Collection and Preparation of serum

Collection and Preparation of serum

Coagulate blood and remove serum. Freeze sample at -20 ºC or lower if not used immediately.

Do not heat inactivate serum and avoid repeated freezing and thawing of samples.

Test samples: Make a 1:64 dilution of patient’s sera using the dilution buffer (e.g. 5 µl sera and 315 µl dilution buffer).

ASSAY PROCEDURE
Notes:
• Ensure all samples and reagents are at room temperature (15-25 °C)

• When running the assay, try to avoid the formation of bubbles in the wells. Bubbles may affect overall performance and reading of end results. Slapping the wells out on a clean absorbent towel after each step should help to minimize bubbles in the wells.

• Negative and positive controls are supplied pre-diluted. DO NOT dilute further.

1. Break off number of wells needed (two for controls plus number of samples) and place in strip holder.

2. Dilute patient sera 1:64 in Dilution Buffer (e.g. 5 µl sera and 315 µl dilution buffer). Add 100 µl of the negative control to well #1, 100 µl of the positive control to well #2 and 100 µl of the diluted (1:64) test samples to the remaining wells.

3. Incubate at room temperature (15 to 25 ºC) for 10 minutes, then wash*. After last wash step, slap the wells on a clean absorbent towel to remove excess wash buffer.

4. Add 100 µl of Enzyme Conjugate to each well.

5. Incubate at room temperature for 5 minutes, then wash*. After last wash step, slap the wells on a clean absorbent towel to remove excess wash buffer.

6. Add 100 µl of the Chromogen to every well.
7. Incubate at room temperature for 5 minutes.

8. Add 100 µl of the Stop Solution to each well. Mix wells by gently tapping the side of the strip holder with index finger for approximately 15 seconds.

* Washings consist of vigorously filling each well to overflowing and decanting contents three (3) separate times. When possible, avoid formation of bubbles in the wells as this may affect the end results.


A negative OD reading indicates that the patient has no detectable level of antibodies. This may be due to lack of infection or poor immune response by the patient.

Interpretation of the Test- Visual

Compare results to the controls. A sample should be interpreted as positive if the degree of color is significant and obvious.

QUALITY CONTROL

The use of controls allows validation of kit stability. The kit should not be used if any of the controls are out of range.

Expected values for the controls are: Negative - 0.0 to 0.2 OD units

Positive - 0.5 OD units and above
EXPECTED VALUES

The number of individuals showing positive results can vary significantly between populations and geographic regions. If possible, each laboratory should establish an expected range for its patient population.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS

Study #1 – Canadian Reference Center

Compared Diagnostic Automation, Inc. ELISA kit to another commercial ELISA. Found concordance of 84% (n=82).

Study #2 – Mayo Clinic

Reference Method *
+ -
Diagnostic + 21 1
Automation,Inc. - 3 14
Specificity of 87.5% (21/24)
Sensitivity of 93.3% (14/15)
*Reference Method refers to a commercially available ELISA.


RESULTS

Visually: Look at each well against a white background (e.g. paper towel) and record as clear or +, ++ or +++ reaction.

ELISA Reader: Zero reader on air. Set for bichromatic readings at 450/620-650 nm.


LIMITATIONS OF PROCEDURE

Serologic results are an aid in diagnosis but cannot be used as the sole method of diagnosis.



Troubleshooting

Negative control has excessive color after development. Reason: inadequate washings.

Correction: wash more vigorously. Remove excessive liquid from the wells by tapping against an absorbent towel. Do not allow test wells to

dry out.

Interpretation of the Test- ELISA Reader

Zero ELISA reader on air. Read all wells at 450/620-650 nm. Positive - Absorbance reading greater than or equal to 0.2 OD units. Negative - Absorbance reading less than 0.2 OD units.

A positive OD reading indicates that the patient may be infected by Toxocara.




DAI CODE #35


PRECAUTIONS

• Do not deviate from the specified procedures when performing this assay. All specimen dilutions, incubation times/temperatures and washings have been optimized for the best performance characteristics. Deviations from the specified procedures may affect the sensitivity and specificity of the assay.

• For In Vitro Diagnostic Use Only.
• Do not interchange reagents between kits with different lot numbers.

• Do not use reagents that are beyond their expiration dates. Expiration dates are on each reagent label. Use of reagents beyond their expiration dates may affect results.

• Unused microwells should be stored in the desiccated pouch to protect them from moisture.
• Do not use solutions if they precipitate or become cloudy.

