Total RNA was extracted by the meth

Total RNA was extracted by the method of Chomczynski and Sac-chi
. Semi-quantitative RT-PCR was modified from Steel and Buckley
. In brief, cDNA reverse-transcribed from 250 ng of total RNA was amplified in PCR buffer containing primers and Taq poly-merase in an Amplitron II thermocycler. The cycling condition was95C 5 min, 37 cycles of 95C30s,57C 30 s and 7C 30 s, followed
by 72C for 5 min. The electrophoretic bands were analyzed with animage analyzer (Biorad Discovery Gel-Doc 2000).
For the Real time quantitative RT-PCR, amplification and calcula-tion were carried out according to the user's guide of the SYBR's Green PCR Master Mix kit. In brief, the reaction mixture contained
the SYBR's Green PCR Master Mix plus primers, and cDNA re-verse-transcribed from 250 ng of total RNA. Amplification was carried out in an ABI Prisma 7000 Sequence Detection System. The relative mRNA quantities of samples were automatically calculated by the computer from the calibration curve obtained from a ‘‘reference’’ cDNA run in parallel with the samples. Data were finally normalized by respective b-actin values from the same run and expressed as percent of the 10 min DMSO treated sample

Kết quả (Việt) 1:

Tất cả RNA được chiết xuất bằng phương pháp Chomczynski và Sac-chi. RT-PCR định lượng bán sửa đổi từ thép và Buckley. Tóm lại, cDNA đảo ngược-sao chép lại từ 250 ng tất cả RNA được khuếch đại trong vùng đệm PCR có chứa chất nền, mồi và Taq poly-merase trong một thermocycler Amplitron II. Đi xe đạp tình trạng was95C 5 phút, các chu kỳ 37 của 95C30s, 57C 30 s và s 7C 30, theo sau72 c trong 5 phút. Các ban nhạc electrophoretic được phân tích với animage analyzer (Biorad Discovery Gel-Doc 2000).Thời gian thực định lượng RT-PCR, khuếch đại và calcula-tion đã được thực hiện theo hướng dẫn của các SYBR màu xanh lá cây chủ PCR Mix kit. Tóm lại, các phản ứng hỗn hợp chứaGreen PCR Master Mix của SYBR cộng với chất nền, mồi và cDNA re-verse-sao chép lại từ 250 ng tất cả RNA. Khuếch đại được tiến hành trong một ABI Prisma 7000 chuỗi hệ thống phát hiện. Với số lượng mRNA tương đối của các mẫu đã được tự động tính bằng máy tính từ đường cong hiệu chuẩn được lấy từ một cDNA '' tham khảo '' chạy song song với các mẫu. Dữ liệu được chuẩn hoá cuối cùng của b-actin tương ứng giá trị từ giống nhau chạy và thể hiện như phần trăm của 10 phút DMSO xử lý mẫu

Kết quả (Việt) 2:

Tổng số RNA đã được chiết xuất bằng phương pháp Chomczynski và Sắc-chi
. Bán định lượng RT-PCR đã được sửa đổi từ thép và Buckley
. Nói tóm lại, cDNA ngược-phiên mã từ 250 ng tổng RNA đã được khuếch đại trong đệm PCR chứa đoạn mồi và Taq poly-merase trong một thermocycler Amplitron II. Các điều kiện đi xe đạp was95C 5 phút, 37 chu kỳ của 95C30s, 57C 30 s và 7C 30 s, theo sau
bởi 72C trong 5 phút. Các băng điện di được phân tích với Animage phân tích (BioRad Discovery Gel-Doc 2000).
Trong thời gian Bất định lượng RT-PCR, khuếch đại và calcula-tion được thực hiện theo hướng dẫn của người sử dụng bộ xanh PCR Master Mix của SYBR. Nói tóm lại, hỗn hợp phản ứng chứa
Xanh PCR Master Mix cộng mồi của SYBR, và cDNA tái-verse-phiên mã từ 250 ng tổng RNA. Khuếch đại được thực hiện trong một ABI Prisma 7000 Chuỗi Hệ thống phát hiện. Số lượng mRNA tương đối của mẫu được tính toán tự động bằng máy tính từ đường chuẩn thu được từ một '' tham khảo '' cDNA chạy song song với các mẫu. Dữ liệu cuối cùng đã được bình thường hóa bởi các giá trị b-actin tương ứng từ chạy cùng và thể hiện theo phần trăm của 10 phút DMSO xử lý mẫu