Plasmid DNA preparations were done

Plasmid DNA preparations were done by one of two methods as indicated in the following disclosure. The first is a standard boiling method for plasmid minipreparations as described in Sambrook et al., supra at page 1.29, previously incorporated by reference herein. The second method utilized the Qiagen Plasmid Kit available from Qiagen Inc. (Chatsworth, Calif.) which was used for preparing purified DNA. This method makes use of a proprietary anion exchange resin and a series of proprietary elution buffers to prepare plasmid DNA without the need for CsCl gradients. The method is described in the Oiagen Plasmid Handbook for Plasmid Midi Kit and Plasmid Maxi Kit ©1992 Diagen GmbH, Qiagen, Inc. For preparations of B. stearothermophilus genomic DNA, overnight cultures of cells were centrifuged and the pellet was resuspended in 1/50 the original volume of 10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl and 5 mM ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) (pH 7.0). Lysozyme was added to a final concentration of 2 mg/ml, and the suspension was incubated at 37° C. for 20 minutes. Nine volumes of a solution containing 10 mM Tris-Cl (pH 8.0), 250 mM NaCl, 1.2% (v/v) Triton X-100, 100 μg/ml RNase A, 12 mM EDTA and 0.5 M guanidine-HCl were added to the cell suspension and the mixture was incubated on ice for 20 minutes. The mixture was made 2 mg/ml in proteinase K and incubated at 50° C. for 2 hours with gentle shaking. The solution was then centrifuged at 15-20,000×g for 10 minutes and the supernatant decanted off. Bst genomic DNA was then prepared using a variation of the Qiagen method described above for the recovery of plasmid DNA; other methods of preparing genomic DNA from cleared cell lysates are well known to those of ordinary skill in the art.

Probe Labeling

Kết quả (Việt) 1:

Plasmid DNA chuẩn bị đã được thực hiện bởi một trong hai phương pháp như được chỉ ra trong việc tiết lộ sau đây. Đầu tiên là một tiêu chuẩn sôi phương pháp cho plasmid minipreparations như mô tả trong Sambrook et al., siêu Trang 1.29, trước đây kết hợp bởi tham chiếu ở đây. Phương pháp thứ hai sử dụng Qiagen Plasmid Kit có sẵn từ Qiagen Inc (Chatsworth, California), được sử dụng để chuẩn bị tinh khiết DNA. Phương pháp này sử dụng một loại nhựa trao đổi anion độc quyền và một loạt các bộ đệm elution độc quyền để chuẩn bị các plasmid DNA mà không cần CsCl gradient. Các phương pháp được mô tả trong cẩm nang Plasmid Oiagen cho Plasmid Midi Kit và Plasmid Maxi Kit © 1992 Diagen GmbH, Qiagen, Inc Cho việc chuẩn bị của B. stearothermophilus gen ADN, nền văn hóa qua đêm của các tế bào được ly và miếng được resuspended trong 1/50 số 10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl và 5 mM ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) (pH 7.0), ban đầu. Lysozyme đã được bổ sung với một nồng độ cuối cùng 2 mg/ml, và hệ thống treo được ủ tại 37° C. trong 20 phút. Chín khối lượng một giải pháp có chứa 10 mM Tris-Cl (pH 8,0), 250 mM NaCl, 1,2% (v/v) Triton X-100, 100 μg/ml RNase A, 12 mM EDTA và 0.5 M guanidine-HCl được thêm vào việc đình chỉ tế bào và hỗn hợp được ủ trên băng trong 20 phút. Hỗn hợp được thực hiện 2 mg/ml ở proteinase K và ủ lúc 50° C. trong 2 giờ với lắc nhẹ nhàng. Giải pháp sau đó ly 15-20, 000 × g trong 10 phút và supernatant decanted ra. BST gen DNA sau đó đã được chuẩn bị bằng cách sử dụng một biến thể của phương pháp Qiagen mô tả ở trên để phục hồi của plasmid DNA; Các phương pháp chuẩn bị gen DNA từ di động thông lysates đang nổi tiếng với các kỹ năng bình thường trong nghệ thuật.Probe Labeling

Kết quả (Việt) 2:

Chuẩn bị plasmid DNA được thực hiện bằng một trong hai phương pháp như đã nêu trong công bố thông tin sau đây. Đầu tiên là một phương pháp tiêu chuẩn cho sôi minipreparations plasmid như mô tả trong Sambrook et al., Supra ở trang 1.29, trước đó kết hợp bằng cách tham khảo tài liệu này. Phương pháp thứ hai sử dụng Kit Qiagen Plasmid có sẵn từ Qiagen Inc. (Chatsworth, Calif.) Được sử dụng để chuẩn bị DNA tinh sạch. Phương pháp này sử dụng một loại nhựa trao đổi anion độc quyền và một loạt các bộ đệm rửa giải độc quyền để chuẩn bị DNA plasmid mà không cần CSCL gradient. Phương pháp này được mô tả trong Cẩm nang Oiagen Plasmid Plasmid cho Midi Kit và Plasmid Maxi Kit © 1992 Diagen GmbH, Qiagen, Inc. Để chuẩn bị của B. stearothermophilus DNA của bộ gen, các nền văn hóa qua đêm của các tế bào được ly tâm và thức ăn viên được lơ lửng trong 1/50 khối lượng ban đầu là 10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl và 5 mM axit tetraacetic ethylenediamine (EDTA) (pH 7.0). Lysozym được thêm vào nồng độ cuối cùng của 2 mg / ml, và hệ thống treo được ủ ở 37 ° C. 20 phút. Chín khối lượng của một dung dịch chứa 10 mM Tris-Cl (pH 8,0), 250 mM NaCl 1,2% (v / v) Triton X-100, 100 mg / ml RNase A, 12 mM EDTA và 0,5 M guanidine-HCl đã được thêm vào cho treo tế bào và hỗn hợp được ủ trên nước đá trong 20 phút. Hỗn hợp này được thực hiện 2 mg / ml trong proteinase K và ủ ở 50 ° C. 2 giờ với lắc nhẹ nhàng. Các giải pháp sau đó được ly tâm ở 15-20,000 × g trong 10 phút và gạn gạn ra. DNA của bộ gen Bst đã chuẩn bị bằng cách sử dụng một biến thể của phương pháp mô tả ở trên Qiagen cho sự phục hồi của DNA plasmid sau đó; các phương pháp khác chuẩn bị ADN hệ gen từ tế bào lysates xóa cũng được biết đến với những kỹ năng bình thường trong nghệ thuật. Probe nhãn