Abstract—Agriculture is the backbon

Abstract—Agriculture is the backbone of economy of Pakistan
and cotton is the major agricultural export and supreme source of raw
fiber for our textile industry. To combat severe problems of insect
and weed, combination of three genes namely Cry1Ac, Cry2A and
EPSPS genes was transferred in locally cultivated cotton variety
MNH-786 with the use of Agrobacterium mediated genetic
transformation. The present study focused on the molecular screening
of transgenic cotton plants at T3 generation in order to confirm
integration and expression of all three genes (Cry1Ac, Cry2A and
EPSP synthase) into the cotton genome. Initially, glyphosate spray
assay was used for screening of transgenic cotton plants containing
EPSP synthase gene at T3 generation. Transgenic cotton plants which
were healthy and showed no damage on leaves were selected after 07
days of spray. For molecular analysis of transgenic cotton plants in
the laboratory, the genomic DNA of these transgenic cotton plants
were isolated and subjected to amplification of the three genes. Thus,
seventeen out of twenty (Cry1Ac gene), ten out of twenty (Cry2A
gene) and all twenty (EPSP synthase gene) were produced positive
amplification. On the base of PCR amplification, ten transgenic plant
samples were subjected to protein expression analysis through
ELISA. The results showed that eight out of ten plants were actively
expressing the three transgenes. Real-time PCR was also done to
quantify the mRNA expression levels of Cry1Ac and EPSP synthase
gene. Finally, eight plants were confirmed for the presence and active
expression of all three genes at T3 generatio

Kết quả (Việt) 2:

Tóm tắt-Nông nghiệp là xương sống của nền kinh tế của Pakistan
và bông là xuất khẩu nông nghiệp lớn và nguồn tối cao của nguyên liệu
sợi cho ngành công nghiệp dệt may của chúng tôi. Để chống lại các vấn đề nghiêm trọng của côn trùng
và cỏ dại, sự kết hợp của ba gen cụ thể là Cry1Ac, Cry2A và
EPSPS gen được chuyển vào giống bông trồng tại địa phương
MNH-786 với việc sử dụng các gen qua trung gian Agrobacterium
chuyển đổi. Các nghiên cứu này tập trung vào việc sàng lọc phân tử
của cây bông biến đổi gen ở thế hệ T3 để xác nhận
hội nhập và biểu hiện của cả ba gen (Cry1Ac, Cry2A và
EPSP synthase) vào hệ gen của cây bông. Ban đầu, glyphosate phun
thử nghiệm được sử dụng để sàng lọc các nhà máy bông chuyển gen có chứa
gen synthase EPSP ở thế hệ T3. Cây bông biến đổi gen đó
đều khỏe mạnh và cho thấy không có thiệt hại trên lá được chọn sau khi 07
ngày phun. Đối với phân tích phân tử của cây bông biến đổi gen trong
phòng thí nghiệm, DNA của bộ gen của các cây bông biến đổi gen
đã được cô lập và bị khuếch đại của ba gen. Như vậy,
mười bảy trong số hai mươi (gen Cry1Ac), mười trong số hai mươi (Cry2A
gen) và tất cả hai mươi (gen synthase EPSP) được sản xuất tích cực
khuếch đại. Trên cơ sở của sự khuếch đại PCR, mười cây trồng chuyển gen
mẫu đã phải chịu phân tích biểu hiện protein thông qua
kỹ thuật ELISA. Kết quả cho thấy tám trong số mười nhà máy đã tích cực
thể hiện ba gen. Real-time PCR cũng được thực hiện để
xác định số lượng các mức độ biểu hiện mRNA của synthase Cry1Ac và EPSP
gen. Cuối cùng, tám nhà máy được xác nhận sự hiện diện và hoạt động
biểu hiện của cả ba gen tại T3 generatio