To detect active substances present

To detect active substances present in very small quantities in the extracts, a concentration step is usually required and is based on evaporation of the solvent in vacuo. It is advised to extract and evaporate at low temperature not to destroy any thermolabile constituent. Unfortunately, this concentration step often results in precipitation or co-precipitation
thereby hampering proper performance and interpretation of the bioassay. Introducing pH differences may further enhance separation of acid, neutral and basic constituents. Of the many
extraction schemes that have been published, the method proposed byMitscher et al. (1972)and later adapted byIeven et al. (1979)can be considered as a practical standard since it
offers a logical, low-cost, feasible and highly performing starting approach (Fig. 1). In some instances and if logistics permit, a ‘primary’ fractionation of the total extract can be carried out prior to testing to separate polar from less-polar constituents by sequential use of solvents from high to low polarity (Vanden Berghe and Vlietinck, 1991). This permits better discrimination between fractions that exhibit aspecific activity or cytotoxicity and fractions that show selective antimicrobial activity. This ‘primary’ fractionation scheme may also contain dereplication steps to avoid re-isolation of known compounds; for example, acidic polysaccharides and tannins frequently produce a broad, non-selective activity against several micro-organisms, particularly viruses. It may therefore be appropriate to use acidic polysaccharide-free and/or tannin-free extracts, which can easily be obtained respectively by precipitation after adding 50% ethanol and/or chromatography on a polyamide 6 or 8 column, using water and methanol as eluents (Cordell et al., 1993).

Kết quả (Việt) 2:

Để phát hiện các chất hoạt động hiện nay với số lượng rất nhỏ trong các chất chiết xuất, một bước tập trung thường được yêu cầu và được dựa trên sự bay hơi của dung môi trong chân không. Nó được khuyên nên giải nén và bay hơi ở nhiệt độ thấp không để tiêu diệt bất kỳ thành phần thermolabile. Thật không may, bước nồng độ này thường dẫn đến kết tủa hoặc đồng kết tủa
do đó cản trở thực hiện đúng và giải thích các xét nghiệm sinh học. Giới thiệu sự khác nhau pH có thể tiếp tục tăng cường tách các thành phần acid, trung tính và cơ bản. Trong số nhiều
phương án khai thác đã được xuất bản, phương pháp đề xuất byMitscher et al. (1972) và sau đó chuyển byIeven et al. (1979) có thể được coi như một tiêu chuẩn thực tế vì nó
cung cấp một hợp lý, chi phí thấp, có tính khả thi cao và thực hiện phương pháp bắt đầu (Hình. 1). Trong một số trường hợp và nếu hậu cần giấy phép, một phân đoạn 'chính' của tổng chiết xuất có thể được thực hiện trước khi thử nghiệm để phân cực từ các thành phần ít phân cực bằng cách sử dụng tuần tự các dung môi từ cao đến cực thấp (Vanden Berghe và Vlietinck, 1991) . Điều này cho phép phân biệt đối xử tốt hơn giữa các phân số mà biểu aspecific hoạt động hoặc gây độc tế bào và các thành phần cho thấy hoạt tính kháng khuẩn chọn lọc. Đề án phân đoạn 'chính' này cũng có thể chứa các bước dereplication để tránh tái phân lập các hợp chất được biết đến; Ví dụ, polysaccharides có tính axit và tannin thường xuyên tạo ra một hoạt động rộng, không chọn lọc đối với một số vi sinh vật, đặc biệt là virus. Do đó nó có thể thích hợp để sử dụng tính axit polysaccharide-miễn phí và / hoặc tannin-free chiết xuất, có thể dễ dàng thu được tương ứng kết tủa sau khi thêm 50% ethanol và / hoặc sắc ký trên một polyamide 6 hoặc 8 cột, sử dụng nước và methanol như eluents (Cordell et al., 1993).