MATERIALS AND METHODS Bacterial iso

MATERIALS AND METHODS Bacterial isolation. Bacterial isolates were obtained for the initial screening from pine chips (50% Pinus taeda L., 50% Pinus virginiana Mill.) collected from a paper mill in Ashland,Va.,andfromAbiessp.chipscollectedfromapapermill in Washington State. Bacterial isolates were obtained by plating wood segments on Difco-Bacto nutrient medium. Colonies were streaked onto nutrient medium and pure cultures were obtained. Bacterial isolates were grown on Sierra medium (15 g of agar, 10 g of peptone, 5 g of NaCl, 0.1 g of CaCl2 z H2O, 10 ml of Tween 80, and 990 ml of distilled deionized water) to screen for lipase activity (2). Five bacterial isolates were selected that exhibited lipase activity. The bacterial isolates were identified by the American Type Culture Collection (Rockville, Md.) and deposited with the Northern Regional Research Laboratory (NRRL) (Peoria, Ill.) as Pseudomonas fluorescens NRRL B21432, Xanthomonas campestris NRRL B21430, and Serratia marcescens NRRL B21429. Two additional isolates not deposited with the NRRL were identified as Pseudomonas sp. strains UM-18 and UM-74. Both of these bacteria are rod shaped, oxidase positive,gram negative,and motile and did not grow at 42°C.ColoniesofUM-18 and UM-74 grown on Bacto-Pseudomonas medium F were fluorescent and colonies grown on Bacto-Pseudomonas medium P using UV light were nonfluorescent. Treatment of chips. Fresh pine chips (50% Pinus taeda L., 50% Pinus virginiana Mill.)obtained from a paper millinAshland,Va.,werefrozenat218°Cuntil use. Bacteria used for treatment were grown in Difco-Bacto nutrient broth and incubatedat24°Conanorbitalshakerat30rpmfor58h.After58hbacteriaand nutrient broth were added to sterile centrifuge tubes (Nalgene high-speed polypropylnetubes;30by103mm,50-mlcapacity)and centrifugedat6,000rpm for 5 min. Nutrient broth was then decanted and sterile deionized water was added to bring the total amount of water and cells to 100 ml. Each of four polyethylene bags received 500 g (wet weight) of nonsterile chips with 100 ml of sterile deionized water containing P. fluorescens NRRL B21432 (1.5 3 1010 cells/ml),X.campestrisNRRLB21430(1.631010 cells/ml),S.marcescensNRRL B21429(3.3 3 1010 cells/ml),Pseudomonassp.strainUM-18(6.6 3 109 cells/ml), or Pseudomonas sp. strain UM-74 (1.4 3 1010 cells/ml). Cell densities were determined by viable cell counts. Also, 100 ml of sterile deionized water with no bacteria was added to each of four bags containing 500 g (wet weight) of nonsterile chips to serve as controls with natural growth of background microorganisms. Immediately after treatment, a sample of chips was removed and moisture content was determined. P. fluorescens NRRL B21432 was further studied to determine the specific resin and fatty acids removed from the wood. A single loblolly pine tree (Pinus taeda L.) was cut from the Solan Dixon Education Center in Andalusia, Ala.,chipped, and frozen at 218°C until use. Wood chips were added to polyethylene bags as previously described. Two replicates of 500 g (wet weight) of nonsterile chips were treated with 100 ml of sterile, deionized water containing P. fluorescens NRRL B21432 (3.0 3 109 cells/ml). One hundred milliliters of sterile deionized water with no bacteria was added to each of two polyethylene bags containing 500 g (wet weight) of nonsterile chips to serve as controls. Wood extractive assay. After 14 days of incubation, wood chips were air dried and ground in a Wiley mill to pass through a 40-mesh sieve. Wood extractives were determined from 2-g samples of treated and nontreated wood from each polyethylene bag by extraction with dichloromethane according to standard procedure T 204 om-88 of the Technical Association for the Pulp and Paper Industry, Atlanta, Ga. The amounts of resin and fatty acids present after treatment were determined using standard methods 242D01 and 081D07 (Econotech Services Ltd., Delta, British Columbia, Canada). Dichloromethane extracts from P. fluorescens-treated wood were saponified in ethanolic KOH, adjusted to pH 3, andextractedwithdiethylether.Theextractswereconcentratedandmethylated. To determine the “free” and “total” resin and fatty acids the extract was divided and a portion was analyzed without saponification to give the free resin and fatty acids. To quantify resin and fatty acids, aqueous samples were first acidified to convert resin acid salts to free acids, which were then extracted with diethyl ether. The extracts were concentrated and the free acids were methylated, redissolved in methyl tert-butyl ether, and analyzed by gas chromatography using a capillary column and a flame ionization detector. Nonadecanoic acid was added as a surrogate standard prior to extraction, and margaric acid was added as an internal standard prior to injection. When determining the individual resin acids using gas chromatography, palustric acid coeluted with levopimaric acid and the two were reported in this study as combined levopimaric-palustric acid.

