6.1 Experimental6.1.1 Reagents, sta

6.1 Experimental
6.1.1 Reagents, standards and solutions
Diatomaceous earth (suitable for most routine filtrations, ≥95% SiO2 basis,
powder); diethyl ether (anhydrous, ≥99.7%), sodium bicarbonate (powder, ≥99.5%),
sodium chloride (≥98%); potassium chloride (≥99%); potassium hydroxide (≥85%
KOH basis, pellets); sulphuric acid (99%), disodium phosphate dibasic hydrate
(≥99%); sodium phosphate monobasic monohydrate (≥99.5%); bovine serum albumin
(BSA; 30% in 0.85% sodium chloride), alcalase solution (BioChemika, ≥ 5 U/g) and
polyamide 6 (for column chromatography) were purchased from Sigma-Aldrich
(Steinheim, Germany). Deionized water, prepared using a Barnstead Easypur LF
(Dubuque, Iowa, USA) water purification system, was used in all experiments.
Buffer solution for the enzymatic hydrolysis was prepared by taking sodium
chloride (8.6 g), potassium chloride (0.42 g), disodium phosphate dibasic hydrate
(0.97 g), sodium phosphate monobasic monohydrate (0.04 g) in 1 l volumetric flask
and making the volume up to the mark with distilled water. Enzyme solution was then
prepared by taking 1 ml of alcalase solution (≥ 5 U/g) in a 12.5 ml of the buffer in a
volumetric flask and making the volume up to the mark with distilled water.
6.1.2 Validation of instrumental method
HPLC-UV, HPLC-CEAD and HPLC-MS: Standard calibration solutions were
run thrice a week to obtain/compare the calibration functions in the observed
concentration range. Inter-day and intra-day repeatabilities were checked by injecting
20 µl of a standard solution containing 0.19 µg/ml of α-LA in acetonitrile/water
(30/70; v/v).
6.1.3 Sample preparation methods
Different extraction and hydrolysis procedures were selected and/or developed
to determine the best suited method for the analysis of α-LA in different foodstuffs
and dietary supplements. The optimum conditions determined for each work-up were
then compared for recoveries. An overview of these sample preparation methods is
shown in Figure 19.

Kết quả (Việt) 1:

6.1 thử nghiệm6.1.1 hoá chất, tiêu chuẩn và giải phápTảo cát trái đất (thích hợp cho hầu hết thường filtrations, ≥95% SiO2 sở,bột); diethyl ether (Khan, ≥99.7%), natri bicarbonate (bột, ≥99.5%)clorua natri (≥98%), kali clorua (≥99%); kali hydroxit (≥85%KOH sở, dạng viên); axit sunfuric (99%), disodium phosphate dibasic hydrat(≥99%); sodium phosphate monobasic monohydrat (≥99.5%); bò huyết thanh albumin(BSA; 30%, 0,85% natri clorua), giải pháp alcalase (BioChemika, ≥ 5 U/g) vàPoliamit 6 (đối với sắc ký cột) đã được mua từ Sigma-Aldrich(Steinheim, Đức). Deionized nước, chuẩn bị bằng cách sử dụng một Easypur Barnstead LFHệ thống lọc nước (Dubuque, Iowa, Hoa KỲ), được sử dụng trong tất cả các thí nghiệm.Giải pháp đệm cho các enzym thủy phân đã được chuẩn bị bằng cách dùng natriclorua (8,6 g), kali clorua (0,42 g), disodium phosphate dibasic hydrat(0,97 g), natri phosphat monobasic monohydrat (0,04 g) trong flask thể tích 1 lvà cách làm cho khối lượng lên đến đánh dấu với nước cất. Giải pháp enzym là sau đóchuẩn bị bằng cách dùng 1 ml alcalase giải pháp (≥ 5 U/g) trong một ml 12,5 của bộ đệm trong mộtthể tích bình và làm cho khối lượng lên đến đánh dấu với nước cất.6.1.2 xác nhận của công cụ phương phápHệ HPLC UV, HPLC-CEAD và HPLC-MS: giải pháp hiệu chuẩn tiêu chuẩn đãchạy ba lần một tuần để có được/so sánh các chức năng hiệu chỉnh trong các quan sátphạm vi tập trung. Giữa hai ngày và intra-ngày repeatabilities đã được kiểm tra bằng cách tiêm20 ml của một giải pháp tiêu chuẩn có chứa 0.19 µg/ml của α-LA acetonitrile/nước(30/70; v/v).6.1.3 các phương pháp chuẩn bị mẫuThủ tục khai thác và thủy phân khác nhau đã được lựa chọn và/hoặc phát triểnđể xác định các phương pháp phù hợp nhất cho việc phân tích các α-LA trong thực phẩm khác nhauvà chế độ ăn uống bổ sung. Điều kiện tối ưu được xác định cho mỗi công việc lênsau đó so sánh để phục hồi. Tổng quan về các phương pháp chuẩn bị mẫu làHiển thị trong hình 19.

