Expression levels were examined for

Expression levels were examined for hormone biosynthesis
genes that control embryo development. They included
YUCCA genes, which are involved in auxin biosynthesis
(Yamamoto et al., 2007), and GA20 oxidases and GA3 oxidases
that produce bioactive gibberellins (GAs) (Pearce et al., 2015).
Transcript levels of all five OsYUCCA genes (OsYUCCA1–
OSYUCCA5) were significantly reduced in the mutant
embryos (Supplementary Fig. S4A–E). Similarly, expression
levels of OsGA20 oxidase genes (OsGA20 OX-1 and OsGA20
OX-2) and OsGA3 oxidase genes (OsGA3 OX-1 and OsGA3
OX-2) were reduced in the mutant embryos (Supplementary
Fig. S4F-I). This result supports our conclusion that mutations
in OsMPK6 affect early embryo development.
Phytoalexin biosynthesis is defective in osmpk6
mutants
OsMPK6 controls the biosynthesis of phytoalexins such as
momilactones and phytocassanes (Kishi-Kaboshi et al., 2010).
Therefore, we monitored expression levels of momilactone biosynthesis
genes ent-copalyl diphosphate synthase 4 (OsCPS4),
Cyclase 1 (OsCPS4), kaurene synthase-like gene 4 (OsKSL4),
CYP99A2, CYP99A3, and momilactone A synthase (OsMAS).
OsCPS4 and OsKSL4 are involved in the cyclization of geranylgeranyl
diphosphate, a precursor of diterpenoid phytoalexins
(Otomo et al., 2004; Wilderman et al., 2004). CYP99A2
and CYP99A3, which encode cytochrome P450 monooxygenases,
participate in the downstream oxidation steps of diterpene
hydrocarbons (Wang et al., 2011). OsMAS encodes a
dehydrogenase that is also involved in momilactone biosynthesis
(Shimura et  al., 2007). We found that expression levels
of the momilactone biosynthesis genes were significantly
decreased in the mutant embryos (Fig.  8A–E). In addition,
we analysed transcript levels of OsCPS2, which is involved
in the biosynthesis of phytocassanes. Its expression was also
diminished in the osmpk6-1 mutant embryos (Fig. 8F). These
findings indicate that OsMPK6 is involved in the biosynthesis
of phytoalexins in developing embryos.
To verify further the biosynthetic regulation of phytoalexins
by OsMPK6, we measured phytoalexin levels in embryos
from mature seeds of the WT and mutant in response to
elicitors. Treatment with flg22 and chitin induced accumulation
of the major diterpenoid phytoalexin momilactone
A in WT embryos, but elicitor-induced accumulation of the
phytoalexin was significantly reduced in osmpk6-1 embryos,
and comparable to those of mock-treated controls (Fig. 9).
This result is consistent with the decreased expression of
phytoalexin biosynthesis genes found in the mutant embryos

Kết quả (Việt) 1:

Mức độ biểu hiện đã được kiểm tra cho sinh tổng hợp hormongen điều khiển sự phát triển của phôi thai. Họ bao gồmYUCCA gen, trong đó có liên quan trong sinh tổng hợp auxin(Yamamoto et al., 2007), và GA20 oxidases và GA3 oxidasessản xuất các gibberellin hoạt tính sinh học (khí) (Pearce và ctv., năm 2015).Bảng điểm cấp của tất cả năm OsYUCCA gen (OsYUCCA1-OSYUCCA5) đã được giảm đáng kể trong đột biếnphôi (bổ sung sung. S4A–E). Tương tự, biểu hiệnmức độ OsGA20 oxidase gen (OsGA20 OX-1 và OsGA20Ox-2) và OsGA3 oxidase gen (OsGA3 OX-1 và OsGA3Ox-2) đã được giảm trong đột biến phôi (bổHình. S4F-I). Kết quả này hỗ trợ của chúng tôi kết luận rằng đột biếntrong OsMPK6 ảnh hưởng đến giai đoạn phôi phát triển.Sinh tổng hợp phytoalexin được là khiếm khuyết trong osmpk6người đột biếnOsMPK6 kiểm soát sinh tổng hợp phytoalexins nhưmomilactones và phytocassanes (Kishi-Kaboshi và ctv., 2010).Vì vậy, chúng tôi theo dõi mức độ biểu hiện của sinh tổng hợp momilactonegen ent-copalyl diphosphate synthase 4 (OsCPS4),Cyclase 1 (OsCPS4), kauren synthase như gen 4 (OsKSL4),CYP99A2, CYP99A3 và momilactone A synthase (OsMAS).OsCPS4 và OsKSL4 được tham gia vào cyclization geranylgeranyldiphosphate, một tiền chất của diterpenoid phytoalexins(Otomo et al, 2004; Wilderman et al, 2004). CYP99A2và CYP99A3, mà mã hóa cytochrome P450 monooxygenases,tham gia vào các bước quá trình oxy hóa hạ lưu của diterpenhydrocarbon (Wang và ctv., năm 2011). OsMAS mã hóa mộtdehydrogenase đó cũng tham gia vào sinh tổng hợp momilactone(Shimura et al., 2007). Chúng tôi thấy rằng biểu hiện mức độmomilactone gen sinh tổng hợp một cách đáng kểgiảm trong đột biến phôi (hình 8A-E). Ngoài rachúng tôi phân tích các cấp bảng điểm của OsCPS2, mà là có liên quantrong sinh tổng hợp của phytocassanes. Biểu hiện của nó cũnggiảm bớt trong osmpk6-1 đột biến phôi (hình 8F). Nhữngkết quả chỉ ra rằng OsMPK6 là tham gia vào sinh tổng hợpcủa phytoalexins trong việc phát triển phôi.Để xác minh tiếp tục quy định viêm của phytoalexinsbởi OsMPK6, chúng tôi đo phytoalexin được cấp trong phôitừ hạt trưởng thành của WT và đột biến để đáp ứng vớielicitors. Điều trị với flg22 và chitin gây tích lũycủa chính diterpenoid phytoalexin được momilactoneA trong WT phôi, nhưng elicitor gây ra sự tích tụ của cácphytoalexin được được giảm đáng kể trong phôi osmpk6-1,và so sánh với những người điều khiển mô hình điều trị (hình 9).Kết quả này là phù hợp với các biểu hiện giảmGene sinh tổng hợp phytoalexin được tìm thấy trong các phôi đột biến

