*[: Significantly high/up regulated;

*[: Significantly high/up regulated; [Y: No change/high but not at significant level; C: Combination; I: Individual.


infectious agents [82]. Probiotics either single or in combination are found to trigger the lysozyme level in teleosts. The enhancement of lysozyme level by probiotics like L. rhamnosus, Carnobacterium maltaromaticum, Carnobacterium divergens in O. mykiss [56,63], L. lactis ssp. lactis, L. mesenteroides and L. sakei in brown trout (Salmo trutta) [44] is reported. Apart from serum lysozyme content, probiotics can also enhance the lysozyme level in skin mucosa of fish [75,76]. Taoka et al. [76] reported signifi- cantly high lysozyme level in skin mucosa by supplementing commercial probiotics through water in comparison to oral supplementation in O. niloticus.
On contrary, dietary supplementation of probiotics like L. sakei in S. trutta [44], L. sakei, L. lactis ssp. lactis, L. mesenteroides, and L. rhamnosus in O. mykiss [45,64], Aeromonas sobria in O. mykiss [48] as well as water supplementation of Bacillus coagulans, B. subtilis and Rhodopseudomonas palustris and Enterococcus faecium in O. niloticus [78,79] failed to elevate lysozyme level. Similarly, Peters et al. [67] failed to detect any specific change in serum and skin
mucosa lysozyme level by feeding A. sobria @108 cells/g feed
and B. thermosphacta @1010 cells/g feed in O. mykiss for a period of
14 days.

4.4. Peroxidase and anti-protease activity

The peroxidase is an important enzyme that utilizes oxidative radicals to produce hypochlorous acid to kill pathogens. During oxidative respiratory burst, it is mostly released by the azurophilic granules of neutrophils. Dietary supplement of probiotic like B. subtilis alone or in combination with L. delbrueckii ssp. lactis for 3 weeks lead to high serum protease activity but failed to enhance

the peroxidase activity of head kidney leucocytes of S. aurata [72]. Similarly, probiotics like E. faecium also elevated the serum perox- idase level in O. niloticus when supplemented through water
@1 107 CFU/ml in every 4 days for 40 days [78]. On contrary to
these findings, probiotics like L. delbrueckii, B. subtilis, Bacillus JB-1, A. sobria, Shewanella putrefaciens (Pdp11) and 51M6 did not affect the protease activity in fish like O. mykiss and S. aurata [48,49,71].
Similarly, anti-protease activities of serum and other body fluids are mainly due to a1 and a2-antiprotease, and a2-macroglobulin and also responsible for preventing proteolytic pathogens [83,84]. Though, these activities are normally high in fish and hardly modulated even after immunization or infection [84], certain pro- biotics can successfully elevate this activity in fish [48,59,73]. Sharifuzzaman and Austin [73] reported significantly high anti- protease activity in O. mykiss within 2 weeks of supplementation
of probiotic belong to Kocuria species (z108 cells/g feed).

4.5. Complement activity

In teleosts, complement system plays a key role in adaptive immune responses and involved in chemotaxis, opsonization, phagocytosis and degradation of pathogens. Complement, a component of the non-specific immune response, may have effector mechanisms like direct killing of microorganisms by lysis [85]. Probiotics can enhance natural complement activity of fish [65,72] and dietary as well as water treatment of many probiotics are often reported to stimulate the piscine complement compo- nents [64,78]. It is also worth noting that non-viable probiotics can stimulate complement components in fish. Choi and Yoon [49] recorded an increased complement activity in O. mykiss

from at 4th week of feeding the heat inactivated probiotics
(Pdp11 or 51M6).

