Optimization of Cultural Conditions

Optimization of Cultural Conditions Various physical and chemical parameters such as fermentation period (24, 48, 72, 96, 120 and 144 h), initial moisture content (45, 50, 55, 60, 65 and 70%), effect of inorganic (0.25M) N (ammonium nitrate, ammonium chloride, ammonium phosphate, ammonium sulphate and sodium nitrate) and organic N (1% w/w) sources (beef extract, corn steep solids, malt extract, peptone, soybean meal, tryptone and yeast extract) and effects of temperature (20, 25, 30, 40 and 45°C) and pH (3, 4, 5, 6, 7, 8 and 9) were studied. The pH of moistening agent (distilled water) were adjusted as per requirement and used for preparing the solid media (pH, 3-9). Different concentrations of the best nitrogen source were incorporated into the medium. The effect of supplementation of additional carbon sources [soluble starch, maltose, glycerol, lactose and sucrose (1%, w/w)] was studied; the optimal concentration of
the best source for induction was also studied. All the experiments were conducted in triplicate and values were averaged.
Analytical Methods Enzyme Assay Alpha amylase activity was determined13. Reaction mixture contained: 1% soluble starch, 1.25; 0.1M acetate buffer (pH 5.0), 0.5; and appropriately diluted crude enzyme extract, 0.25 ml. After 10 min of incubation at 50°C, liberated reducing sugars (glucose equivalents) were estimated by 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method of Miller14. The colour developed was read at 510 nm using a Shimazdu UV-160A spectrophotometer. Glucose was used as the standard. Blank contained: 0.1M acetate buffer (pH 5.0), 0.75; and 1% starch solution, 1.25 ml. One unit (IU) of α-amylase is defined as the amount of enzyme releasing one µmol glucose equivalent per minute under the assay conditions and enzyme activity is expressed in terms of IU per gram dry fermented substrate (U/gds).
Biomass Estimation Fungal biomass estimation was done by determining N-acetyl glucosamine released by acid hydrolysis of chitin present in cell wall of the fungus. Glucosamine liberated from chitin by acid hydrolysis was mixed with acetyl acetone reagent (1 ml) and incubated in a boiling water bath for 20 min. After cooling, ethanol (6 ml) was added, followed by the addition of Ehrlich’s reagent (1 ml) and incubated at 65°C for 10 min. After cooling, optical density was taken at 535 nm against the reagent blank. Glucosamine (Sigma) was used as the standard15. Biomass is expressed in terms of milligram of N-acetyl glucosamine released per gram of dry fermented substrate (mg/gds).

Kết quả (Việt) 1:

Tối ưu hóa các điều kiện khác nhau văn hóa các tham số vật lý và hóa học như thời gian lên men (24, 48, 72, 96, 120 và 144 h), ban đầu hơi ẩm nội dung (45, 50, 55, 60, 65 và 70%), tác dụng của chất vô cơ (0.25M) N (nitrat amoni, clorua amoni, amoni photphat, sulfat amoni và natri nitrat) và hữu cơ N (1% w/w) nguồn (chiết xuất thịt bò bắp dốc chất rắn, chiết xuất mạch Nha chế phẩm peptone, Bữa ăn đậu nành, tryptone và men trích) và tác dụng của nhiệt độ (20, 25, 30, 40 và 45 ° C) và pH (3, 4, 5, 6, 7, 8 và 9) được nghiên cứu. Độ pH của barest đại lý (nước cất) được điều chỉnh theo yêu cầu và được sử dụng cho việc chuẩn bị các phương tiện truyền thông rắn (pH, 3-9). Các nồng độ khác nhau của các nguồn nitơ tốt nhất được tích hợp vào các phương tiện. Tác dụng của bổ sung thêm cacbon nguồn [tinh bột hòa tan, maltose, glycerol, lactose và sucrose (1%, w/w)] đã được nghiên cứu; nồng độ tối ưu củanguồn tốt nhất cho cảm ứng cũng được nghiên cứu. Tất cả các thí nghiệm được tiến hành trong triplicate và giá trị đã được trung bình.Phân tích phương pháp enzym khảo nghiệm Alpha amylase hoạt động là determined13. Phản ứng hỗn hợp chứa: 1% tinh bột hòa tan, 1,25; 0.1 bộ đệm acetat M (pH 5,0), 0,5; và chiết xuất dầu thô pha loãng một cách thích hợp enzym, 0,25 ml. Sau 10 phút ấp lúc 50° C, giải phóng giảm đường (glucose tương đương) được ước tính bằng phương pháp axit (DNS) 3,5-dinitrosalicylic Miller14. Màu sắc đã phát triển được đọc tại 510 nm bằng cách sử dụng một phối Shimazdu UV-160A. Glucose được sử dụng như là tiêu chuẩn. Trống bao gồm: bộ đệm acetat 0.1M (pH 5,0), 0,75; và giải pháp tinh bột 1%, 1,25 ml. Một trong những đơn vị (IU) α-amylase được định nghĩa là số lượng các men tiêu hóa phát hành một µmol glucose tương đương mỗi phút trong điều kiện khảo nghiệm và hoạt động của enzyme được thể hiện trong điều khoản của IU mỗi gam khô lên men bề mặt (U/gds).Nhiên liệu sinh học sinh khối nấm dự toán dự toán đã được thực hiện bằng cách xác định N-axetyl glucosamine phát hành bởi các thủy phân axít của chitin hiện diện trong tế bào của các loại nấm. Glucosamine giải phóng từ chitin thủy phân axít đã được trộn lẫn với axetyl acetone tinh khiết (1 ml) và ủ trong một bồn tắm nước sôi trong 20 phút. Sau khi làm mát, ethanol (6 ml) được thêm vào, tiếp theo bằng cách bổ sung tinh khiết của Ehrlich (1 ml) và ủ ở 65° C trong 10 phút. Sau khi làm mát, mật độ quang đã được đưa vào 535 nm chống lại cứng trống. Glucosamine (Sigma) được sử dụng như là standard15. Nhiên liệu sinh học được thể hiện trong điều khoản của miligam N-axetyl glucosamine phát hành mỗi gam chất nền lên men khô (mg/gds).