Exception: Wash concentrate may precipitate d

Kết quả (Việt) 1:

Bộ sưu tập và chuẩn bị của huyết thanhLàm máu và loại bỏ các huyết thanh. Đóng băng mẫu tại-20 ºC hoặc thấp hơn nếu không được sử dụng ngay lập tức.Không nóng bất hoạt huyết thanh và tránh lặp đi lặp lại đóng băng và tan băng các mẫu.Kiểm tra mẫu: thực hiện một pha loãng 1: 64 trong huyết thanh của bệnh nhân bằng cách sử dụng bộ đệm pha loãng (ví dụ: 5 ml huyết thanh và 315 ml pha loãng đệm).THỦ TỤC KHẢO NGHIỆMGhi chú:• * Bảo đảm tất cả các mẫu và các chất phản ứng ở nhiệt độ phòng (15-25 ° C)• Khi chạy các khảo nghiệm, cố gắng tránh sự hình thành các bong bóng trong các giếng. Bong bóng có thể ảnh hưởng đến hiệu suất tổng thể và đọc kết quả cuối cùng. Tát giếng ra trên một chiếc khăn sạch thấm nước sau mỗi bước sẽ giúp giảm thiểu các bong bóng trong các giếng.• Tích cực và tiêu cực điều khiển được cung cấp trước khi pha loãng. KHÔNG pha loãng hơn nữa.1. chia ra số lượng giếng cần (hai cho kiểm soát cộng với số mẫu) và đặt trong dải chủ.2. pha loãng 1: 64 huyết thanh bệnh nhân trong vùng đệm pha loãng (ví dụ: 5 ml huyết thanh và 315 ml pha loãng đệm). Thêm 100 ml của kiểm soát tiêu cực cũng # 1, 100 ml của bộ điều khiển tích cực để Vâng #2 và 100 ml pha loãng (1: 64) mẫu thử nghiệm cho các giếng còn lại.3. ấp cho nở ở nhiệt độ phòng (15 đến 25 ºC) cho 10 phút, sau đó rửa *. Sau khi rửa bước cuối cùng, tát giếng vào một chiếc khăn sạch thấm nước để loại bỏ dư thừa rửa bộ đệm.4. thêm 100 ml của enzym liên hợp vào mỗi tốt.5. ấp cho nở ở nhiệt độ phòng trong 5 phút, sau đó rửa *. Sau khi rửa bước cuối cùng, tát giếng vào một chiếc khăn sạch thấm nước để loại bỏ dư thừa rửa bộ đệm.6. thêm 100 ml là Chromogen cho mỗi tốt.7. ấp cho nở ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.8. thêm 100 ml của giải pháp ngăn để mỗi tốt. Mix wells bằng cách khai thác bên giữ dải với ngón tay nhẹ nhàng trong khoảng 15 giây.* Rửa bao gồm mạnh mẽ điền mỗi nội dung tốt đến tràn và gạn ba (3) lần riêng biệt. Khi có thể, tránh sự hình thành của các bong bóng trong các giếng như này có thể ảnh hưởng đến kết quả cuối cùng. Đọc OD phủ định chỉ ra rằng bệnh nhân đã có mức độ phát hiện của kháng thể. Điều này có thể do thiếu của nhiễm trùng hoặc đáp ứng miễn dịch của bệnh nhân.Giải thích của các bài kiểm tra nhìnSo sánh các kết quả để điều khiển. Một mẫu nên được hiểu là tích cực, nếu mức độ của màu sắc là đáng kể và rõ ràng.KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNGSử dụng điều khiển cho phép xác nhận của bộ ổn định. Các kit không nên được sử dụng nếu bất kỳ của các điều khiển ra khỏi phạm vi.Dự kiến giá trị cho các điều khiển là: tiêu cực - 0.0 đến 0,2 OD đơn vịTích cực - cách 0.5 OD đơn vị trở lênGIÁ TRỊ DỰ KIẾNSố lượng cá nhân Hiển thị kết quả tích cực có thể khác nhau đáng kể giữa dân cư và khu vực địa lý. Nếu có thể, mỗi phòng thí nghiệm nên thiết lập một phạm vi dự kiến cho dân số bệnh nhân.HIỆU SUẤT ĐẶC TÍNH#1-Canada tham khảo Trung tâm nghiên cứuSo sánh chẩn đoán tự động hóa, Inc ELISA kit ELISA thương mại khác. Tìm thấy concordance 84% (n = 82).Học tập #2-Mayo Clinic Tham khảo phương pháp * + - Chẩn đoán + 21 1 Tự động hóa, Inc - 3 14Đặc trưng của Rađio 87.5% (21/24) Độ nhạy của 93,3% (14/15) * Tham khảo phương pháp dùng để chỉ một ELISA thương mại có sẵn. KẾT QUẢTrực quan: Xem mỗi tốt đối với một nền trắng (ví dụ như khăn giấy) và ghi lại như là rõ ràng hay +, c++ hay +++ phản ứng.ELISA Reader: Zero reader về máy. Thiết lập cho các bài đọc bichromatic tại 450/620-650 nm. HẠN CHẾ CỦA THỦ TỤCSerologic kết quả là một sự trợ giúp trong chẩn đoán nhưng không thể được sử dụng như là phương pháp duy nhất của chẩn đoán. Giải đáp thắc mắcTiêu cực điều khiển có quá nhiều màu sắc sau khi phát triển. Lý do: không đủ rửa.Chỉnh sửa: rửa mạnh mẽ hơn. Loại bỏ chất lỏng quá nhiều từ các giếng bằng cách khai thác đối với một khăn thấm nước. Không cho phép kiểm tra giếng đểkhô ra.Giải thích của người đọc thử nghiệm ELISAKhông đọc ELISA trên máy. Đọc tất cả giếng tại 450/620-650 nm. Tích cực – hấp thu đọc lớn hơn hoặc bằng cách 0.2 OD đơn vị. Negative – hấp thu đọc ít hơn cách 0.2 OD đơn vị.Một đọc OD tích cực cho thấy rằng các bệnh nhân có thể bị nhiễm bởi Toxocara.ĐẠI MÃ #35 BIỆN PHÁP PHÒNG NGỪA• Không đi chệch khỏi các thủ tục quy định khi thực hiện khảo nghiệm này. Tất cả mẫu vật dilutions, ấp trứng lần / nhiệt độ và bồn rửa xe đã được tối ưu hóa cho các đặc tính hiệu suất tốt nhất. Độ lệch từ các thủ tục quy định có thể ảnh hưởng đến độ nhạy và đặc trưng của các khảo nghiệm.• Cho trong Vitro chẩn đoán sử dụng chỉ.• Không trao đổi chất giữa bộ tài liệu với số lượng khác nhau nhiều.• Không sử dụng thuốc thử vượt quá ngày hết hạn của họ. Ngày hết hạn trên mỗi nhãn tinh khiết. Sử dụng các hoá chất vượt quá ngày hết hạn của họ có thể ảnh hưởng đến kết quả.• Không sử dụng microwells nên được lưu trữ trong túi cơm để bảo vệ chúng khỏi độ ẩm.• Không sử dụng các giải pháp nếu họ kết tủa hoặc trở thành mây.Ngoại lệ: Wash đậm đặc có thể kết tủa d