Kết quả (Việt) 2:

Mức độ biểu hiện đã được kiểm tra sinh tổng hợp hormone
gen kiểm soát sự phát triển của phôi. Họ bao gồm
các gen YUCCA, được tham gia vào sự tổng hợp auxin
(Yamamoto et al., 2007), và oxidase GA20 và oxidase GA3
sản xuất giberelin hoạt tính sinh học (khí) (Pearce et al., 2015).
Mức Transcript của tất cả năm gen OsYUCCA ( OsYUCCA1-
OSYUCCA5) đã giảm đáng kể trong những đột biến
phôi (bổ sung hình. S4A-E). Tương tự như vậy, biểu hiện
mức độ gen OsGA20 oxidase (OsGA20 OX-1 và OsGA20
OX-2) và gen OsGA3 oxidase (OsGA3 OX-1 và OsGA3
OX-2) đã giảm trong phôi đột biến (bổ sung
hình. S4F-I). Kết quả này hỗ trợ kết luận của chúng tôi rằng những đột biến
trong OsMPK6 ảnh hưởng đến sự phát triển phôi sớm.
Phytoalexin sinh tổng hợp là khiếm khuyết trong osmpk6
đột biến
OsMPK6 điều khiển sinh tổng hợp các phytoalexin như
momilactones và phytocassanes (Kishi-Kaboshi et al., 2010).
Vì vậy, chúng tôi giám sát mức độ biểu hiện của momilactone sinh tổng hợp
gen ent-copalyl diphosphate synthase 4 (OsCPS4),
cyclase 1 (OsCPS4), kaurene gen synthase giống như 4 (OsKSL4),
CYP99A2, CYP99A3, và momilactone A synthase (OsMAS).
OsCPS4 và OsKSL4 được tham gia vào việc tạo vòng của geranylgeranyl
diphosphate, một tiền chất của phytoalexin diterpenoid
(Otomo et al, 2004;. Wilderman et al., 2004). CYP99A2
và CYP99A3, trong đó mã hóa monooxygenases P450,
tham gia vào quá trình oxy hóa các bước hạ lưu của diterpene
hydrocarbon (Wang et al., 2011). OsMAS mã hóa một
dehydrogenase đó cũng tham gia vào momilactone sinh tổng hợp
(Shimura et al., 2007). Chúng tôi thấy rằng mức độ biểu hiện
của các gen sinh tổng hợp momilactone được đáng kể
giảm trong phôi đột biến (Hình. 8A-E). Ngoài ra,
chúng tôi phân tích mức độ bảng điểm của OsCPS2, được tham gia
vào quá trình tổng hợp của phytocassanes. Biểu hiện của nó cũng đã được
giảm bớt trong phôi đột biến osmpk6-1 (Hình. 8F). Những
phát hiện này chỉ ra rằng OsMPK6 được tham gia vào quá trình tổng hợp
của phytoalexin trong phát triển phôi.
Để xác minh thêm quy chế sinh tổng hợp của phytoalexin
bởi OsMPK6, chúng tôi đo mức phytoalexin trong phôi
từ hạt trưởng thành của WT và đột biến để đáp ứng với
elicitor. Điều trị bằng flg22 và chitin gây ra sự tích tụ
của các chính phytoalexin diterpenoid momilactone
Một trong phôi WT, nhưng tích lũy elicitor gây ra các
phytoalexin đã giảm đáng kể trong phôi osmpk6-1,
và so sánh với những người điều khiển mô hình điều trị (Hình 9)..
kết quả này phù hợp với các biểu hiện giảm của
gen sinh tổng hợp phytoalexin tìm thấy trong phôi đột biến