4.6. Cytokines

Cytokines are protein mediators produced by immune cells and contribute to cell growth, differentiation and defense mechanisms of the host [86]. Perusal of available literatures indicate that a number of probiotics can effectively modulate the production of pro-inflammatory cytokines such as interleukin-1 (IL-1), IL-6, IL-
12, tumor necrosis factor a (TNF-a), and gamma interferon (IFN-g)
and anti-inflammatory cytokines such as IL-10 and transforming growth factor b (TGF-b) in many animals [87e89]. Probiotics like Bifidobacterium longum, L. acidophilus, L. lactis, Lactobacillus para- cascei and Lactobacillus plantarum can up regulate the expression of various types of cytokines in various hosts [81,90]. Different strains of LAB can induce regulatory and pro-inflamatory cyto- kines while others probiotics can increase intestinal inflammatory responses [91].
Probiotics like L. rhamnosus, E. faecium and B. subtilis are found to up regulate the pro-inflammatory cytokines like IL-1b1 and TGF- b in the spleen and head kidney of O. mykiss [65]. Similarly, the expression of IL-1b, IL-8, TNF-a, and TGF-b in head kidney of O. mykiss by C. maltaromaticum and C. divergens indicates their possible involvement in anti-inflammatory responses as well [56]. On the other hand, Picchietti et al. [66] recorded down-regulation of Cyclooxygenase 2 (Cox-2) transcripts along with TGF-b and IL-
10 genes by L. delbrueckii supplemented through live carrier in Dicentrarchus labrax. COX-2 promotes intestinal wound healing but its chronic over expression can lead to inflammatory diseases [92]. Therefore, a balanced expression of COX-2 is essential for main- taining the intestinal homeostasis and modulation of the inflam- matory gene Cox-2 could be a key mechanism of anti-inflammatory action of certain probiotics [66].

5. Effect of probiotics on gut immunity

The gut is the organ where probiotics not only establish but also execute their functions including immunostimulaory activity. Therefore, the cross talk between probiotics, epithelial cells and gut immune system warrants high consideration. The immune system of the gut is referred to as gut associated lymphoid tissue (GALT) and the piscine gut immune system is quite different from mammals. Unlike mammals, fish lack Peyer's patches, secretory Ig A and antigen-transporting M cells in the gut [93]. However, many diffusely organized lymphoid cells, macrophages, granulocytes and mucus IgM found in the intestine of fish constitutes the immune function [94e99].
The interaction of non-commensal and probiotics with gut immune system of host is well documented in higher animals [100]. It is believed that probiotics and/or their components/ products interact with GALT to induce immune response. The whole bacteria can't be introduced through the epithelial cells and that only the antigenic particles or degraded products of the bacteria are able to make contact with immune cells [101]. The augmentation of the immune response by probiotic bacteria, a phenomenon similar to that of cholera toxin, may also occur in adherence with GALT and may therefore directly affect immune cells like leukocytes [102]. Fish possess strong antigen uptake capacity in the second gut segment and the uptake and transport of antigens followed by their processing by intraepithelial macro- phages is also reported in carp [103,104].
The effect of probiotics in stimulating the systemic immune responses are now well documented in several fish species but that of local gut immunity is lacking. Limited attempts due to lack of

suitable tools, are made to access the gut immune response following probiotics treatment. Few studies that were conducted in recent times indicate that probiotics can stimulate the piscine gut
immune system with marked increase in the number of Igþ cells
and acidophilic granulocytes (AGs) [66,72,105,106]. Probiotics supplementation at early developmental stages can be helpful in increasing specific AGs subpopulations [105]. The presence of T-cells in the GALT has been documented in many fish [97,107,108] and probiotics can lead to a significant increase in T-cells in fish. In a study, Picchietti et al. [66] recorded increased T lymphocytes in gut without any change in CD4 and CD8a transcript in sea bass (D. labrax) by L. delbrueckii ssp. delbrueckii supplemented through live carriers like artemia and rotifers.
Apart from this, enhancement of gut mucosal lysozyme by C. maltaromaticum and C. divergens [55] and phagocytic activity of mucosal leucocytes by LAB group of probiotics such as L. lactis ssp. lactis, L. mesenteroides and L. sakei [43] are also reported in fish like O. mykiss.


6. Probiotics and gnotobiotic approaches

The detailed mode of action of probiotics has not yet been established in any animals. It is often difficult to derive consensus on a particular pattern of stimulation. Hence gnotobiotic approch can be instrumental in understanding the basic mechanism of probiotic action [109]. Gnotobiotic studies in different animal models indicate the effect of different probiotics on the composi- tion and functioning of reconstituted gut microbiota, difference in their modes of action as well as involvement in both local and systemic immune responses of host [110e112]. Involvement of probiotics in up-regulating the gene expression of cryptdins and matrilysin, the first line of defense mechanism and in lipid absorption and metabolism, such as intestinal fatty acid-binding protein in higher vertebrates are already recorded [111,113e115].
The mono-bacterial association studies in gnotobiotic fish also indicate the microbial up-regulation of serum amyloid A1, C-reac- tive protein, complement component 3, angiogenin 4, glutathione peroxidase, myeloperoxidase as well as glycoprotein production [116e1

Kết quả (Việt) 2:

* [: Fi Signi đáng cao / up quy định; [Y: Không thay đổi / cao nhưng không phải ở mức trọng yếu fi không thể; C: Kết hợp; Cá nhân: I. tác nhân lây nhiễm [82]. Probiotics hoặc đơn lẻ hoặc kết hợp được tìm thấy để kích hoạt các mức lysozyme trong teleosts. Việc nâng cao trình độ lysozyme bằng chế phẩm sinh học như L. rhamnosus, Carnobacterium maltaromaticum, Carnobacterium divergens trong O. mykiss [56,63], L. lactis ssp. lactis, L. mesenteroides và L. sakei trong cá hồi nâu (Salmo trutta) [44] được báo cáo. Ngoài nội dung lysozyme huyết thanh, probiotics cũng có thể nâng cao mức độ lysozyme ở niêm mạc da của fi sh [75,76]. Taoka et al. [76] đã báo cáo fi- đáng mức lysozyme cao trong yếu ở niêm mạc da bằng cách bổ sung probiotics thương mại thông qua nước so với việc bổ sung bằng miệng trong O. niloticus. Ngược lại, bổ sung chế độ ăn uống của probiotics như L. sakei trong S. trutta [44], L. sakei, L. lactis ssp. lactis, L. mesenteroides, và L. rhamnosus trong O. mykiss [45,64], sobria Aeromonas ở O. mykiss [48] cũng như bổ sung nước của Bacillus coagulans, B. subtilis và Rhodopseudomonas palustris và Enterococcus faecium trong O. niloticus [78,79] không nâng mức lysozyme. Tương tự như vậy, Peters et al. [67] không phát hiện bất kỳ thay đổi fi c đặc hiệu trong huyết thanh và da niêm mạc mức lysozyme bằng cách cho ăn A. sobria @ 108 tế bào / g thức ăn chăn nuôi và thức ăn B. thermosphacta @ 1010 tế bào / g trong O. mykiss trong thời gian 14 ngày. 4.4. Peroxidase và hoạt tính kháng protease Các peroxidase là một enzyme quan trọng là sử dụng các gốc oxy hóa để sản xuất axit hypochlorous để tiêu diệt mầm bệnh. Trong giai đoạn bùng hô hấp oxy hóa, nó là chủ yếu được phát hành bởi các hạt azurophilic bạch cầu trung tính. Thức ăn bổ sung probiotic như B. subtilis một mình hoặc kết hợp với L. delbrueckii ssp. lactis trong 3 tuần đưa tới hoạt động protease trong huyết thanh cao nhưng thất bại trong việc tăng cường các hoạt động peroxidase của bạch cầu đầu thận của S. aurata [72]. Tương tự như vậy, chế phẩm sinh học như E. faecium cũng cao huyết thanh perox- mức idase trong O. niloticus khi được bổ sung thông qua nước @ 1 107 CFU / ml trong mỗi 4 ngày cho 40 ngày [78]. Trên trái với những ndings fi, chế phẩm sinh học như L. delbrueckii, B. subtilis, Bacillus JB-1, A. sobria, Shewanella putrefaciens (Pdp11) và 51M6 không ảnh hưởng đến hoạt động protease trong fi sh như O. mykiss và S. aurata [48 , 49,71]. Tương tự như vậy, các hoạt động chống protease của huyết thanh và cơ thể uids fl khác chủ yếu là do a1 và a2-antiprotease, và a2-macroglobulin và cũng có trách nhiệm phòng bệnh phân giải protein [83,84]. Mặc dù, những hoạt động bình thường cao trong fi sh và hầu như không điều chế, ngay cả sau khi chủng ngừa hoặc nhiễm trùng [84], một số kháng sinh có thể trình nâng cao thành công hoạt động này trong fi sh [48,59,73]. Sharifuzzaman và Austin [73] đã báo cáo trong yếu hoạt động protease chống cao đáng trong O. mykiss trong vòng 2 tuần của việc bổ sung probiotic thuộc loài Kocuria (z108 tế bào / g thức ăn). 