Kết quả (Việt) 1:

Vật liệu và phương pháp cách ly vi khuẩn. Chủng vi khuẩn đã được cho kiểm tra đầu tiên từ pine chip (50% Pinus taeda L., 50% Pinus virginiana Mill.) thu thập từ các nhà máy giấy ở Ashland, va, andfromAbiessp.chipscollectedfromapapermill ở tiểu bang Washington. Chủng vi khuẩn đã được mạ các phân đoạn gỗ trên phương tiện dinh dưỡng Difco-Bacto. Thuộc địa được streaked vào dinh dưỡng trung và nền văn hóa tinh khiết được lấy. Chủng vi khuẩn đã được phát triển trên Sierra Trung (15 g agar, 10 g chế phẩm peptone, 5 g NaCl, 0.1 g CaCl2 z H2O, 10 ml Tween 80 và 990 ml nước cất deionized) màn hình cho hoạt động lipase (2). Năm chủng vi khuẩn đã được lựa chọn mà triển lãm lipase hoạt động. Các chủng vi khuẩn đã là identified bởi các bộ sưu tập văn hóa kiểu Mỹ (Rockville, Md.) và gửi với các miền bắc khu vực nghiên cứu phòng thí nghiệm (NRRL) (Peoria, Ill) như Pseudomonas fluorescens NRRL B21432, Xanthomonas campestris NRRL B21430 và Serratia marcescens NRRL B21429. Hai chủng bổ sung không lắng đọng với NRRL là identified như Pseudomonas sp. chủng UM-18 và UM-74. Cả hai của các vi khuẩn này là cây gậy hình, oxidase tích cực, gram âm, và giống và không phát triển tại 42° C. ColoniesofUM-18 và UM-74 trồng trên Bacto-Pseudomonas vừa F là fluorescent và thuộc địa phát triển trên Bacto-Pseudomonas vừa P sử dụng UV ánh sáng là nonfluorescent. Điều trị các chip. Khoai tây chiên tươi thông (50% Pinus taeda L., 50% Pinus virginiana Mill.) thu được từ một giấy millinAshland, va, werefrozenat218 ° Cuntil sử dụng. Vi khuẩn được sử dụng để điều trị được trồng ở canh dinh dưỡng Difco-Bacto và incubatedat24°Conanorbitalshakerat30rpmfor58h.After58hbacteriaand canh dinh dưỡng đã được thêm vào vô trùng máy ly tâm ống (Nalgene tốc độ cao polypropylnetubes; 30by103mm, 50-mlcapacity) và centrifugedat6, 000 rpm cho 5 phút canh dinh dưỡng sau đó decanted và deionized nước vô trùng được thêm vào để mang lại tổng số tiền của các nước và các tế bào đến 100 ml. Mỗi người trong số bốn túi polyethylene nhận được 500 g (trọng lượng ướt) nonsterile chiên với 100 ml nước vô trùng deionized có chứa P. fluorescens NRRL B21432 (1.5 3 1010 cells/ml),X.campestrisNRRLB21430 (1.631010 cells/ml),S.marcescensNRRL B21429 (3.3 3 1010 tế bào/ml), Pseudomonassp.strainUM-18(6.6 3 109 cells/ml), hoặc căng thẳng sp. Pseudomonas UM-74 (1.4 3 1010 tế bào/ml). Mật độ tế bào đã được xác định bởi tính di động khả thi. Ngoài ra, 100 ml nước vô trùng deionized với vi khuẩn không được thêm vào mỗi người trong số bốn túi chứa 500 g (trọng lượng ướt) nonsterile chip để phục vụ như điều khiển với sự phát triển tự nhiên của vi sinh vật nền. Ngay lập tức sau khi điều trị, một mẫu của chip đã được gỡ bỏ và độ ẩm được xác định. P. fluorescens NRRL B21432 được tiếp tục nghiên cứu để xác định specific nhựa và các axit béo ra khỏi gỗ. Một đơn loblolly cây thông vân sam (Pinus taeda L.) được cắt từ Trung tâm giáo dục Dixon Solan ở Andalusia, Ala, sứt mẻ và đông lạnh ở 218° C cho đến khi sử dụng. Gỗ dăm được thêm vào túi như đã mô tả. Hai sao chép của 500 g (trọng lượng ướt) nonsterile chip đã được điều trị với 100 ml nước vô trùng, deionized chứa P. fluorescens NRRL B21432 (3.0 3 109 tế bào/ml). 