Virus  isolation  is  traditionally

Virus  isolation  is  traditionally  the  definitive  criterion 
against  which  other  diagnostic  methods  are  assessed. 
Viruses are obligatory intracellular parasites and can only 
be  isolated  in  living systems.  Isolation of a virus may be 
carried out  in  cell monolayers,  fertile  eggs or  laboratory 
animals  (Fig.  5.1).  Thankfully,  the  use  of  laboratory 
animals has largely been supplanted. The vast majority of 
virus isolation is carried out in cells. Cell culture involves 
the growth of cells in vitro as monolayers attached to the 
surface of a glass or plastic culture vessel or, less frequently, 
as suspensions. Cell monolayers may be primary or con-
tinuous. A primary  cell  line  is one derived  from  cells or 
tissue  taken  directly  from  the  animal.  Foetal  tissues  are 
frequently used as they grow well, disaggregate easily and 
the cells tend to be more permissive than those originating 
from  adult  tissue. Primary  cell  lines  are  labour-intensive 
to prepare and die or exhibit a decline  in permissiveness 
after a limited number of passages. They have a finite life 
span.  Thus, whenever possible, most  laboratories opt  to 
use  continuous or  established  cell  lines.  These  cell  lines 
are  usually  available  commercially  and  are  capable  of 
extended or  indefinite propagation.  They originate  from 
malignant neoplasms or transformed cell lines. Many have 
a narrower range of virus susceptibilities than do primary 
cell lines. There is no single cell line that is susceptible to 
all viruses. Thus, the laboratory has to choose cell lines for 
routine use that are permissive for the viruses most com-
monly encountered.
Virus  replication  in  cells  is  detected  by  observing  the 
cytopathic effect (CPE) or  the  formation of plaques,  that 
is,  areas of  cell  lysis which do not  take up  stain  such  as neutral red. Inoculated cell monolayers are observed daily 
by microscopy  for many  days. Many  viruses  produce  a 
characteristic type of CPE. When no CPE is observed blind 
passaging of the supernatant onto a fresh monolayer may 
result  in  amplification  of  virus,  facilitating  detection. 
Samples  that  are  contaminated may  require  filtering  to 
remove  bacteria  or  fungi  prior  to  inoculation.  Some 
viruses  are  non-cytopathic  but  can  be  detected  by  a   
characteristic  property.  For  example,  some  viruses  of   
the orthomyxovirus and paramyxovirus groups cause  the 
adherence of erythrocytes  to cells (haemadsorption) and 
some  viruses  agglutinate  erythrocytes  (haemagglutina-
tion). Non-cytopathic viruses can also be detected in cell 
culture  supernatant  by  the  detection  of  viral  antigen  by 
immunofluorescence or immunoenzyme techniques or by 
detection of nucleic acid by the polymerase chain reaction 
(PCR) (see Chapter 4).
Some  viruses,  for  example  certain  strains  of  influenza 
and bluetongue virus, grow more readily in embryonated 
eggs  than  in  tissue culture. Fertile eggs  for virus  isolation 
should, if possible, be obtained from a specific pathogen-
free  flock  to  minimize  problems  with  egg-transmitted 
viruses and maternal antibody. Before inoculation the eggs 
are candled to ensure the embryo is alive and to mark the 
position of  the  air  sac  and  the major blood  vessels. The 
eggs  are  inoculated between days five  and 14 of  incuba-
tion, depending on the route used (allantoic or amniotic 
cavity,  yolk  sac,  chorioallantoic  membrane  or  intravenous). Virus introduced into the allantoic cavity replicates 
in  the  endodermal  cells  of  the  allantois  and  is  released 
into the allantoic fluid. Virus introduced into the amniotic 
cavity  enters  the  respiratory  and  digestive  tracts  of  the 
embryo  and may  therefore  replicate  in  a  variety  of  cell 
types depending on  the  tropism of  the  virus.  These  two

Kết quả (Việt) 2:

