5.1 The Z domain scaffoldThe work i

5.1 The Z domain scaffold

The work in this thesis is based on the immunotechnological use of affinity ligands

(denoted affibodies) selected from protein libraries based on the so-called Z domain,

utilized as scaffold for library constructions. This Z domain is a 58 aa non-cystein

protein consisting of three anti-parallel α-helices forming a bundle structure. The Z

domain corresponds to an engineered variant of the native B domain of

staphylococcal protein A, in which an Asn28-Gly29 dipeptide sequence, sensitive to

fusion protein cleavage by hydroxylamine, has been changed into an Asn-Ala

sequence. In addition, an alanine residue at position one has been changed into a

valine (Nilsson et al., 1987). This Z domain has been frequently used as affinity

fusion partner for the production of either Z or ZZ-fusion proteins in a number of

different host cells (Ståhl and Nygren, 1997). Utilizing the IgG binding capacity of

the Z domain, such fusion proteins have been possible to recover and immobilize

using IgG-containing matrices or surfaces (Ståhl and Nygren, 1997). The Z domain

has a high solubility, which has been exploited to decrease problems with protein

aggregation during protein refolding procedures (Samuelsson et al., 1991). All the

five native SPA domains show binding to Fc regions of IgG (Moks et al., 1986) and

to antibodies of different isotypes from a number of animal species (Langone, 1982).

In addition, these domains also possess a binding activity towards VH regions of

certain subpopulations of antibodies containing VH regions belonging for example to

the human VHIII family. Recently, data from X-ray diffraction analysis of the co-
crystal complex between the D domain of SPA and a Fab fragment, has shown that

the Fc and VH binding activities are structurally separated and recruit residues of

helices one and two or two and three, respectively (Graille et al., 2000). Assuming a

similar situation also for the other homologous SPA domains, the considerable lower

VH binding demonstrated for the Z domain (Jansson et al., 1998) can be explained by

the Gly29-Ala substitution, corresponding to the introduction of a larger amino acid in

the protein-protein contact surface.

Kết quả (Việt) 1:

5.1 Đài miền ZCác công việc trong luận án này dựa trên việc sử dụng immunotechnological của mối quan hệ ligand(ký hiệu là affibodies) đã chọn từ thư viện protein dựa trên tên miền Z cái gọi là,sử dụng như đài cho công trình thư viện. Tên miền này Z là một 58 aa phòng không-cysteinprotein bao gồm ba chống song song α-helices tạo thành một cấu trúc gói. Ztên miền tương ứng với một phiên bản thiết kế của tên miền B bản xứ củaTHC protein A, trong đó một Asn28-Gly29 dipeptide trình tự, nhạy cảm vớiphản ứng tổng hợp protein cleavage của hydroxylamine, đã được thay đổi thành một Asn-Alatrình tự. Ngoài ra, một dư lượng alanine ở vị trí một đã được thay đổi thành mộtvaline (Nilsson và ctv., 1987). Tên miền Z này đã được sử dụng thường xuyên như mối quan hệđối tác phản ứng tổng hợp cho sản xuất hoặc Z hoặc ZZ phản ứng tổng hợp protein trong một sốCác tế bào khác nhau host (Ståhl và Nygren, 1997). Sử dụng khả năng ràng buộc IgG củatên miền Z, các phản ứng tổng hợp protein có được có thể phục hồi và cố địnhbằng cách sử dụng ma trận có chứa kháng thể IgG hoặc bề mặt (Ståhl và Nygren, 1997). Tên miền Zcó một độ hòa tan cao, mà đã được khai thác để làm giảm các vấn đề với proteintập hợp trong protein refolding thủ tục (Samuelsson và ctv., 1991). Tất cả cácnăm bản xứ SPA miền Hiển thị ràng buộc để Fc vùng của IgG (Moks và ctv., 1986) vàđể kháng thể khác nhau isotypes từ một số loài động vật (Langone, 1982).Ngoài ra, các tên miền này cũng có một hoạt động ràng buộc đối với khu vực VHQuần thể nhất định của các kháng thể có VH vùng thuộc ví dụgia đình VHIII của con người. Gần đây, dữ liệu từ phân tích nhiễu xạ tia x của co-tinh thể phức tạp giữa vùng D của SPA và một mảnh Fab, đã chỉ ra rằngCác hoạt động ràng buộc Fc và VH cấu trúc được tách ra và tuyển dụng các dư lượng củahelices một và hai hoặc hai và ba, tương ứng (Graille và ctv., 2000). Giả sử mộtcác tình huống tương tự cũng cho các tương đồng SPA các tên miền khác, thấp hơn đáng kểVH ràng buộc đã chứng minh cho miền Z (Jansson và ctv., 1998) có thể được giải thích bởisự thay thế Gly29-Ala, tương ứng với sự ra đời của một acid amin lớn hơn trongbề mặt liên hệ protein-protein.

Kết quả (Việt) 2:

5.1 miền Z giàn giáo Công việc trong luận án này được dựa trên việc sử dụng immunotechnological các phối tử ái lực (affibodies ký hiệu) được lựa chọn từ thư viện protein dựa trên cái gọi là miền Z, sử dụng như giàn giáo cho công trình xây dựng thư viện. Miền Z này là 58 aa không cystein protein gồm ba chống song song α-xoắn hình thành một cấu trúc bó. Z miền tương ứng với một phiên bản thiết kế của miền B nguồn gốc của tụ cầu protein A, trong đó một chuỗi dipeptit Asn28-Gly29, nhạy cảm với sự phân cắt protein phản ứng tổng hợp bởi hydroxylamine, đã được thay đổi thành một ASN-Ala chuỗi. Ngoài ra, một dư lượng alanine ở vị trí một đã được thay đổi thành một valine (Nilsson et al., 1987). Miền Z này đã được sử dụng thường xuyên như mối quan hệ đối tác hợp cho việc sản xuất hoặc Z hoặc ZZ-fusion protein trong một số tế bào vật chủ khác nhau (Ståhl và Nygren, 1997). Bằng cách sử dụng khả năng ràng buộc IgG của miền Z, protein phản ứng tổng hợp như vậy đã có thể phục hồi và làm bất động sử dụng IgG có chứa ma trận hoặc các bề mặt (Ståhl và Nygren, 1997). Tên miền Z có tính hòa tan cao, đã được khai thác để giảm vấn đề với protein tổng hợp trong thủ tục protein refolding (Samuelsson et al., 1991). Tất cả các năm lĩnh vực SPA bản địa show liên kết với vùng Fc của IgG (Moks et al., 1986) và các kháng thể của isotypes khác nhau từ một số loài động vật (Langone, 1982). Ngoài ra, các lĩnh vực này cũng có một hoạt động bắt buộc đối với khu vực VH của nhóm quần thể nhất định của các kháng thể chứa đựng những vùng VH thuộc ví dụ như gia đình VHIII con người. Gần đây, dữ liệu từ phân tích nhiễu xạ tia X của các đồng phức tạp tinh giữa miền D của SPA và một mảnh Fab, đã chỉ ra rằng các hoạt động ràng buộc Fc và VH được cấu trúc tách và tuyển dụng dư lượng xoắn một và hai hoặc hai và ba , tương ứng (Graille et al., 2000). Giả sử một tình huống tương tự cũng cho các lĩnh vực SPA tương đồng khác, thấp hơn đáng kể VH ràng buộc chứng minh cho miền Z (Jansson et al., 1998) có thể được giải thích bởi sự thay thế Gly29-Ala, tương ứng với sự ra đời của một amino acid lớn hơn các bề mặt tiếp xúc protein-protein.