Kết quả (Việt) 2:

Bộ sưu tập và chuẩn bị của huyết thanh

đông máu và loại bỏ huyết thanh. Freeze mẫu ở -20 ºC hoặc thấp hơn nếu không được sử dụng ngay lập tức.

Không làm nóng bất hoạt huyết thanh và tránh đông lặp đi lặp lại và tan băng mẫu.

Kiểm tra mẫu: Thực hiện một pha loãng 1:64 huyết thanh của bệnh nhân bằng cách sử dụng bộ đệm pha loãng (ví dụ như 5 ml huyết thanh và 315 . ml pha loãng đệm)

định lượng THỦ TỤC
Ghi chú:
• Đảm bảo tất cả các mẫu và thuốc thử là ở nhiệt độ phòng (15-25 ° C)

• Khi chạy thử nghiệm, cố gắng tránh sự hình thành của bong bóng trong giếng. Bubbles có thể ảnh hưởng đến hiệu suất tổng thể và đọc kết quả cuối cùng. Tát giếng ra trên một cái khăn thấm nước sạch sau mỗi bước sẽ giúp giảm thiểu các bong bóng trong giếng.

• Kiểm soát tiêu cực và tích cực được cung cấp trước khi pha loãng. KHÔNG pha loãng thêm.

1. Vỡ ra số giếng cần thiết (hai cho các điều khiển cộng với số lượng mẫu) và đặt trong ngăn chứa dải.

2. Pha loãng huyết thanh bệnh nhân 1:64 trong pha loãng đệm (ví dụ như 5 ml huyết thanh và 315 đệm pha loãng ml). Thêm 100 ml kiểm soát tiêu cực tới cũng # 1, 100 ml của sự kiểm soát tích cực làm tốt # 2 và 100 ml mẫu (1:64) thử nghiệm pha loãng vào các giếng còn lại.

3. Ủ ở nhiệt độ phòng (15-25 độ C) trong 10 phút, sau đó rửa *. Sau bước rửa cuối cùng, tát giếng trên một cái khăn thấm nước sạch để loại bỏ đệm rửa dư thừa.

4. Thêm 100 ml enzyme liên hợp với nhau tốt.

5. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút, sau đó rửa *. Sau bước rửa cuối cùng, tát giếng trên một cái khăn thấm nước sạch để loại bỏ đệm rửa dư thừa.