100 ml nước vô trùng deionized với vi khuẩn không được thêm vào cho mỗi hai túi chứa 500 g (trọng lượng ướt) nonsterile chip để phục vụ như điều khiển. Gỗ khảo nghiệm khai quang. Sau 14 ngày ấp, gỗ dăm là máy sấy khô và mặt đất tại nhà máy Wiley để đi qua một 40-lưới sàng. Gỗ extractives đã được xác định từ 2 g mẫu của gỗ được điều trị và nontreated từ mỗi túi polyethylene bằng cách khai thác với dichloromethane theo thủ tục tiêu chuẩn T 204 om-88 của Hiệp hội kỹ thuật cho bột giấy và ngành công nghiệp giấy, Atlanta, Ga. Một lượng nhựa và các axit béo mặt sau khi điều trị đã được xác định bằng cách sử dụng phương pháp tiêu chuẩn 242D 01 và 081D 07 (Econotech Services Ltd., Delta, British Columbia, Canada). Dichloromethane chiết xuất từ P. fluorescens xử lý gỗ đã là saponified trong KOH ethanolic, điều chỉnh độ pH 3, andextractedwithdiethylether. Theextractswereconcentratedandmethylated. Để xác định "miễn phí" và "tổng số" nhựa và axít béo, các chiết xuất được chia và một phần phân tích mà không có saponification để cung cấp cho miễn phí nhựa và các axit béo. Để định lượng nhựa và axít béo, thị trấn này có dung dịch mẫu là vòng acidified để chuyển đổi nhựa axit muối axít miễn phí, sau đó được tách ra với dietyl ete. Các chất chiết xuất đã được tập trung và axit tự do được xitôzin, redissolved methyl tert-butyl ete và phân tích bằng sắc ký khí bằng cách sử dụng một cột mao mạch và một máy dò ion hóa flame. Nonadecanoic axít được thêm vào như là một tiêu chuẩn thay thế trước khi khai thác, và margaric axít được thêm vào như là một tiêu chuẩn nội bộ trước khi tiêm. Khi xác định axit nhựa cá nhân bằng cách sử dụng sắc ký khí, palustric acid coeluted với levopimaric acid và cả hai đã được báo cáo trong nghiên cứu này là kết hợp levopimaric-palustric acid.

Kết quả (Việt) 2:

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP ly do vi khuẩn. phân lập vi khuẩn đã thu được sàng lọc ban đầu từ chip thông (50% Pinus taeda L., 50% Pinus virginiana Mill.) thu thập từ một nhà máy giấy ở Ashland, Va., andfromAbiessp.chipscollectedfromapapermill tại tiểu bang Washington. vi khuẩn phân lập được thu được bằng cách mạ phân khúc gỗ trên môi trường dinh dưỡng Difco-Bacto. Các thuộc địa bị sọc vào môi trường dinh dưỡng và các nền văn hóa thuần túy đã thu được. phân lập vi khuẩn được nuôi trên Sierra trung bình (15 g agar, 10 g peptone, 5 g NaCl, 0,1 g CaCl2 z H2O, 10 ml Tween 80 và 990 ml nước cất cất) để tầm soát các hoạt động lipase ( 2). Năm vi khuẩn phân lập được lựa chọn trưng bày các hoạt động lipase. Các vi khuẩn phân lập được identi fi ed bởi Type Culture Collection Mỹ (Rockville, Md.) Và nộp cho Phòng thí nghiệm Bắc khu vực nghiên cứu (NRRL) (Peoria, Ill.) Như Pseudomonas fl uorescens NRRL B21432, Xanthomonas campestris NRRL B21430, và Serratia marcescens NRRL B21429 . Hai phân lập bổ sung không được nộp lưu chiểu cho NRRL là identi fi ed như Pseudomonas sp. chủng UM-18 và UM-74. Cả hai của các vi khuẩn hình que có hình dạng, oxidase dương, gram âm, và cử động dể dàng và không phát triển ở 42 ° C.ColoniesofUM-18 và UM-74 trồng trên Bacto-Pseudomonas trung F được fl uorescent và thuộc địa trồng trên Bacto-Pseudomonas trung P sử dụng ánh sáng tia cực tím là không fl uorescent. Điều trị các con chip. chip thông tươi (50% Pinus taeda L., 50% Pinus virginiana Mill.) thu được từ một bài báo millinAshland, Va., werefrozenat218 ° Cuntil sử dụng. Vi khuẩn sử dụng để điều trị được trồng trong Difco-Bacto canh dinh dưỡng và incubatedat24 ° Conanorbitalshakerat30rpmfor58h.After58hbacteriaand