2.6 Cryopreservation and storage of

2.6 Cryopreservation and storage of cell lines
Cells can be unstable when in culture for long periods, exhibiting alterations in their morphology, function, growth pattern, and karyotype. Animal cells show in vitro changes related to age and some cultures can suffer spontaneous transformation, showing altered growth or changes in functional characteristics. When adequately frozen, cells can be preserved for long periods without alterations in viability or in other characteristics. Thus, a cell bank, consisting of frozen and stored cell lines, makes it possible to maintain the cultures as a renewable source. This procedure enables repeated cultures to be performed with cells having equivalent characteristics, with consistent passage numbers. Cells stock also minimizes the risk of losing a culture due to accidents such as contamination by microorganisms or other cell lines, or due to failure of equipment such as CO2 incubators. Culture conditions influence the survival of cells submitted to cryopreservation. To be frozen, cells should be in an active growth phase, with a viability greater than 90% and free of contaminants. The optimal cryopreservation conditions are different for each cell line. When a cell is exposed to low temperatures, ice crystals are generally formed and can disrupt the cell membrane, causing death. Therefore, cells should be treated with a cryoprotector to support the freezing and thawing processes. The optimal cell concentration in a suspension of cryoprotector medium depends on the cell type and is determined empirically, but is generally within the range of 1 3 106 to 1 3 107 cells/ml. When added to medium at concentrations between 5 and 10% (v/v), cryoprotectors such as glycerol or dimethylsulfoxide (DMSO) affect membrane permeability, allowing water release from the cell interior during cooling. Cryoprotectors decrease the freezing point, and ice crystals start to be formed at –58C: Water efflux plays a key role in the freezing process. With cell dehydration, occurring at between –58C and –158C, ice crystals are formed around the cells and not inside them. The cooling velocity is also critical and should be low (about 18C/min). Freezing conditions should minimize crystal formation in the cell interior, preventing lysis. For cells cultivated in the presence of serum, the cryopreservation medium should also contain fetal bovine serum to protect cells from the stress associated with the freezing and thawing processes. Generally, serum is added at concentrations above 20%, and can attain 90% of volume of the cryopreservation medium. Frequently cells are stored immersed in liquid nitrogen at –1968C.

Kết quả (Việt) 1:

2.6 cryopreservation và lưu trữ di động dòng Tế bào có thể được không ổn định khi trong văn hóa trong thời gian dài, trưng bày các thay đổi trong hình Thái, chức năng, mô hình tăng trưởng và karyotype của họ. Động vật tế bào Hiển thị trong ống nghiệm thay đổi liên quan đến tuổi và một số nền văn hóa có thể bị biến đổi tự phát, phát triển đang hiện thay đổi hoặc thay đổi trong chức năng đặc điểm. Khi đầy đủ bị đóng băng, tế bào có thể được giữ lại trong thời gian dài mà không có thay đổi trong khả năng hoặc đặc điểm khác Vì vậy, một ngân hàng di động, bao gồm dòng tế bào đông lạnh và lưu trữ, làm cho nó có thể duy trì các nền văn hóa như là một nguồn tái tạo. Thủ tục này cho phép lặp đi lặp lại nền văn hóa được thực hiện với các tế bào có đặc điểm tương đương, với số lượng phù hợp thông qua. Tế bào cổ cũng giảm thiểu nguy cơ mất một nền văn hóa do tai nạn như ô nhiễm bởi vi sinh vật hoặc dòng tế bào khác, hoặc do sự thất bại của các thiết bị như máy ấp trứng CO2. Văn hóa điều kiện ảnh hưởng đến sự tồn tại của tế bào gửi đến cryopreservation. Để được đông lạnh, tế bào phải ở trong một giai đoạn tăng trưởng hoạt động, với một khả năng lớn hơn 90% và không có chất gây ô nhiễm. Các điều kiện tối ưu cryopreservation là khác nhau cho mỗi dòng tế bào. Khi một tế bào được tiếp xúc với nhiệt độ thấp, tinh thể nước đá được hình thành nói chung và có thể phá vỡ màng tế bào, gây ra cái chết. Vì thế, tế bào cần được điều trị với một cryoprotector để hỗ trợ các quá trình đóng băng và tan. Nồng độ di động tối ưu trong một hệ thống treo của phương tiện truyền thông cryoprotector phụ thuộc vào loại di động và được xác định empirically, nhưng nói chung là trong phạm vi 1 3 106 đến 1 3 107 tế bào/ml. Khi thêm vào phương tiện truyền thông ở nồng độ giữa 5 và 10% (v/v), cryoprotectors chẳng hạn như nhóm glycerol hoặc dimethylsulfoxide (DMSO) ảnh hưởng đến màng tế bào thấm, cho phép nước phát hành từ bên trong tế bào trong quá trình làm mát. Cryoprotectors giảm điểm đóng băng, và tinh thể nước đá bắt đầu được hình thành tại –58C: nước efflux đóng một vai trò quan trọng trong quá trình đóng băng. Với di động mất nước, xảy ra tại giữa –58 C và –158C, tinh thể nước đá được hình thành xung quanh các tế bào và không phải bên trong chúng. Tốc độ làm mát cũng là quan trọng và cần được thấp (khoảng 18C/phút). Điều kiện đóng băng nên giảm thiểu tinh thể hình thành trong tế bào nội thất, ngăn ngừa lysis. Tế bào trồng sự hiện diện của huyết thanh, Trung cryopreservation cũng nên chứa thai nhi bò huyết thanh để bảo vệ tế bào khỏi sự căng thẳng liên quan đến các quá trình đóng băng và tan. Nói chung, huyết thanh được thêm ở nồng độ trên 20%, và có thể đạt được 90% tổng khối lượng của các vật chứa cryopreservation. Thường xuyên các tế bào được lưu trữ đắm mình trong nitơ lỏng tại –1968C.