Phân lập vi rút là truyền thống tiêu chí dứt khoát 
chống lại những phương pháp chẩn đoán khác được đánh giá. 
Virus là những ký sinh trùng nội bào bắt buộc và chỉ có thể 
được cô lập trong hệ thống sống. Phân lập một virus có thể được 
thực hiện tại các đơn lớp tế bào, trứng màu mỡ hoặc phòng thí nghiệm 
động vật (Hình. 5.1). Rất may, việc sử dụng các phòng thí nghiệm 
động vật phần lớn đã được thay thế. Phần lớn các 
phân lập virus được thực hiện trong các tế bào. Nuôi cấy tế bào liên quan đến 
sự tăng trưởng của các tế bào trong ống nghiệm là đơn lớp gắn vào 
bề mặt của một thủy tinh hoặc nhựa tàu văn hóa hay, ít thường xuyên, 
như hệ thống treo. Đơn lớp tế bào có thể được chính hoặc con-
tinuous. Một dòng tế bào chính là một trong những nguồn gốc từ tế bào hoặc 
mô lấy trực tiếp từ động vật. Mô thai nhi được 
thường xuyên sử dụng khi họ phát triển tốt, phân tách một cách dễ dàng và 
các tế bào có xu hướng có nhiều dãi hơn những người có nguồn gốc 
từ tế bào trưởng thành. Dòng tế bào chính là lao động 
để chuẩn bị và chết hoặc triển lãm một sự suy giảm trong dãi 
sau khi một số giới hạn các đoạn văn. Họ có một cuộc sống hữu hạn 
span. Vì vậy, bất cứ khi nào có thể, hầu hết các phòng thí nghiệm lựa chọn để 
sử dụng các dòng tế bào liên tục hoặc thành lập. Những dòng tế bào 
thường có sẵn thương mại và có khả năng 
tuyên truyền, mở rộng hoặc không thời hạn. Chúng bắt nguồn từ 
u ác tính hay các dòng tế bào biến đổi. Nhiều người có 
một phạm vi hẹp hơn của tính nhạy cảm vi rút hơn làm chính 
dòng tế bào. Không có dòng tế bào duy nhất đó là nhạy cảm với 
tất cả các loại virus. Do đó, các phòng thí nghiệm có để lựa chọn dòng tế bào cho 
sử dụng thông thường mà là dễ dãi cho các virus biến nhất
monly gặp phải.
Virus nhân lên trong tế bào được phát hiện bằng cách quan sát các 
hiệu ứng bệnh lý tế bào (CPE) hoặc hình thành các mảng, đó 
là, lĩnh vực di động ly giải mà không mất vết như đỏ trung tính. Đơn lớp tế bào được cấy được theo dõi hàng ngày 
bằng kính hiển vi trong nhiều ngày. Nhiều virus tạo ra một 
loại đặc trưng của CPE. Khi không có CPE được quan sát thấy mù 
passaging của nổi lên một lớp đơn tươi có thể 
dẫn đến sự khuếch đại của virus, tạo điều kiện phát hiện. 
Các mẫu đang bị ô nhiễm có thể yêu cầu lọc để 
loại bỏ vi khuẩn hoặc nấm trước khi tiêm. Một số 
virus là không bệnh lý tế bào nhưng có thể được phát hiện bởi một   
tài sản đặc trưng. Ví dụ, một số virus của   
các nhóm orthomyxovirus và paramyxovirus gây ra sự 
tuân thủ của hồng cầu đến các tế bào (haemadsorption) và 
một số virus ngưng kết hồng cầu (haemagglutina-
sự). Virus không bệnh lý tế bào cũng có thể được phát hiện trong tế bào 
bề văn hóa bằng việc phát hiện kháng nguyên virus bằng 
miễn dịch huỳnh quang hoặc immunoenzyme kỹ thuật hoặc bằng cách 
phát hiện acid nucleic bằng phản ứng chuỗi polymerase 
(PCR) (xem Chương 4).
Một số virus, cho một số chủng dụ cúm 
virus và bluetongue, phát triển dễ dàng hơn trong phôi 
trứng hơn trong nuôi cấy mô. Trứng màu mỡ để phân lập vi rút 
, nếu có thể, được lấy từ một pathogen- cụ
đàn miễn phí để giảm thiểu vấn đề với trứng truyền 
virus và kháng thể của người mẹ. Trước khi cấy trứng 
được candled để đảm bảo phôi thai vẫn còn sống và để đánh dấu 
vị trí của các túi khí và các mạch máu lớn. Các 
trứng được cấy giữa ngày năm và 14 của ủ bệnh
tion, tùy thuộc vào các tuyến đường được sử dụng (hoặc allantoic ối 
khoang, lòng đỏ túi, màng chorioallantoic hoặc tiêm tĩnh mạch). Virus được đưa vào khoang allantoic tái tạo 
trong các tế bào endodermal của allantois và được phát hành 
vào dịch allantoic. Virus giới thiệu vào ối 
khoang xâm nhập vào đường hô hấp và tiêu hóa của 
phôi và do đó có thể tái tạo trong một loạt các tế bào 
loại tùy thuộc vào ái tính của virus. hai