĩ) ở 45 ◦ C, UAE đã được thực hiện bằng cách sử dụng một siêu âm sạch hơn Soniclean 1000HD với mức công suất 150 W và 45 ◦ C, và MAE được thực hiện bằng cách sử dụng lò vi sóng (Sharp Carousel, Sharp Corporation, Thái Lan) với mức công suất 360 W, với ban đầu thời gian chiếu xạ của 15 s, sau đó 5 s cho mỗi thêm 5 phút (tổng bức xạ thời gian được áp dụng là 70 s). Sau khi khai thác, các chiết xuất đã nhanh chóng nguội đến nhiệt độ phòng bằng nước đá và sau đó fi ltered qua không tính. 1 fi lter giấy tờ (Bacto Laboratories Pty Ltd., NSW, Australia) để có được chiết xuất để phân tích thêm. Để xác định sản lượng khai thác, 2 mL của chiết xuất đã được sấy khô trong lò nóng không khí (Anax Pty Ltd., NSW, Australia) ở 100 C trong 4 giờ cho một hằng số cân nặng