Kết quả (Việt) 2:

Tối ưu hóa các điều kiện văn hóa các thông số vật lý và hóa học khác nhau như thời gian lên men (24, 48, 72, 96, 120 và 144 h), nội dung ban đầu độ ẩm (45, 50, 55, 60, 65 và 70%), hiệu ứng vô cơ ( 0.25M) N (amoni nitrat, amoni clorua, amoni photphat, amoni sulfat và natri nitrat) và N hữu cơ (1% w / w) nguồn (chiết xuất thịt bò, bắp rắn dốc, chiết xuất mạch nha, peptone, bột đậu tương, tryptone và men trích) và tác động của nhiệt độ (20, 25, 30, 40 và 45 ° C) và độ pH (3, 4, 5, 6, 7, 8 và 9) đã được nghiên cứu. Độ pH của chất làm ẩm (nước cất) đã được điều chỉnh theo yêu cầu và được sử dụng để chuẩn bị các phương tiện truyền thông vững chắc (pH, 3-9). Nồng độ khác nhau của nguồn nitơ tốt nhất đã được tích hợp vào môi trường. Hiệu quả của việc bổ sung nguồn carbon bổ sung [hòa tan tinh bột, maltose, glycerol, lactose và sucrose (1%, w / w)] đã được nghiên cứu; nồng độ tối ưu của
các nguồn tốt nhất cho cảm ứng cũng đã được nghiên cứu. Tất cả các thí nghiệm được tiến hành trong ba lần và các giá trị được tính trung bình.
Hoạt động phương pháp phân tích Enzyme Khảo nghiệm Alpha amylase là determined13. Hỗn hợp phản ứng chứa: 1% tinh bột hòa tan, 1,25; Đệm 0,1M acetate (pH 5.0), 0.5; và thích hợp pha loãng dịch chiết enzyme thô, 0,25 ml. Sau 10 phút ủ ở 50 ° C, giải phóng đường khử (tương đương glucose) được ước lượng bằng axit 3,5-dinitrosalicylic phương pháp (DNS) của Miller14. Màu phát triển đã được đọc 510 nm sử dụng một máy quang phổ Shimazdu UV-160A. Glucose được sử dụng như là tiêu chuẩn. Trống chứa: 0,1M acetate đệm (pH 5.0), 0,75; và dung dịch 1% tinh bột, 1,25 ml. Một đơn vị (IU) của α-amylase được định nghĩa là lượng enzyme phát hành một đường tương đương mmol mỗi phút theo các điều kiện khảo nghiệm và enzyme hoạt động được thể hiện trong các điều khoản của IU mỗi gram chất lên men khô (U / GDS).
Biomass Ước nấm ước lượng sinh khối đã được thực hiện bằng cách xác định N-acetyl glucosamine phát hành bởi thủy phân axit của hiện chitin trong thành tế bào của nấm. Glucosamine giải phóng từ chitin bằng cách thủy phân axit được trộn với axetyl axeton thuốc thử (1 ml) và ủ trong một cốc nước sôi trong 20 phút. Sau khi làm mát, ethanol (6 ml) đã được bổ sung, tiếp theo là việc bổ sung các thuốc thử Ehrlich (1 ml) và ủ ở 65 ° C trong 10 phút. Sau khi làm mát, mật độ quang học đã được thực hiện tại 535 nm so với trống tinh khiết. Glucosamine (Sigma) đã được sử dụng như là standard15. Sinh khối được biểu diễn theo mg N-acetyl glucosamine phát hành mỗi gam chất lên men khô (mg / GDS).