4.5. Hoạt động bổ sung Trong teleosts, hệ thống bổ thể đóng một vai trò chủ chốt trong phản ứng miễn dịch thích ứng và tham gia vào hoá hướng, opsonization, thực bào và sự suy thoái của các mầm bệnh. Bổ sung, một thành phần của các phản ứng miễn dịch không đặc hiệu fi c, có thể có các cơ chế effector như trực tiếp giết chết các vi sinh vật do ly giải [85]. Probiotics có thể tăng cường các hoạt động bổ sung tự nhiên của fi sh [65,72] và chế độ ăn uống cũng như xử lý nước của nhiều chế phẩm sinh học thường được báo cáo để kích thích piscine bổ sung hợp phần [64,78]. Nó cũng đáng chú ý là chế phẩm sinh học không khả thi có thể kích thích các thành phần bổ sung trong fi sh. Choi Yoon và [49] ghi một hoạt động bổ sung tăng trong O. mykiss từ ở tuần thứ 4 cho ăn các chế phẩm sinh nhiệt bất hoạt (Pdp11 hoặc 51M6). 4.6. Cytokines Cytokines là người hòa giải protein được sản xuất bởi các tế bào miễn dịch và đóng góp vào sự tăng trưởng tế bào, sự khác biệt và cơ chế phòng vệ của các máy chủ [86]. Nhìn chăm chú của nền văn học có sẵn cho thấy rằng một số chế phẩm sinh học có hiệu quả có thể điều chỉnh việc sản xuất chuyên nghiệp trong các cytokine ammatory fl như interleukin-1 (IL-1), IL-6, il- 12, yếu tố hoại tử khối u một (TNF-a), và gamma interferon (IFN-g) và anti-in fl ammatory cytokine như IL-10 và chuyển yếu tố b tăng trưởng (TGF-b) ở nhiều loài động vật [87e89]. Probiotics như Bi fi dobacterium longum, L. acidophilus, L. lactis, Lactobacillus cascei para- và Lactobacillus plantarum lên có thể điều hòa sự biểu hiện của các loại khác nhau của các cytokine trong các máy chủ khác nhau [81,90]. Chủng khác nhau của LAB có thể gây ra quy định và pro-in fl kines cyto- thuộc về ái tình trong khi những người khác probiotics có thể làm tăng đường ruột trong phản ứng ammatory fl [91]. Probiotics như L. rhamnosus, E. faecium và B. subtilis được tìm thấy để tăng tiết các cytokine trong fl ammatory như IL-1b1 và TGF- b trong lá lách và thận đầu của O. mykiss [65]. Tương tự như vậy, sự biểu hiện của IL-1b, IL-8, TNF-a, và TGF-b trong thận đầu của O. mykiss bởi C. maltaromaticum và C. divergens chỉ ra khả năng tham gia của họ trong việc phòng chống trong phản ứng ammatory fl cũng [56] . Mặt khác, Picchietti et al. [66] ghi xuống điều chỉnh của cyclooxygenase 2 (Cox-2) bảng điểm cùng với TGF-b và il- gen 10 bởi L. delbrueckii bổ sung thông qua các nhà cung cấp trực tiếp trong Dicentrarchus labrax. COX-2 thúc đẩy vết thương lành nhưng ruột mãn tính của mình qua biểu hiện có thể dẫn đến các bệnh ammatory fl [92]. Vì vậy, một biểu thức cân bằng của COX-2 là cần thiết để duy TaiNing các homeostasis ruột và điều chế trong fl am- gen matory Cox-2 có thể là một cơ chế quan trọng của anti-in fl ammatory hành động của một số chế phẩm sinh học [66]. 5. Ảnh hưởng của chế phẩm sinh học về miễn dịch đường ruột Ruột là cơ quan nơi probiotics không chỉ thiết lập mà còn thực hiện chức năng của mình bao gồm cả hoạt động immunostimulaory. Do đó, nói chuyện qua giữa probiotics, các tế bào biểu mô ruột và đảm bảo hệ thống miễn dịch xem xét cao. Hệ thống miễn dịch của ruột được gọi là ruột kết hợp mô bạch huyết (GALT) và hệ thống miễn dịch piscine ruột là khá khác nhau từ động vật có vú. Không giống như động vật có vú, fi sh thiếu các bản vá lỗi của Peyer, tiết Ig A và các tế bào kháng nguyên M-vận chuyển trong ruột [93]. Tuy nhiên, nhiều diffusely tổ chức tế bào lympho, các đại thực bào, bạch cầu hạt và chất nhầy IgM tìm thấy trong ruột của fi sh cấu thành chức năng miễn dịch [94e99]. Sự tương tác của phi commensal và chế phẩm sinh học với hệ thống miễn dịch đường ruột của chủ nhà cũng được ghi nhận ở động vật bậc cao [100 ]. Người ta tin