Reverse-phase chromatography separa

Reverse-phase chromatography separates fatty acids according to their chain length
and the degree of unsaturation (Gunstone et al., 1984). However, this technique could
be prohibitively expensive on a large scale. Preliminary separation of the PUFA-rich galactolipids fraction, followed by urea treatment, can reduce cost by increasing output and, subsequently, reducing the cost per run. Cohen and Cohen (1991) demonstrated the potential of this method for the purifi cation of EPA from the galactolipids
of Porphyridium by successive elution of the transmethylated oil with acetonitrilewater mixtures on C
18 Sep-Pak fi lters. More than 80% of the EPA was eluted in three
fractions whose EPA content ranged from 85.4% to 93.2%. Yet, when reverse phase
chromatography was preceded by urea treatment, 85% of the EPA was recovered at
97% purity. Application of these methods resulted in an EPA concentrate of 97%
purity. Similar methods resulted in an ARA concentrate of 80% purity.
Monodus subterraneus is one of the leading algal sources of EPA. Over 70% of
cellular EPA is concentrated in the galactolipid monogalactosyldiacylglycerol (MGDG),
where it makes up 46% of total fatty acids. As mentioned above, the difference in
polarity between lipid classes allows for a much simpler separation that can serve to
partially remove some of the other PUFAs. Such separation could be accomplished by
washing the lipids over a pad of silica gel. To simulate this method, lipid extracts of
M. subterraneus were washed over silica gel cartridges with solvents of increasing polarities, and the subsequent fractions were then analyzed (Cohen & Cohen, unpublished
data). Transmethylation of the MGDG-rich fraction and urea fractionation of the
resulting methyl esters resulted in EPA of 88% purity (Table 9.E). Additional improvements can be expected by incorporating several genetic modifi cations; for example, the
galactolipids of M. subterraneus are made of two types of molecular species: eukaryoticlike lipids, with mostly 20:5 at both the sn-1 and sn-2 positions, and prokaryotic-like
lipids, containing shorter (C14–C18) fatty acids in the sn-1 position and 20:4 or 20:5
at the sn-2 position. Th ese molecular species originate from two different biosynthetic
pathways (Khozin-Goldberg et al., 2002). Any modifi cation that will increase the share
of eukaryotic-like molecular species at the expense of the prokaryotic-like species would
also increase both the EPA content and its ease of purification.
Table 9.E. Fractionation of the Lipids of Monodus subterraneus by Stepwise Elution on
Silica Gel Cartridges, Transmethylation, and Urea Fractionation. (The process was studied
at a small scale only and was not optimized.)PUFAs, such as ARA, EPA, and DHA, are currently in demand for the treatment
of various diseases and their symptoms. However, the inclusion of a PUFA as a drug
component would require its purifi cation to over 95%. Diff erent sources would, thus,
compete, not only in productivity, concentration, and cost of production, but also
by the ease or diffi culty of separating the PUFA of interest from other, similar fatty
acids. When considering a source of PUFA, one should also consider in which lipids
the PUFA is concentrated and what its relative distribution is, with respect to other
PUFAs.

Kết quả (Việt) 1:

Sắc ký pha đảo ngược phân tách axit béo theo chiều dài của chuỗivà mức độ unsaturation (Gunstone và ctv., 1984). Tuy nhiên, kỹ thuật này có thểđắt tốn trên quy mô lớn. Sơ bộ tách phần tiếp theo điều trị urê, galactolipids PUFA giàu có thể giảm chi phí gia tăng sản lượng, và sau đó, giảm chi phí chạy. Cohen và Cohen (1991) đã chứng minh tiềm năng của phương pháp này cho purifi cation của EPA từ các galactolipidscủa Porphyridium bởi elution kế tiếp của dầu transmethylated với acetonitrilewater hỗn hợp c18 tháng chín-Pak fi lters. Hơn 80% các EPA đã được eluted trong baphần phân đoạn của nội dung EPA có dao động từ 85,4% 93.2%. Tuy nhiên, khi đảo ngược phasắc kí được trước bởi điều trị urê, 85% của EPA đã được phục hồi tại97% tinh khiết. Ứng dụng các phương pháp này đã dẫn đến một tập trung của EPA 97%độ tinh khiết. Phương pháp tương tự đã dẫn đến một tập trung ARA 80% tinh khiết.Monodus subterraneus là một trong những nguồn tảo hàng đầu của EPA. Hơn 70%EPA di động tập trung ở galactolipid monogalactosyldiacylglycerol (MGDG),nơi nó chiếm 46% tổng số axit béo. Như đã đề cập ở trên, sự khác biệt trongphân cực giữa các lớp lipid cho phép cho một ly đơn giản hơn nhiều mà có thể phục vụ đểmột phần loại bỏ một số các PUFAs khác. Chia ly như vậy có thể được thực hiện bởirửa các lipid qua một pad của silica gel. Để mô phỏng các phương pháp này, lipid chiết xuất củaM. subterraneus đã được rửa sạch trong hộp mực với dung môi tăng cực, và các phần phân đoạn tiếp theo là silica gel sau đó phân tích (Cohen & Cohen, chưa được công bốdữ liệu). Transmethylation MGDG nhiều phần nhỏ và urê phân của cáceste methyl kết quả dẫn tới EPA tinh khiết 88% (bàn 9.E). Bổ sung cải tiến có thể dự đoán bằng cách kết hợp một số di truyền bổ cation; Ví dụ, cácgalactolipids của M. subterraneus được làm bằng hai loại phân tử loài: eukaryoticlike lipid, chủ yếu là 20:5 lúc cả hai là vị trí sn-1 và sn-2, và giống như sochất béo, có chứa axit béo (C14-C18) ngắn hơn trong vị trí sn-1 và 20:4 hoặc 20:5tại vị trí sn-2. Th Bắc phân tử loài có nguồn gốc từ hai khác nhau viêmcon đường (Khozin-Goldberg et al., 2002). Bất kỳ cation bổ sẽ tăng chia sẻloài sinh vật nhân chuẩn như phân tử chi phí định giống loài nàocũng làm tăng nội dung EPA và dễ làm sạch.Bàn 9.E. phân subterraneus lipid Monodus bởi Stepwise Elution trênHộp mực silica Gel, Transmethylation và urê phân. (Quá trình nghiên cứulúc nhỏ quy mô chỉ và không được tối ưu hóa.) PUFAs, chẳng hạn như ARA, EPA và DHA, hiện đang có nhu cầu điều trịCác bệnh và triệu chứng của họ. Tuy nhiên, sự bao gồm của một PUFA như một loại thuốcthành phần sẽ yêu cầu cation purifi đến hơn 95%. Khác tiểu nguồn nào, do đó,cạnh tranh, không chỉ trong sản xuất, tập trung và các chi phí sản xuất, mà còndễ hay khó culty tách PUFA lãi suất từ khác, tương tự như béoaxit. Khi xem xét một nguồn PUFA, một trong những cũng nên xem xét trong đó chất béoPUFA là tập trung và phân phối tương đối của nó là gì, đối với khácPUFAs.

