a-Amylase produced by Bacillus lich

a-Amylase produced by Bacillus licheniformis CUMC305 was purified 212-fold
with a 42% yield through a series of four steps. The purified enzyme was
homogeneous as shown by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis
and discontinuous gel electrophoresis. The purified enzyme showed maximal
activity at 90°C and pH 9.0, and 91% of this activity remained at 100°C. The
enzyme retained 91, 79, and 71% maximal activity after 3 h of treatment at 60°C, 3
h at 70°C, and 90 min at 80°C, respectively, in the absence of substrate. On the
contrary, in the presence of substrate (soluble starch), the a-amylase enzyme was
fully stable after a 4-h incubation at 100°C. The enzyme showed 100% stability in
the pH range 7 to 9; 95% stability at pH 10; and 84, 74, 68, and 50% stability at pH
values of 6, 5, 4, and 3, respectively, after 18 h of treatment. The activation energy
for this enzyme was calculated as 5.1 x 105 J/mol. The molecular weight was
estimated to be 28,000 by sodium dodecyl sulfate-gel electrophoresis. The relative
rates of hydrolysis of soluble starch, amylose, amylopectin, and glycogen were
1.27, 1.8, 1.94, and 2.28 mg/ml, respectively. Vmax values for hydrolysis of these
substrates were calculated as 0.738, 1.08, 0.8, and 0.5 mg of maltose/ml per min,
respectively. Of the cations, Na+, Ca2+, and Mg2+, showed stimulatory effect,
whereas Hg2 , Cu2+, Ni2+, Zn2+, Ag+, Fe2+ Co +, Cd2+, A13+, and Mn2+ were
inhibitory. Of the anions, azide, F-, S032-, S043-, S2032-, MoO42-, and W042-
showed an excitant effect. p-Chloromercuribenzoic acid and sodium iodoacetate
were inhibitory, whereas cysteine, reduced glutathione, thiourea, P-mercaptoethanol,
and sodium glycerophosphate afforded protection to enzyme activity. aAmylase
was fairly resistant to EDTA treatment at 30°C, but heating at 90°C in
presence of EDTA resulted in the complete loss of enzyme activity, which could
be recovered partially by the addition of Cu2+ and Fe2+ but not by the addition of
Ca2+ or any other divalent ions.

Kết quả (Việt) 2:

một-Amylase sản xuất bởi vi khuẩn Bacillus licheniformis CUMC305 là tinh khiết 212 lần
với sản lượng 42% thông qua một loạt các bốn bước. Các enzyme tinh khiết là
đồng nhất như thể hiện bởi sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel điện
và điện di gel không liên tục. Các enzyme tinh khiết cho thấy tối đa
hoạt động ở 90 ° C và pH 9,0, và 91% của hoạt động này vẫn ở 100 ° C. Các
enzyme giữ lại 91, 79, và 71% hoạt động tối đa sau 3 h điều trị ở 60 ° C, 3
giờ ở 70 ° C, và 90 phút ở 80 ° C, tương ứng, trong sự vắng mặt của chất nền. Trên
trái, trong sự hiện diện của chất nền (tinh bột hòa tan), enzyme một-amylase là
hoàn toàn ổn định sau khi ủ 4 giờ ở 100 ° C. Các enzyme cho thấy 100% ổn định trong
khoảng pH 7-9; 95% ổn định ở pH 10; và 84, 74, 68, và 50% độ ổn định ở pH
giá trị của 6, 5, 4 và 3, tương ứng, sau 18 h của điều trị. Năng lượng hoạt hóa
cho enzyme này đã được tính toán là 5.1 x 105 J / mol. Trọng lượng phân tử đã được
ước tính là 28.000 bằng sodium dodecyl sulfate-gel điện di. Các tương đối
tỷ lệ thủy phân tinh bột hòa tan, hàm lượng amylose, amylopectin và glycogen là
1.27, 1.8, 1.94, và 2.28 mg / ml, tương ứng. Giá trị Vmax cho sự thủy phân của các
chất được tính bằng 0,738, 1,08, 0,8, và 0,5 mg maltose / ml mỗi phút,
tương ứng. Trong số các cation Na +, Ca2 +, và Mg2 +, cho thấy tác dụng kích thích,
trong khi Hg2, Cu2 +, Ni2 +, Zn 2 +, Ag +, Fe2 + Co +, Cd2 +, A13 + và Mn2 + là
ức chế. Trong số các anion, azit, F-, S032-, S043-, S2032-, MoO42-, và W042-
cho thấy một hiệu ứng làm kích thích. axit và natri p-Chloromercuribenzoic iodoacetate
là ức chế, trong khi đó cysteine, giảm glutathione, thiourea, P-mercaptoethanol,
và natri glycerophosphate dành bảo vệ enzyme hoạt động. aAmylase
khá kháng điều trị EDTA ở 30 ° C, nhưng nhiệt ở 90 ° C trong
sự hiện diện của EDTA dẫn đến sự mất hoàn toàn hoạt động của enzyme, có thể
được phục hồi một phần bởi sự bổ sung của Cu2 + và Fe2 +, nhưng không phải bằng việc bổ sung các
ion Ca2 + hoặc bất kỳ ion hóa trị hai khác.