6. Thêm 100 ml của nhiễm sắc đến từng tốt.
7. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.

8. Thêm 100 ml dung dịch Stop để mỗi giếng. Trộn giếng bằng cách nhẹ nhàng nhấn vào phía bên của chủ sở hữu dải với ngón tay trỏ cho khoảng 15 giây.

* Rữa bao gồm mạnh mẽ đầy mỗi giếng tràn và gạn nội dung ba (3) lần riêng biệt. Khi có thể, tránh hình thành các bong bóng trong các giếng vì điều này có thể ảnh hưởng đến kết quả cuối cùng.


Một đọc OD âm cho thấy rằng những bệnh nhân không có mức độ phát hiện các kháng thể. Điều này có thể là do thiếu cơ nhiễm trùng hoặc phản ứng miễn dịch kém của bệnh nhân.

Giải thích các Test- trực quan

so sánh kết quả với các điều khiển. Một mẫu nên được hiểu là tích cực nếu mức độ của màu sắc là quan trọng và rõ ràng.

CHẤT LƯỢNG

Việc sử dụng các điều khiển cho phép xác nhận của sự ổn định bộ. Bộ kit không nên được sử dụng nếu bất kỳ điều khiển được ra khỏi phạm vi.

Giá trị mong đợi cho các điều khiển là: Negative - 0,0-0,2 OD đơn vị

tích cực - 0,5 OD đơn vị và trên
GIÁ TRỊ DỰ KIẾN

Số lượng cá thể hiển thị kết quả tích cực có thể khác nhau đáng kể giữa quần thể và vùng địa lý. Nếu có thể, mỗi phòng thí nghiệm nên thiết lập một phạm vi dự kiến cho các bệnh nhân của mình.

ĐẶC ĐIỂM THI

Nghiên cứu # 1 - Trung tâm tham khảo Canada

kit chẩn đoán So Automation, Inc. ELISA khác ELISA thương mại. Tìm thấy sự phù hợp của 84% (n = 82).

Nghiên cứu # 2 - Mayo Clinic

Phương pháp tham khảo *
+ -
Chẩn đoán + 21 1
Automation, Inc. - 3 14
đặc 87,5% (21/24)
nhạy 93,3% (14/15)
* Phương pháp tham khảo đề cập đến một phương pháp ELISA thương mại có sẵn.


KẾT QUẢ

Trực quan: Nhìn vào mỗi giếng trên nền trắng (ví dụ như khăn giấy) và ghi lại như rõ ràng hoặc +, ++ hoặc +++ phản ứng.

ELISA reader: Zero, đọc vào không khí. Thiết lập cho các bài đọc bichromatic tại 450 / 620-650 nm.


GIỚI HẠN CỦA THỦ TỤC

kết quả huyết thanh là một sự trợ giúp trong chẩn đoán nhưng không thể được sử dụng như là phương pháp duy nhất của chẩn đoán.



Xử lý sự cố

kiểm soát âm có màu quá mức sau khi phát triển. Lý do:. Rửa không đủ

Correction: rửa mạnh mẽ hơn. Di chuyển chất lỏng quá nhiều từ các giếng bằng cách khai thác đối với một chiếc khăn thấm. Không cho phép các giếng thử nghiệm để

khô.

Giải thích các Test- ELISA đọc

đọc Zero, ELISA trên không khí. Đọc tất cả các giếng nước ở 450 / 620-650 nm. Tích cực - hấp thụ đọc lớn hơn hoặc bằng 0,2 OD đơn vị. Negative - hấp thụ đọc ít hơn 0,2 OD đơn vị.

Một đọc OD tích cực cho thấy rằng bệnh nhân có thể bị nhiễm Toxocara.




ĐẠI MÃ # 35


THẬN TRỌNG

• Đừng đi chệch khỏi các thủ tục quy định khi thực hiện xét nghiệm này. Tất cả các dung dịch pha loãng mẫu, thời gian ủ bệnh / nhiệt độ và rửa đã được tối ưu hóa cho các đặc tính hiệu suất tốt nhất. Độ lệch từ các thủ tục quy định có thể ảnh hưởng đến độ nhạy và độ đặc hiệu của xét nghiệm.

• Đối với trong ống nghiệm chẩn đoán Use Only.
• Không trao đổi chất phản ứng giữa bộ dụng cụ với số lô khác nhau.

• Không sử dụng thuốc thử cả ngoài ngày hết hạn của họ. Ngày hết hạn trên mỗi nhãn thuốc thử. Sử dụng thuốc thử ngoài ngày hết hạn của họ có thể ảnh hưởng đến kết quả.

• microwells chưa sử dụng phải được bảo quản trong túi nạo sấy để bảo vệ chúng khỏi độ ẩm.
• Không sử dụng các giải pháp nếu họ kết tủa hoặc trở thành mây.

Ngoại lệ: Rửa đậm đặc có thể kết tủa d