Kết quả (Việt) 2:

6.1 nghiệm
6.1.1 Thuốc thử, tiêu chuẩn và giải pháp
đất Diatomaceous (phù hợp cho hầu hết các filtrations thói quen, ≥95% cơ sở SiO2,
bột); diethyl ether (khan, ≥99.7%), sodium bicarbonate (bột, ≥99.5%),
natri clorua (≥98%); kali clorua (≥99%); kali hydroxit (≥85%
cơ sở KOH, bột viên); axit sulfuric (99%), disodium phosphate dibasic hydrate
(≥99%); sodium phosphate monohydrate lần ba dic (≥99.5%); albumin huyết thanh bò
(BSA; 30% ở 0,85% natri clorua), giải pháp Alcalase (BioChemika, ≥ 5 U / g) và
polyamide 6 (dùng cho sắc ký cột) được mua từ Sigma-Aldrich
(Steinheim, Đức). Nước khử Ion hóa, chuẩn bị sử dụng một Barnstead Easypur LF
(Dubuque, Iowa, Mỹ) Hệ thống lọc nước, đã được sử dụng trong tất cả các thí nghiệm.
Dung dịch đệm cho quá trình thủy phân enzyme đã được chuẩn bị bằng cách lấy natri
clorua (8,6 g), kali clorua (0,42 g), disodium phosphate hydrate bazơ
(0,97 g), sodium phosphate lần ba dic monohydrat (0,04 g) trong 1 lít thể tích bình
và làm cho khối lượng đến vạch bằng nước cất. Giải pháp enzym sau đó đã được
chuẩn bị bằng cách lấy 1 ml Alcalase giải pháp (≥ 5 U / g) trong 12,5 ml của bộ đệm trong một
bình định mức và làm cho khối lượng lên đến vạch bằng nước cất.
6.1.2 Xác nhận của phương pháp cụ
HPLC-UV, HPLC-CEAD và HPLC-MS: giải pháp hiệu chuẩn chuẩn được
chạy ba lần một tuần để có được / so sánh các chức năng hiệu chuẩn trong các quan sát
khoảng nồng độ.
Inter-ngày và trong ngày repeatabilities đã được kiểm tra bằng cách tiêm 20 ml dung dịch chuẩn chứa 0,19 mg / ml α-LA trong acetonitrile / nước
(30/70; v / v).
6.1.3 phương pháp chuẩn bị mẫu
khác nhau khai thác và thủy phân các thủ tục đã được lựa chọn và / hoặc phát triển
để xác định các phương pháp thích hợp nhất cho việc phân tích các α-LA trong thực phẩm khác nhau
và bổ sung chế độ ăn uống. Các điều kiện tối ưu xác định cho từng công việc đó đã được
sau đó so sánh để phục hồi. Tổng quan về các phương pháp chuẩn bị mẫu được
thể hiện trong hình 19. Phương pháp chuẩn bị 3 mẫu khác nhau thủ tục khai thác và thủy phân đã được lựa chọn và / hoặc phát triển để xác định các phương pháp thích hợp nhất cho việc phân tích các α-LA trong thực phẩm khác nhau và bổ sung chế độ ăn uống. Các điều kiện tối ưu xác định cho từng công việc đó đã được sau đó so sánh để phục hồi. Tổng quan về các phương pháp chuẩn bị mẫu được thể hiện trong hình 19. Phương pháp chuẩn bị 3 mẫu khác nhau thủ tục khai thác và thủy phân đã được lựa chọn và / hoặc phát triển để xác định các phương pháp thích hợp nhất cho việc phân tích các α-LA trong thực phẩm khác nhau và bổ sung chế độ ăn uống. Các điều kiện tối ưu xác định cho từng công việc đó đã được sau đó so sánh để phục hồi. Tổng quan về các phương pháp chuẩn bị mẫu được thể hiện trong hình 19.

Kết quả (Việt) 3:

6 giờ thí nghiệm.6.1.1 Kit, tiêu chuẩn và giải pháp (áp dụng cho hầu hết các bộ lọc thông thường, một nhóm SiO2 95%,Bột); ether (Khan, một 99.7%), natri bicacbonat (bột, một 99.5%),Natri clorua (một 98%); kali clorua (một 99%); Kali hiđroxit (một 85%KOH Foundation, hạt); Sulfat (99%), phosphate natri hydrat - dihydro -(một 99%); Sodium phosphate monohydrat (một 99.5%); bò albumin huyết thanh(bò albumin huyết thanh; 0.85% natri clorua oa trữ đồ ăn cắp), dung dịch kiềm (biochemika, một năm U / g) và 6 (Cột sắc ký) từ Sigma Aldrich mua(Steinheim, Đức). nước, sử dụng Barnes Ted easypur L.f. sẵn sàng(Dubuque, Iowa, Mỹ) của hệ thống lọc nước, ở tất cả các thử nghiệm sử dụng.Sử dụng hệ thống pháp luật bị enzyme giải đệm natriNatri clorua (8.6 gam), kali clorua (0.42 gam), phosphate natri hydrat - dihydro -(0.97 gam), natri monohydrat (0.04 gam) ở 1 l dung chai.Dùng nước cất để đạt giá trị khối lượng lớn nhất.Enzyme SolutionsProtease kiềm giải để chuẩn bị 1 ml (một năm U/g) trong một 12.5 ml là một vùng đệmDung lượng chai, dùng nước cất để đạt giá trị khối lượng lớn nhất.6.1.2 xác minh cụ thểSắc ký lỏng hiệu năng cao, hiệu quả cao sắc ký lỏng - mass spectrometry: HPLC-CEAD và dung dịch chuẩnĐiều hành một tuần 3 lần điều chỉnh chức năng quan sát được / so sánhNồng độ Range.Ngày và ban ngày lặp đi lặp lại tiến hành tiêmMột tiêu chuẩn µ gam / ml dung dịch chứa 0.19 của α - la trong acetonitrile / nước 20 µ L(30 / 70; volume / Volume).Phương pháp mẫu chuẩn bị 6.1.3Khác với chương trình giải cứu thủy phân lựa chọn và / hoặc phát triển.Khảo nghiệm khác trong thực phẩm α - la phù hợp nhất.Và bữa ăn hàng ngày.Mọi việc chắc chắn điều kiện tốt nhấtSau đó so sánh tỷ lệ tái chế.Những mẫu of là phương pháp chuẩn bịNhư biểu đồ những sê - 19.