Kết quả (Việt) 2:

2.6 bảo quản lạnh và lưu trữ các dòng tế bào
Các tế bào có thể không ổn định khi trong văn hóa trong thời gian dài, trưng bày những thay đổi trong mình hình thái, chức năng, mô hình tăng trưởng, và nhiễm sắc thể. Tế bào động vật cho thấy những thay đổi trong ống nghiệm liên quan đến tuổi tác và một số nền văn hóa có thể bị biến đổi tự phát, cho thấy tăng trưởng thay đổi hoặc thay đổi đặc tính chức năng. Khi đông lạnh đầy đủ, các tế bào có thể được bảo quản trong thời gian dài mà không có sự thay đổi trong khả năng tồn tại hoặc trong các đặc điểm khác. Do đó, một ngân hàng tế bào, bao gồm các dòng tế bào đông lạnh và lưu trữ, làm cho nó có thể để duy trì các nền văn hóa như là một nguồn năng lượng tái tạo. Thủ tục này cho phép lặp lại nền văn hóa được thực hiện với các tế bào có đặc điểm tương đương, với số đoạn nhất quán. Tế bào cổ phiếu cũng giảm thiểu nguy cơ mất một nền văn hóa do tai nạn như ô nhiễm bởi các vi sinh vật hoặc các dòng tế bào khác, hoặc do thất bại của các thiết bị như tủ ấm CO2. Điều kiện văn hóa ảnh hưởng đến sự tồn tại của các tế bào trình bảo quản lạnh. Để được đông lạnh, các tế bào phải ở trong một giai đoạn tăng trưởng tích cực, với một khả năng lớn hơn 90% và các chất bẩn. Các điều kiện bảo quản lạnh tối ưu là khác nhau cho mỗi dòng tế bào. Khi một tế bào được tiếp xúc với nhiệt độ thấp, tinh thể nước đá thường được hình thành và có thể phá vỡ màng tế bào, gây ra cái chết. Do đó, các tế bào cần được điều trị với một cryoprotector để hỗ trợ các quy trình đóng băng và tan băng. Nồng độ tế bào tối ưu trong một hệ thống treo của trung cryoprotector phụ thuộc vào loại tế bào và được xác định bằng thực nghiệm, nhưng nói chung là trong phạm vi của 1 3 106-1 3 107 tế bào / ml. Khi thêm vào trung ở nồng độ từ 5 đến 10% (v / v), cryoprotectors như glycerol hoặc Dimethylsulfoxide (DMSO) ảnh hưởng đến tính thấm của màng, cho phép phát hành nước từ bên trong tế bào trong quá trình làm mát. Cryoprotectors giảm mức đóng băng, và các tinh thể nước đá bắt đầu được hình thành ở -58C: tuôn Nước đóng một vai trò quan trọng trong quá trình đóng băng. Với tế bào mất nước, xảy ra vào khoảng -58C và -158C, tinh thể đá được hình thành xung quanh các tế bào và không bên trong chúng. Vận tốc làm mát cũng là rất quan trọng và cần được thấp (khoảng 18C / phút). Điều kiện đóng băng nên giảm thiểu sự hình thành tinh thể trong nội bào, ngăn ngừa sự ly giải. Đối với các tế bào canh tác trong sự hiện diện của huyết thanh, các phương tiện bảo quản lạnh cũng nên chứa huyết thanh bào thai bò để bảo vệ tế bào khỏi sự căng thẳng liên quan đến các quá trình đóng băng và tan băng. Nói chung, huyết thanh được thêm vào ở nồng độ trên 20%, và có thể đạt được 90% khối lượng của môi trường bảo quản lạnh. Thường xuyên các tế bào đang được lưu trữ đắm mình trong nitơ lỏng ở -1968C.