NaC1 was added to the supernatant t

NaC1 was added to the supernatant to a final
concentration of 1.4M. A 1/10 vol of CTAB (mixed alkyltrimethylammonium
bromide) solution (10% CTAB, 500mM
Tris-HC1 pH 8, 100 mM EDTA) was then added and the mixture
was incubated with gentle stirring for 10rain at 65 ~ One volume of chloroform:isoamylalcohot (24:1) was added and,after mixing, the solution was centrifuged for 5 min at 3,500 g at 20 ~ The supernatant was mixed with 2.5 vol of ethanol to precipitate high-molecular-weight DNA which was then washed in 76% ethanol-0.2 M NaOAc and resuspended in TE (10 mM Tris-HC1 pH 8, 1 mM EDTA pH 8). RNase digestion was performed for 45min at 37~ A final standard henol:chloroform:isoamylalcohol (25:24:1) extraction was carried out to further purify the DNA. Nuclear DNA was digested with either EcoRI or PstI and was then size-separated on a 10 40% sucrosegradient (Sambrook et al. 1989).

Kết quả (Việt) 1:

NaC1 đã được thêm vào supernatant cho một trận chung kếtnồng độ 1.4M. Một vol 1/10 của CTAB (alkyltrimethylammonium hỗn hợpgiải pháp bromua) (10% CTAB, 500 mMTris-HC1 pH 8, 100 mM EDTA) sau đó đã được bổ sung và hỗn hợpđược ủ với nhẹ nhàng khuấy cho 10rain tại 65 ~ một khối lượng cloroform: isoamylalcohot (24:1) đã được thêm vào, và sau khi trộn, các giải pháp được ly trong 5 phút tại 3.500 g tại 20 ~ supernatant được trộn với 2.5 vol ethanol để kết tủa cao trọng phân tử DNA được sau đó được rửa trong 76% ethanol-0,2 M NaOAc và resuspended ở TE (10 mM Tris-HC1 pH 8 1 mM EDTA pH 8). RNase tiêu hóa được thực hiện cho 45 phút tại 37 ~ khai thác cuối cùng tiêu chuẩn henol:chloroform:isoamylalcohol (25:24:1) được thực hiện để tiếp tục làm sạch các DNA. DNA hạt nhân được tiêu hóa với EcoRI hoặc PstI và sau đó tách ra kích thước trên 40% 10 một sucrosegradient (Sambrook et al. 1989).

Kết quả (Việt) 2:

NaC1 đã được thêm vào nổi đến một thức
nồng độ 1.4M. Một vol 1/10 CTAB (hỗn hợp alkyltrimethylammonium
bromide), giải pháp (10% CTAB, 500mm
Tris-HC1 pH 8, 100 mM EDTA) sau đó được thêm vào và hỗn hợp này
được ủ với khuấy nhẹ nhàng cho 10rain 65 ~ Một khối lượng chloroform: isoamylalcohot (24: 1) đã được bổ sung và, sau khi trộn, các giải pháp được ly tâm trong 5 phút ở 3.500 g ở 20 ~ sự nổi được trộn với 2,5 vol ethanol để kết tủa DNA trọng lượng phân tử cao sau đó được rửa trong 76% ethanol 0,2 M NaOAc và lơ lửng trong TE (10 mM Tris-HC1 pH 8, 1 mM EDTA pH 8). RNase tiêu hóa đã được thực hiện cho 45min ở 37 ~ Một henol tiêu chuẩn cuối cùng: chloroform: isoamylalcohol (25: 24: 1) khai thác được thực hiện để làm sạch thêm DNA. DNA hạt nhân đã được tiêu hóa với một trong hai EcoRI hoặc PstI và sau đó đã được kích thước phân cách trên sucrosegradient 10 40% (Sambrook và cộng sự. 1989).