Materials and MethodsPatientsAfter

Materials and Methods
Patients
After obtaining approval from the Ethics Committee of Royan Institute
and informed written consent from patients, volunteers with
radiologic evidence of knee OA that necessitated joint replacement
surgery were recruited. Six female patients (Table 1) who met the
study inclusion criteria were entered into the study. The following
were inclusion criteria for the study: either male or female; ages 18
to 65; and OA diagnosed based on magnetic resonance imaging
(MRI). Patients with histories of taking corticosteroids or NSAIDs
were only eligible for enrollment if this treatment was suspended
for one month prior and six months after the study procedure. Exclusion
criteria included: diagnosis of malignancy; pregnancy or
lactating in female patients; active neurologic disorder; active endocrine
disorder (i.e., hypothyroidism and diabetes); active cardiac
or respiratory disease in need of medication; presence of infection
with hepatitis B, C, or HIV; and a history of allergic reaction to the
component of the study treatment. We enrolled six patients (F = 6,
mean age: 54.5 years) with advanced knee OA classi¿ed as stage
IV according to the Kellgren and Lawrence classi¿cation.
Bone marrow aspiration and culture
Patients were placed on an operating table in the prone position.
The indicated area was numbed with 1% lidocaine and we collected
about 50 ml of bone marrow from each patient’s iliac crest.
The samples were transferred to a clean room for cell isolation.
Bone marrow aspirate was added to 50 ml phosphate buffer saline
(PBS, Clinimax, Germany), then loaded onto a Lymphodex (InnoTrain,
Germany) and centrifuged at 1500 g for 20 minutes. Mononuclear
cells were then gently collected and counted using a nucleocounter
(Chemometec, USA). Bone marrow volumes as well
as the amount of mononuclear cells harvested from each sample
are shown in Table 1. Mononuclear cells were washed with PBS
and plated at 106
cells/cm2
in 150-cm2
culture Àask in 15 ml alpha
modi¿ed eagle medium (alpha MEM, Gibco, Germany) supplemented
with 100 IU penicillin and 100 IU streptomycin (Gibco,
Germany) and 10% hyclon bovine serum (Thermo Scienti¿c,
USA). Seven days after culture initiation, Àoating cells were removed
by medium replacement. The cells were expanded through
subcultures and passaged-2 cells were prepared for injection. For
each patient, the cells were characterized in terms of colonogenic
activity and expression of some surface markers. Prior to injection
the cells were tested for possible microbial contamination.

Kết quả (Việt) 2:

Vật liệu và phương pháp
bệnh nhân
Sau khi được sự chấp thuận của Ủy ban Đạo đức của Viện Royan
và thông báo đồng ý bằng văn bản của bệnh nhân, tình nguyện viên với
bằng chứng X quang của viêm khớp đầu gối mà đòi hỏi phải thay khớp
phẫu thuật đã được tuyển dụng. Sáu bệnh nhân nữ (Bảng 1), người đã gặp các
tiêu chuẩn thu nhận nghiên cứu được đưa vào nghiên cứu. Sau đây
là những tiêu chuẩn nhận vào nghiên cứu: không phân biệt nam hay nữ; độ tuổi từ 18
đến 65; và viêm khớp chẩn đoán dựa trên hình ảnh cộng hưởng từ
(MRI). Bệnh nhân có tiền sử về sử dụng Corticosteroid hoặc NSAIDs
chỉ đủ điều kiện để ghi danh nếu điều trị này đã bị đình chỉ
trong một tháng trước và sáu tháng sau khi các thủ tục nghiên cứu. Loại trừ
các tiêu chí bao gồm: chẩn đoán bệnh ác tính; mang thai hoặc
cho con bú ở những bệnh nhân nữ; rối loạn thần kinh hoạt động; nội tiết hoạt động
rối loạn (ví dụ, suy giáp và bệnh tiểu đường); tim hoạt động
hoặc bệnh hô hấp cần thuốc; sự hiện diện của nhiễm
viêm gan B, C, hoặc HIV; và tiền sử dị ứng với các
thành phần của điều trị nghiên cứu. Chúng tôi học sáu bệnh nhân (F = 6,
tuổi trung bình: 54,5 tuổi) bị viêm khớp đầu gối cao cấp classi¿ed như giai đoạn
. IV theo Kellgren và Lawrence classi¿cation
xương tủy và khát vọng văn hóa
Bệnh nhân được đặt trên một bảng điều hành ở những người dễ bị vị trí.
Các khu vực chỉ định đã được gây tê với 1% lidocaine và chúng tôi thu thập được
khoảng 50 ml tủy xương từ xương chậu của mỗi bệnh nhân.
Các mẫu được chuyển đến một căn phòng sạch cho các tế bào cô lập.
tủy xương hút được thêm vào 50 ml dung dịch muối đệm phosphate
( PBS, Clinimax, Đức), sau đó nạp vào một Lymphodex (InnoTrain,
Đức) và ly tâm ở 1500 g trong 20 phút. Đơn nhân
tế bào được thu thập sau đó nhẹ nhàng và tính sử dụng một nucleocounter
(Chemometec, USA). Khối lượng xương tủy cũng
như số lượng các tế bào bạch cầu đơn nhân thu hoạch từ mỗi mẫu
được trình bày trong Bảng 1. Tế bào đơn nhân đã được rửa bằng PBS
và mạ tại 106
tế bào / cm2
trong 150 cm2
văn hóa Àask trong 15 ml alpha
modi¿ed trung đại bàng ( alpha MEM, Gibco, Đức) bổ sung
với 100 IU penicillin và 100 IU streptomycin (Gibco,
Đức) và 10% hyclon bò huyết thanh (Thermo Scienti¿c,
USA). Bảy ngày sau khi bắt đầu nuôi cấy, các tế bào Àoating đã được gỡ bỏ
bằng cách thay thế trung bình. Các tế bào được mở rộng thông qua các
nền văn hóa khác và cấy truyền-2 tế bào đã được chuẩn bị để tiêm. Đối với
mỗi bệnh nhân, các tế bào này được đặc trưng về colonogenic
hoạt động và biểu hiện của một số dấu hiệu bề mặt. Trước khi tiêm
các tế bào đã được thử nghiệm cho các vi sinh vật có thể.