To complete the
-carotene biosynth

To complete the
-carotene biosynthetic pathway, cotransformations
were carried out employing two vectors, one
(pZPsC) carrying psy and crtI, like in pB19hpc but lacking the
expression cassette for the selectable marker aphIV, and the
other (pZCycH) providing, under glutelin promoter control,
the sequence coding for the enzyme lycopene
-cyclase, originating
from N. pseudonarcissus (accession no. X98796) (7).
Like phytoene synthase, lycopene
-cyclase carried a functional
transit peptide, allowing plastid-import (5). The combination
of both plasmids, thus, should be able to direct

-carotene formation in rice endosperm.
A total of 800 precultured rice immature embryos were
inoculated with Agrobacterium LBA 4404/pB19hpc. Fifty hygromycin-resistant
plants then were analyzed by Southern
hybridization analysis (data not shown). All tested lines carried
the transgenes and most of the plants showed single
insertions, but in some cases multiple insertions were observed.
For cotransformation, 500 precultured immature embryos
were inoculated with an Agrobacterium mixture of LBA4404/
pZPsC carrying the psy and crtI genes and LBA4404/pZCycH
containing lcy together with aph IV as the selectable marker.
Cotransformed plants were identified by Southern hybridization.
All 60 randomly selected regenerated lines were positive
for lcy, among which 12 plants were cotransformed with
pZPsC. Like the transformation above, 1–3 transgene copies
were predominant in cotransformed plants. Ten plants harboring
all four introduced genes were transferred into the greenhouse
for setting seeds. All plants from all transformations
described here showed a normal phenotype as well as normal
fertility.

Kết quả (Việt) 1:

Để hoàn thành con - carotene viêm đường, cotransformationsđược thực hiện sử dụng hai vectơ, mộtpsy mang theo (pZPsC) và crtI, như ở pB19hpc, nhưng thiếu cácbiểu hiện cassette cho aphIV lựa chọn đánh dấu, và cáckhác (pZCycH) cung cấp, theo glutelin điều khiển promoter,Các trình tự mã hóa cho enzyme lycopene-cyclase, có nguồn gốctừ N. pseudonarcissus (gia nhập không. X98796) (7).Giống như phytoene synthase, lycopene-cyclase thực hiện một chức năngTransit peptide, cho phép nhập khẩu plastid (5). Sự kết hợpmột plasmid cả, do đó, nên có thể trực tiếp-hình thành carotene trong gạo nội nhũ.Tổng số 800 precultured lúa non phôi đãtiêm chủng với Agrobacterium LBA 4404/pB19hpc. Chống hygromycin mươicây sau đó đã được phân tích bởi miền Namlai ghép các phân tích (dữ liệu không hiển thị). Tất cả thử nghiệm dòng thực hiệnCác transgenes và hầu hết các nhà máy cho thấy duy nhấtThêm vào, nhưng trong một số trường hợp nhiều insertions đã được quan sát.Cho cotransformation, 500 precultured non phôiđã được tiêm chủng với một hỗn hợp Agrobacterium của LBA4404 /pZPsC mang gen psy và crtI và LBA4404/pZCycHcó chứa lcy cùng với aph IV như lựa chọn điểm đánh dấu.Nhà máy cotransformed đã được xác định bởi nam lai ghép.Tất cả 60 đường regenerated lựa chọn ngẫu nhiên đã được tích cựccho lcy, trong đó 12 nhà máy đã được cotransformed vớipZPsC. Giống như những biến đổi ở trên, 1-3 transgene bản saođã được chủ yếu ở thực vật cotransformed. Mười nhà máy chứa chấpTất cả bốn giới thiệu gen đã được chuyển vào các nhà kínhđể cài đặt hạt giống. Tất cả các cây từ tất cả các biến đổiđược mô tả dưới đây cho thấy một kiểu hình bình thường, cũng như bình thườngkhả năng sinh sản.

Kết quả (Việt) 2:

Để hoàn thành? Con đường sinh tổng hợp -carotene, cotransformations
được thực hiện sử dụng hai vectơ, một
(pZPsC) mang psy và crtI, giống như trong pB19hpc nhưng thiếu các
băng biểu cho các marker chọn lọc aphIV, và
khác (pZCycH) cung cấp, dưới glutelin kiểm soát promoter,
trình tự mã hóa cho các enzyme lycopene? -cyclase, có nguồn gốc
từ N. pseudonarcissus (nhập không X98796.) (7).
Giống như synthase phytoene, lycopene? -cyclase mang một chức năng
peptide quá cảnh, cho phép plastid-nhập khẩu (5) . Sự kết hợp
của cả hai plasmid, do đó, nên có thể trực tiếp
? -carotene Hình thành trong nội nhũ gạo.
Tổng cộng có 800 phôi non lúa precultured được
tiêm với Agrobacterium LBA 4404 / pB19hpc. Năm mươi hygromycin chống
thực vật sau đó được phân tích bằng miền Nam
phân tích lai (dữ liệu không hiển thị). Tất cả các dòng thử nghiệm tiến hành
các gen và hầu hết các nhà máy cho thấy đơn
chèn thêm, nhưng trong một số trường hợp, nhiều chèn đã được quan sát.
Đối với cotransformation, 500 phôi non precultured
được tiêm một hỗn hợp Agrobacterium của LBA4404 /
pZPsC mang các gen psy và crtI và LBA4404 / pZCycH
chứa LCY cùng với APH IV như các marker chọn lọc.
cây cotransformed được xác định bởi lai Southern.
Tất cả 60 dòng tái sinh được lựa chọn ngẫu nhiên là tích cực
cho LCY, trong đó có 12 nhà máy được cotransformed với
pZPsC. Giống như việc chuyển đổi trên, 1-3 bản sao gen chuyển
đã chiếm ưu thế trong các nhà máy cotransformed. Mười cây chứa chấp
cả bốn gen giới thiệu được chuyển vào nhà kính
cho thiết hạt. Tất cả các cây từ tất cả các biến đổi
được mô tả ở đây cho thấy một kiểu hình bình thường cũng như bình thường
khả năng sinh sản.