Raimund’s protocol for carotenoid e

Raimund’s protocol for carotenoid extraction

1. Aliquot 100mg plant tissue in 4ml brown vial (SPME vial), plus 2mL acetone, incubate 6h on ferris wheel in 4C room.
2. Let stand 1h to allow plant material to settle OR centrifuge 3’, 3500U. Option: transfer 1ml to 1.5ml eppi, centrifuges 3min at 3500 rpm.
3. Transfer 800ul of the extract to a 2mL brown vial OR filter the extract through cotton into the vial, add 200 ul water (the final dilution is 20%water: 80% extracted solvent).
4. Inject 1ml sample onto HPLC.
5. HPLC program (from Stefan)
a. Column number 48, a C18 column which binds nonpolar compounds.
b. T=20C, flow=1.5ml/min
c. lambda= 445nm
d. Solvents:
i. acetone (B)
ii. 1mM sodium bicarbonate (A)
e. Gradient: 65% acetone (0min)--65% (4min)—90%(12min)—100%(20min)—100%(22min)—65% (22.5min)—65%(25min)
6. Retention time
a. Neoxanthin mixed peak: 5.79, exclude
b. Violaxanthin: 6.99 min
c. Lutein: 9.4
d. Beta-carotene: 15.4
e. 2 unknown carotenoids: 4.91 and 10.14
f. Chlorophyll b: 12.68
g. Chlorophyll a: 13.22
A450 for carotenoids, A450 and A650 for chlorophyll
Method saved as EPCAROT.m

From adela sanchez:
Rosette leaf tissue incubated in pre-chilled acetone and shaken in cold/dark for 2h. Centrifuge. (Take supernatant and) repeat extraction twice more. Dry extracts under N2. Redissolve in 4:1 v/v acetone: water. Filter extract through cotton.
Run on HPLC with short RP-S column, 20C, 1.5ml/min flow rate with acetone and water as solvents.
Retention times: neoxanthin (5.0min), violaxanthin (6.6min), beta carotene (15.7min), chlorophyll b (13.25 min), chlorophyll a (13.6 min)

Kết quả (Việt) 2:

Giao thức Raimund cho carotenoid khai thác 1. Dịch chất mô thực vật 100mg trong 4ml lọ màu nâu (SPME lọ), cộng với 2ml acetone, ủ 6h trên đu quay bánh xe trong phòng 4C. 2. Hãy 1h đứng để cho phép vật liệu để giải quyết hoặc máy ly tâm 3 ', 3500U. Tùy chọn: chuyển 1 ml đến 1.5ml eppi, máy ly tâm 3min tại 3500 rpm. 3. Chuyển 800ul của các chiết xuất để một lọ 2ml nâu hoặc lọc các chiết xuất thông qua bông vào lọ, thêm 200 nước ul (độ pha loãng cuối cùng là 20% nước: 80% chiết xuất dung môi). 4. Tiêm mẫu 1ml vào HPLC. 5. Chương trình HPLC (từ Stefan) a. Cột số 48, một cột C18 mà liên kết với các hợp chất không phân cực. B. T = 20C, chảy = 1.5ml / phút c. lambda = 445nm d. Dung môi: i. acetone (B) ii. Bicarbonate natri 1mm (A) e. Gradient: 65% acetone (0min) - 65% (4min) -90% (12min) -100% (20min) -100% (22min) -65% (22.5min) -65% (25min) 6. Thời gian lưu của một. Neoxanthin đỉnh hỗn hợp: 5,79, loại trừ b. Violaxanthin: 6.99 min c. Lutein: 9.4 d. Beta-carotene: 15.4 e. 2 carotenoid không rõ: 4,91 và 10,14 f. Chất diệp lục b: 12,68 g. Chlorophyll a: 13.22 A450 cho carotenoids, A450 và A650 cho chất diệp lục Phương pháp lưu như EPCAROT.m Từ Adela sanchez: Rosette mô lá ủ trong acetone trước ướp lạnh và lắc trong lạnh / tối cho 2h. Máy ly tâm. (Hãy nổi và) khai thác lặp lại hai lần nữa. Khô chiết xuất dưới N2. Redissolve trong 4: 1 v / v acetone: nước. Trích lọc qua bông. Chạy trên HPLC với ngắn RP-S cột, 20C, 1.5ml / suất min dòng chảy với acetone và nước làm dung môi. Thời gian lưu: neoxanthin (5.0min), violaxanthin (6.6min), beta carotene (15.7min ), chất diệp lục b (13.25 min), chlorophyll a (13,6 phút)