Kết quả (Việt) 2:

Ngược pha sắc ký tách axit béo theo chiều dài chuỗi của họ
và mức độ bão hòa (Gunstone et al., 1984). Tuy nhiên, kỹ thuật này có
thể gây tốn kém trên một quy mô lớn. Tách sơ bộ của các phần galactolipids PUFA giàu, tiếp theo là xử lý urê, có thể giảm chi phí bằng cách tăng sản lượng và, sau đó, làm giảm chi phí mỗi lần chạy. Cohen và Cohen (1991) đã chứng minh tiềm năng của phương pháp này cho các cation purifi của EPA từ galactolipids
của Porphyridium bởi rửa giải liên tiếp của dầu transmethylated với hỗn hợp acetonitrilewater trên C
18 Tháng Chín-Pak fi lters. Hơn 80% của EPA đã được rửa giải trong ba
phân số mà nội dung của EPA dao động từ 85,4% đến 93,2%. Tuy nhiên, khi đảo ngược giai đoạn
sắc ký được trước bằng cách xử lý urê, 85% của EPA đã được phục hồi vào
độ tinh khiết 97%. Áp dụng các phương pháp này dẫn đến một tập trung EPA 97%
độ tinh khiết. Phương pháp tương tự dẫn đến một tập trung ARA có độ tinh khiết 80%.
Monodus subterraneus là một trong những nguồn tảo hàng đầu của EPA. Hơn 70% các
tế bào EPA tập trung ở các monogalactosyldiacylglycerol galactolipid (MGDG),
nơi nó chiếm 46% của tổng số axit béo. Như đã đề cập ở trên, sự khác biệt trong
phân cực giữa các lớp lipid cho phép phân tách đơn giản hơn nhiều, có thể phục vụ để
loại bỏ một phần số của PUFA khác. Tách như vậy có thể được thực hiện bằng cách
rửa các chất béo hơn một pad gel silica. Để mô phỏng phương pháp này, chiết xuất lipid của
M. subterraneus được rửa qua hộp gel silica với các dung môi phân cực của ngày càng tăng, và các phần tiếp theo sau đó được phân tích (Cohen & Cohen, chưa công bố
dữ liệu). Transmethylation của phần MGDG giàu và urê phân đoạn của các
kết quả este methyl dẫn EPA% độ tinh khiết 88 (Bảng 9.E). Cải tiến bổ sung có thể được dự kiến bằng cách kết hợp một số cation modifi di truyền; Ví dụ, các
galactolipids của M. subterraneus được làm bằng hai loại của các loài phân tử: lipid eukaryoticlike, với chủ yếu là 20: 5 ở cả sn-1 và sn-2 vị trí, và prokaryote giống như
chất béo, có chứa ngắn (C14-C18 ) axit béo ở vị trí sn-1 và 20: 4 hoặc 20: 5
ở vị trí sn-2. Th loài phân tử ese bắt nguồn từ hai sinh tổng hợp khác nhau
các con đường (Khozin-Goldberg et al., 2002). Bất kỳ cation modifi sẽ tăng cổ phần
của các loại phân tử nhân điển hình như tại các chi phí của các loài prokaryote như sẽ
còn tăng cả nội dung EPA và dễ của nó thanh lọc.
Bảng 9.E. Phân đoạn của Lipid của Monodus subterraneus bởi từng bước Rửa giải về
Silica Gel Hộp, Transmethylation, và urê phân đoạn. (Quá trình này đã được nghiên cứu
tại chỉ có quy mô nhỏ và không được tối ưu hóa.) PUFA, như ARA, EPA và DHA, hiện đang có nhu cầu cho việc điều trị
các bệnh khác nhau và các triệu chứng của họ. Tuy nhiên, sự bao gồm một PUFA như một loại thuốc
thành phần đòi hỏi cation purifi của nó đến hơn 95%. Nguồn erent Diff sẽ, do đó,
cạnh tranh, không chỉ trong sản xuất, tập trung, và chi phí sản xuất, mà còn
bởi sự dễ dàng hoặc gặp khó diffi tách các PUFA quan tâm từ, béo tương tự khác
axit. Khi xem xét một nguồn PUFA, thì cũng cần phải xem xét trong đó lipid
các PUFA là tập trung và phân phối những gì tương đối của nó là, đối với khác với
PUFA.