canh dinh dưỡng được bổ sung vào ống ly tâm tiệt trùng (Nalgene polypropylnetubes tốc độ cao; 30by103mm, 50-mlcapacity) và centrifugedat6,000rpm trong 5 phút. Dinh dưỡng nước dùng sau đó được chiết và nước khử ion vô trùng đã được bổ sung để đưa tổng lượng nước và các tế bào đến 100 ml. Mỗi bốn túi polyethylene nhận được 500 g (trọng lượng ướt) của chip nonsterile với 100 ml nước cất vô trùng có chứa P. fl uorescens NRRL B21432 (1.5 3 1010 tế bào / ml), X.campestrisNRRLB21430 (1,631010 tế bào / ml), S.marcescensNRRL B21429 (3,3 3 1010 tế bào / ml), Pseudomonassp.strainUM-18 (6,6 3 109 tế bào / ml), hoặc Pseudomonas sp. căng UM-74 (1,4 3 1010 tế bào / ml). mật độ tế bào được xác định bằng số lượng tế bào khả thi. Ngoài ra, 100 ml nước cất vô trùng không có vi khuẩn đã được thêm vào mỗi bốn túi chứa 500 g (trọng lượng ướt) của chip nonsterile để phục vụ như điều khiển với tốc độ tăng trưởng tự nhiên của vi sinh vật nền. Ngay lập tức sau khi điều trị, một mẫu chip được loại bỏ và độ ẩm được xác định. P. fl uorescens NRRL B21432 được tiếp tục nghiên cứu để xác định loại nhựa fi c và các axit béo cụ thể lấy từ gỗ. Một cây cây có cành nhỏ thông duy nhất (Pinus taeda L.) được cắt từ các Trung tâm Giáo dục Solan Dixon ở Andalusia, Ala., Sứt mẻ, và đông lạnh ở 218 ° C cho đến khi sử dụng. dăm gỗ đã được thêm vào túi bằng polyethylene như mô tả trước đây. Hai lần lặp lại là 500 g (trọng lượng ướt) của chip nonsterile được điều trị với 100 ml, nước khử ion vô trùng có chứa P. fl uorescens NRRL B21432 (3,0 3 109 tế bào / ml). Một trăm ml nước cất vô trùng không có vi khuẩn đã được thêm vào mỗi hai túi bằng polyethylene chứa 500 g (trọng lượng ướt) của chip nonsterile để phục vụ như điều khiển. Gỗ khảo nghiệm khai khoáng. Sau 14 ngày ấp, dăm gỗ đã được sấy khô không khí và mặt đất trong một nhà máy Wiley phải đi qua một cái rây 40 mesh. chiết Gỗ đã được xác định từ các mẫu 2-g điều trị và nontreated gỗ từ mỗi túi polyethylene bằng cách chiết với dichloromethane theo quy trình chuẩn T 204 om-88 của Hiệp hội kỹ thuật cho giấy và bột giấy, Atlanta, Ga. Số tiền nhựa và axit béo hiện nay sau khi điều trị được xác định bằng phương pháp chuẩn 242D01 và 081D07 (Econotech Services Ltd, Delta, British Columbia, Canada). chiết xuất từ ​​gỗ Dichloromethane P. fl uorescens được điều trị là saponi fi ed trong ethanol KOH, điều chỉnh pH 3, andextractedwithdiethylether.Theextractswereconcentratedandmethylated. Để xác định các axit "tự do" và "tổng" nhựa và béo chiết xuất được chia và một phần được phân tích mà không cation fi saponi để cung cấp cho các loại nhựa và các axit béo tự do. Để định lượng nhựa và các axit béo, các mẫu dung dịch nước đã fi đầu tiên acidi fi ed để chuyển đổi các muối axit nhựa để axit tự do, sau đó được chiết với diethyl ether. Các chiết xuất được tập trung và các axit tự do được methyl hóa, rửa giải trong metyl tert-butyl ether, và phân tích bằng sắc ký khí sử dụng một cột mao mạch và một máy dò ion hóa fl ame. axit Nonadecanoic đã được thêm vào như là một tiêu chuẩn thay thế trước khi khai thác, và acid margaric đã được thêm vào như là một tiêu chuẩn nội bộ trước khi tiêm. Khi xác định các axit nhựa cá nhân sử dụng phương pháp sắc ký khí, axit palustric coeluted với axit levopimaric và hai người đã được báo cáo trong nghiên cứu này là axit levopimaric-palustric kết hợp.