Fungal cells are highly complex as

Fungal cells are highly complex as their metabolism is compartmentalized harboring various types of subcellular organelles that are bordered by one or more membranes. Knowledge about the intracellular localization of transporter proteins is often required for the understanding of their biological function. Among different approaches available, the localization analysis based on the expression of GFP fusions is commonly used as a relatively fast and cost-efficient method that allows visualization of proteins of interest in both live and fixed cells. In addition, inactivation of transporter genes is an important tool to resolve their specific function. Here we provide a detailed protocol for the deletion and localization analysis of ABC transporters in the filamentous fungus Penicillium chrysogenum. It includes construction of expression plasmids, their transformation into fungal strains, cultivation of transformants, microscopy analysis, as well as additional protocols on staining of fungal cells with organelle-specific dyes like Hoechst 33342, MitoTracker DeepRed, and FM4-64.

Kết quả (Việt) 1:

Tế bào nấm là rất phức tạp như sự trao đổi chất của họ lực chứa chấp khác nhau của các bào quan được bao bọc bởi một hoặc nhiều các màng tế bào. Kiến thức về địa phương hoá nội bào protein vận chuyển thường là cần thiết cho sự hiểu biết về chức năng sinh học của họ. Trong số các phương pháp tiếp cận khác nhau có sẵn, các phân tích địa phương dựa trên sự biểu hiện của GFP hợp nhất thường được sử dụng như là một phương pháp tương đối nhanh chóng và hiệu quả chi phí cho phép các kiểu trực quan của các protein quan trong tế bào sống và cố định. Ngoài ra, ngừng hoạt động vận chuyển gen là một công cụ quan trọng để giải quyết các chức năng cụ thể của họ. Ở đây chúng tôi cung cấp một giao thức chi tiết cho việc xóa và bản địa hóa phân tích ABC vận chuyển trong nấm sợi Penicillium chrysogenum. Nó bao gồm việc xây dựng một plasmid biểu hiện, họ biến đổi thành các chủng nấm, trồng trọt của transformants, kính hiển vi phân tích, cũng như các giao thức bổ sung vào nhuộm các tế bào nấm với thuốc nhuộm organelle cụ thể như Hoechst 33342, MitoTracker DeepRed và FM4-64.

Kết quả (Việt) 2:

tế bào nấm là rất phức tạp như sự trao đổi chất của họ là compartmentalized chứa chấp nhiều loại bào quan dưới tế bào được bao bọc bởi một hoặc nhiều màng. Kiến thức về nội địa hóa trong tế bào của protein vận chuyển thường được yêu cầu cho sự hiểu biết về chức năng sinh học của họ. Trong số các phương pháp tiếp cận khác nhau có sẵn, các phân tích địa hóa dựa trên các biểu hiện của sự hợp nhất GFP thường được sử dụng như một phương pháp tương đối nhanh và chi phí-hiệu quả cho phép hình dung của protein quan tâm trong cả hai tế bào sống và cố định. Ngoài ra, bất hoạt gen vận chuyển là một công cụ quan trọng để giải quyết chức năng cụ thể của họ. Dưới đây chúng tôi cung cấp một giao thức cụ thể để xóa và nội địa hóa phân tích của vận chuyển ABC trong sợi nấm Penicillium chrysogenum. Nó bao gồm xây dựng các plasmid biểu hiện, biến đổi họ thành chủng nấm, trồng biến nạp, phân tích kính hiển vi, cũng như các giao thức bổ sung về nhuộm tế bào nấm với thuốc nhuộm hạt cơ quan cụ thể như Hoechst 33342, MitoTracker DeepRed, và FM4-64.