rằng probiotics và / hoặc các thành phần của họ / các sản phẩm tương tác với GALT để tạo ra phản ứng miễn dịch. Toàn bộ vi khuẩn không thể được giới thiệu thông qua các tế bào biểu mô và chỉ có các kháng nguyên hạt hoặc các sản phẩm thoái hóa của các vi khuẩn có khả năng tiếp xúc với các tế bào miễn dịch [101]. Thì việc tăng đáp ứng miễn dịch của vi khuẩn probiotic, một hiện tượng tương tự như của độc tố bệnh tả, cũng có thể xảy ra trong sự trung thành với GALT và do đó có thể trực tiếp ảnh hưởng đến các tế bào miễn dịch như bạch cầu [102]. Cá có năng lực hấp thu kháng nguyên mạnh mẽ trong phân khúc ruột thứ hai và sự hấp thu và vận chuyển kháng nguyên theo sau chế biến của họ bởi thực khuẩn vĩ mô trong biểu mô cũng được báo cáo trong cá chép [103104]. Hiệu quả của chế phẩm sinh học trong việc kích thích các phản ứng miễn dịch hệ thống bây giờ cũng được ghi nhận ở một số loài fi sh nhưng mà khả năng miễn dịch đường ruột địa phương còn thiếu. Nỗ lực hạn chế do thiếu các công cụ thích hợp, được làm để truy cập phản ứng miễn dịch đường ruột sau probiotics điều trị. Một vài nghiên cứu đã được tiến hành trong thời gian gần đây chỉ ra rằng probiotics có thể kích thích các piscine ruột hệ thống miễn dịch với sự gia tăng đáng kể về số lượng các tế bào Igþ và bạch cầu hạt -tính ưa chua (AGS) [66,72,105,106]. Bổ sung Probiotics trong các giai đoạn phát triển ban đầu có thể hữu ích trong việc tăng fi Speci c AGS subpopulations [105]. Sự hiện diện của các tế bào T trong GALT đã được ghi nhận ở nhiều fi sh [97107108] và chế phẩm sinh học có thể dẫn đến một trong yếu không thể tăng T-tế bào trong fi sh. Trong một nghiên cứu, Picchietti et al. [66] ghi lại tăng tế bào lympho T trong ruột mà không có bất kỳ sự thay đổi trong CD4 và CD8a bạ bằng chẽm (D. labrax) bởi L. delbrueckii ssp. delbrueckii bổ sung thông qua các tàu sân bay trực tiếp như artemia và luân trùng. Ngoài ra, tăng cường niêm mạc ruột lysozyme bởi C. maltaromaticum và C. divergens [55] và hoạt động thực bào của các tế bào bạch cầu niêm mạc của nhóm LAB của probiotics như L. lactis ssp. lactis, L. mesenteroides và L. sakei [43] cũng được báo cáo trong fi sh như O. mykiss. 6. Probiotics và gnotobiotic phương pháp tiếp cận Phương thức hành động chi tiết của probiotic vẫn chưa được thành lập ở bất kỳ động vật. Nó thường được dif fi khăn để lấy được sự đồng thuận về một mô hình cụ thể của kích thích. Do đó approch gnotobiotic có thể là công cụ trong việc tìm hiểu cơ chế cơ bản của hành động probiotic [109]. Nghiên cứu Gnotobiotic trong các mô hình động vật khác nhau cho thấy tác dụng của chế phẩm sinh học khác nhau về sự composi- và hoạt động của hệ vi sinh vật đường ruột hoàn nguyên, sự khác biệt trong phương thức của họ về hành động cũng như sự tham gia ở cả hai phản ứng miễn dịch của địa phương và hệ thống của các máy chủ [110e112]. Sự tham gia của probiotics trong up-điều hoà biểu hiện gen của cryptdins và matrilysin, dòng fi đầu tiên của cơ chế bảo vệ và hấp thu và chuyển hóa lipid, chẳng hạn như béo ruột acid-binding protein trong động vật có xương cao hơn đã được ghi nhận [111,113e115]. Các mono- nghiên cứu đến việc vi khuẩn trong gnotobiotic fi sh cũng chỉ ra các vi khuẩn lên quy định của serum amyloid A1, protein C-chính kịp phản ứng, bổ sung hợp phần 3, 4 angiogenin, glutathione peroxidase, myeloperoxidase cũng như glycoprotein sản xuất [116e1